Биотесты на основе ферментных систем для оценки токсического действия ксенобиотиков на объекты ветеринарно-санитарного и экологического контроля

• Автор: Лавина, Светлана Алексеевна
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 338 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

Условные обозначения.

Введение.

Часть I. Литературный обзор

Глава 1. Ферменты, их значение в организме и роль в токсико динамике

ксенобиотиков.

Глава 2. Методы определения активности ферментов.

Глава 3. Влияние токсических веществ на ферменты.

3.1. Фосфорорганические соединения.

3.2. Синтетические пиретроиды

3.3. Соединения тяжелых металлов.

Глава 4. Современные методы изучения механизмов токсического действия ксенобиотиков
Глава 5. Инфузории ТеиаЪутепа руготня как перспективный тесторганизм для оценки состояния объектов ветеринарно
санитарного и экологического контроля.
Часть П. Собственные исследования
Глава 1. Материалы и методы исследований.
Глава 2. Совершенствование и разработка методик определения удельной каталитической активности ферментов в различных биологических материалах.
2.1. Разработка методики определения удельной каталитической активности фосфатаз в органах и тканях животных
2.2. Разработка методики определения удельной каталитической активности оксидазы в органах и тканях животных.
2.3. Адаптация методик определения удельной каталитической активности ферментов для работы с культурой инфузорий ТейвЬутепа рупЬпт
2.3.1. Получение ферментативных препаратов из культуры инфузорий ii.
2.3.2. Определение удельной каталитической активности 1нафтилацетатэстеразы в культуре инфузорий
ii
2.3.3. Определение удельной каталитической активности фосфатаз
в культуре инфузорий ii.
2.3.4. Определение удельной каталитической активности оксидазы
в культуре инфузорий ii.
Глава 3. Фоновые уровни удельной каталитической активности ферментов в органах высших животных и культуре инфузорий
Т ii.
Глава 4. Влияние токсикантов на ферментативную активиосгь органов
и тканей высших животных
4.1. Влияние ДЦВФ на ферменты высших животных.
4.1.1. Влияние ДЦВФ на ферменты i vi
4.1.2. Влияние ДДВФ на ферментативную активность органов белых
мышей.
4.2. Влияние перметрина на ферменты высших животных.
4.2.1. Влияние перметрина на ферменты в экспериментах i vi
4.2.2. Влияние перметрина на ферментативную активность органов
белых мышей.
4.3. Влияние свинца ацетата на ферменты высших животных
4.3.1. Влияние свинца ацетата на ферменты высших животных i 9 vi.
4.3.2. Анализ токсического действия свинца ацетата в модельных острых опытах на белых мышах
4.3.3. Анализ токсического действия свинца ацетата в хронических экспериментах на белых крысах 2
4.4. Влияние кадмия нитрата на ферменты высших животных
4.4.1. Влияние кадмия нитрата на ферменты высших животных i 7 vi
4.4.2. Анализ токсического действия кадмия нитрата в модельных острых опытах на белых мышах
4.4.3. Анализ токсического действия кадмия нитрата в хронических экспериментах на белых крысах
Глава 5. Изучение влияния токсикантов на ферментные системы инфузорий ii.
5.1. Влияние ДДВФ на ферменты инфузорий ii в экспериментах i vi и i viv
5.2. Влияние перметрина на ферменты ii в экспериментах i vi и i viv.
5.3. Влияние свинца ацетата на ферменты ii в экспериментах i vi и i viv.
5.4. Влияние кадмия нитрата на ферменты ii в
экспериментах i vi и i viv.
Обсуждение результатов.
Выводы.
Практические предложения.
Список использованной литературы


При атом для анализа и уточнения одного параметра, например, установления константы ингибирования, необходимо построение нескольких графиков Келети Т. Графические возможности метода параметрического анализа позволяют достаточно детально и многосторонне проанализировать сам процесс течения ферментативной реакции и математически обосновать полученные результаты. Однако названый метод не апробирован для использования в условиях токсикологического эксперимента, в условиях эксперимента i viv. Большинство работ проведено с использованием очищенных ферментов, что, конечно, является идеальным с точки зрения биологической химии. Но, но всей видимости, возможности метода могут быть использованы значительно шире и применены в условиях i viv. Таблица 1. Параметрическая классификация типов ферментативных реакций. КмЖм Утах Утах Двухпараметрически согласованная активация Смешанная активация
Достаточно интересным, с точки зрения экспериментальной токсикологии, является изучение влияния токсикантов на ферментные системы как в условиях i vi, гак и i viv, сравнение полученных результатов и использование названного метода для анализа данных в условиях токсикологического эксперимента, а также для прогнозирования и экстраполяции данных i vi на эксперименты i viv. Возможно, что описанная разработка может оказаться перспективной для решения этой задачи и установления глубинных процессов, протекающих в организме под влиянием того или иного токсиканта, а также для прогнозирования последствий воздействия токсикантов на организм. Глава 5. ЭКОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ. Для оценки токсичности объектов ветеринарносанитарного и экологического контроля, наряду с высшими животными, используют микроорганизмы. Наиболее распространены при проведении токсикобиологических исследований инфузории ii. Они обладают целым рядом характеристик, делающих их универсальным тестобъектом. Эти инфузории имеют большое сходство с высшими животными, которое выражается в подобии гистонов, кода нуклеиновых кислот и их универсальности i , . Инфузории сходны с высшими животными по аминокислотному составу клеток О. Например, установлено, что энергетическая функция продина и механизм его окисления сходны с таковыми у крыс . Аналогичные данные получены для тирозина i , i , V цистина и цистеина , , аспарагиновой кислоты i , . Показано, что пептиды усиливают обменные процессы в большей степени, чем свободные аминокислоты i , , что также выражено у высших живопшх. Также установлено сходство аминокислотной потребности у Т. V,. Отмечено сходство между тетрахименами и высшими животными в обмене и составе углеводов и их влиянии на синтез белка . Показано, что инфузории лучше растут в среде , содержащей моносахариды при отсутствии углеводов на энергетические цели расходуются жиры и белки, как и у высших животных. Vi Т. Установлено сходство тетрахимен с высшими животными по потребности и обмену минеральных веществ кальция, железа, бария, магния , Н. Е. . Процессы питания тетрахимен имеют общность с таковыми у высших животных крыс. Инфузории способны усваивать белки без их предварительного гидролиза, при этом первая фаза пищеварения протекает при кислом , вторая при щелочном, что аналогично кишечному пищеварению высших животных i Р. Вследствие общности обменных процессов инфузории, как и высшие животные, чувствительны к различным токсическим веществам, таким, как стероиды, сульфаниламиды, цианиды и др. Показано, что инфузории чувствительны к различным зшрязнителям пищевых и кормовых продуктов, а также объектов окружающей среды солям тяжелых металлов Брагинский Л. П. и др. Долгов В. А., , микотоксинам i , детергентам Макарадзе Ш. А., Корнеева , , агрохимическим препаратам и другим токсическим веществам Билай В. И., Кубанская З. А., Горошко О. Г., . В литературе приводятся данные об угнетающем действии на рост инфузорий кадмия в концентрации мгл i В, , двухлористой ртути при ее концентрации 0,5 мгл i В. Изменение поведенческой реакции отмечалось при содержании в питательной среде ионов селена, ванадия и циркония. Такие изменения открывают возможности практического использования инфузорий Т.