Подкожный овод крупного рогатого скота в Западном регионе Российской Федерации : биология, меры борьбы

• Автор: Маврин, Николай Анатольевич
• Шифр специальности: 16.00.06, 03.00.19
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Биология подкожного овода крупного рогатого скота

2.2. Иммунный ответ крупного рогатого скота на личинки

подкожного овода

2.3. Методы диагностики гиподерматоза крупного рогатого скота

2.4. Экономический ущерб от гиподерматоза крупного рогатого

скота

2.5. Средства и методы борьбы с подкожными оводами крупного

рогатого скота

2.6. Краткая климатогеографическая характеристика Западного
региона РФ (Брянская и Смоленская области)
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Видовой состав подкожных оводов
4.2. Распространение подкожных оводов в Западном регионе РФ
4.3. Изучение динамики образования свищевых капсул и сроков выпадения личинок на окукливание
4.4. Сроки лета имаго оводов
4.5. Сравнительное изучение средств и методов борьбы с
подкожными оводами в Западном регионе РФ
4.5.1. Изучение эффективности гиподектина инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.2. Изучение эффективности гиподектина накожного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.3. Изучение эффективности препарата новомек при внутрикожном способе введения при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.4. Изучение эффективности аверцида накожного и абамека накожного при гиподерматозе крупного рогатого скота
4.5.5. Изучение эффективности аверцида инъекционного и
абамека инъекционного при гиподерматозе крупного рогатого
скота
4.6. Выделение, очистка и характеристика антигенов, предназначенных для использования в иммуноферментном анализе на раннюю диагностику гиподерматоза крупного
рогатого скота
4.6.1. Лизат личинки I стадии Н.ІіпеаШт
4.6.2. Лизат личинки III стадии Н.ІіпеаШт
4.6.3. Аффинно-очищенный антиген из личинки III стадии
Н. ІіпеаШт
4.6.4. Аффинно-очищенный антиген из личинки I стадии
Н. ІіпеаШт
4.6.5. Антигены, очищенные ионообменной хроматографией из лизата личинки I стадии Н.ІіпеаШт
4.7. Разработка непрямого твердофазного иммуноферментного
анализа для выявления антител к возбудителю гиподерматоза крупного рогатого скота
4.7.1. Получение и характеристика положительного и отрицательного контролей
4.7.2. Условия сенсибилизации лунок антигеном и оптимального разведения антивидового конъюгата
4.7.3. Оптимизация условий проведения иммуноферментного . анализа при исследовании проб в одном разведении
4.7.4. Оценка диагностических параметров разработанной иммуноферментной тест-системы
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
9. ПРИЛОЖЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ
БСА - бычий сывороточный альбумин
ИФА - иммуноферментный анализ
ИЭ - интенсэффективность
КББ - карбонатно-бикарбонатный буфер
М.М. - молекулярная масса
МЭБ - Международное Эпизоотическое Бюро
ОП - оптическая плотность
ОП 450 — коэффициент оптического поглощения при длине волны 450 нм ПААГ - полиакриламидный гель ТМБ - тетраметилбензидин ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ФСБТ - фосфатно-солевой буфер, содержащий 0,1% Tween 20 ЭЭ - экстенсэффективность
BrCN-агароза — агароза активированная бромцианом DEAE-сефароза - диэтиламиноэтил сефароза IgG - иммуноглобулины класса G НА - гиподермин А НВ - гиподермин В НС - гиподермин С мА - миллиампер V - вольт

буфером DEAE-сефарозу 4В. Применяли ступенчатую хроматографию, последовательно элюируя фракции 0,1 М буферным раствором Трис-НС1 (pH 7,5), содержащим 0,20 М; 0,25 М; 0,30 М и 0,40 М NaCl. Хроматографический процесс контролировали регистрацией оптической плотности элюатов в кювете проточного спектрофотометра при длине волны 280 нм. Полученные фракции анализировали ДСН-ПААГ электрофорезом и иммунохимическими методами.
Концентрацию белка в растворах определяла Богданова B.C. и Гребенникова Т.В. с использованием коммерческого набора “Micro ВСА Protein Assay Kit” фирмы “Pierce” (США).
Иммунохимическую активность полученных продуктов определяли в условиях непрямого иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга с положительными и отрицательными сыворотками крови крупного рогатого скота (см. п. 3.8. и 3.9.). Оборудование для проведения исследований любезно предоставила Гребенникова Т.В.
3.8. Непрямой иммуноферментный анализ (ИФА)
При проведении исследований по изучению иммунохимической активности полученных антигенов использован непрямой вариант твердофазного иммуноферментного анализа.
В лунки иммунологического планшета (Greiner, Германия) вносили 0,1 мл очищенного антигенного белка, разведенного 0,1 М карбонатно-бикарбонатным буфером (КББ, pH 9.5). Планшет инкубировали 18 час при +4°С, после чего удаляли избыток антигена пятикратной отмывкой ФСБТ (0,01 М фосфатный буфер, 150 tnM NaCl, 0,1% твин-20, pH 7,4). Затем в лунки вносили 0,1 мл анализируемой сыворотки крови крупного рогатого скота. Планшет инкубировали 1 час при 37°С, промывали ФСБТ и добавляли 0,1 мл меченых пероксидазой антител к иммуноглобулину G (H+L) крупного рогатого скота (филиал ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи «Медгамал», Россия) (антивидовой коньюгат) в растворе ФСБТ + 0,5% бычьего сывороточного альбумина. Через 1 час инкубации при 37°С отмывали планшет ФСБТ и