Технология тест-системы для серодиагностики парагриппа-3 крупного рогатого скота методом РНГА

• Автор: Красота, Александр Юрьевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 165 с. : ил

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика парамиксовирусов

1.2. Парагрипп3 крупного рогатого скотаi

1.3. Строение вириона парамиксовирусов

1.4. Белки вируса парагриппаЗ

1.5. Антигенное родство парамиксовирусов и идентичность аминокислотных сиквенсов

1.6. Антигенное родство и идентичность нуклеотидных сиквенсов вирусов парагриппа3

1.7. Антигенная вариабельность вируса нарариппа

крупного рогатого скота

1.8. Иммунный ответ на заражение вирусом парагриппа3 крупного рогатого скота

1.9. Биологические свойства штаммов вируса парагриппа3 крупного рогатого скота и влияние на них физических и химических факторов
1.9.1. Культивирование IV
1 Инфекционность и гемагглютинирующая активностьЦ
1 Лабораторная диагностика парагриппа3 крупного рогатого скота
11 Серодиагностика и ретроспективная диагностика
12. Сравнение методов серодиагностики парагриппаЗ
1 РНГЛ для выявления антител к возбуди телям
инфекционных заболеваний
11. Применение РИГА для серодиагностики заболеваний
и оценки поствакцинального иммунитета
1 Профилактика парагриппа3 и перспективы лечения
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
2.1.1. Материалы
2.1Л. 1. Биологические препараты
2.1.1.2. Питательные среды и реактивы
2.1.2. Методы исследования
2.1.2.1. Получение монослойной культуры перевиваемой
линии клеток ночки теленка Ташп Г1
2.1.2.2. Культивирование вируса парагриппа3 крупного
рогатого скота
2.1.2.3. Получение антигенов вируса парафиппаЗ крупного
рогатого скота
2.1.2.4. Получение эритроцитов овцы
2.1.2.5. Стабилизация эритроцитов
2.1.2.6. Танизация эритроцитов
2.1.2.7. Пробная сенсибилизация
2.1.2.8. Сенсибилизация эритроцитов специфическим антигеном.
2.1.2.9. Постановка реакции торможения
гемагглютипапии РТГА1
2.1.2 Постанова реакции непрямой гемагглютинации РНГА
2.1.2 Постановка реакции нейтрализации
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Исследование эпизоотической ситуации по ПГ
крупного рогатого скота в хозяйствах Московской области
3.2. Культивирование вируса ПГ3, штамм ЗКСМ
3.2.1. Подбор культуры клеток
3.3. Получение компонентов набора РИГА
3.3.1. Получение антигенов вируса ПГ
3.4. Получение специфического и контрольного эритроцитарных антигенов
3.4.1 .Стабилизация эритроцитов
3.4.2. Танизация эритроцитов
3.4.3. Сенсибилизация танизированных эритроцитов
антигеном ПГ
3.4.3.1. Выяснение оптимального разведения сенсибилизирующего анти гена
3.4.3.2. Определение оптимальной концентрации водородных ионов сенсибилизирующей смеси
3.4.3.3. Подбор оптимальной температуры для сенсибилизации эритроцитов
3.4.3.4. Подбор оптимального времени проведения сенсибилизации
3.4.4. Отмывка сенсибилизированных эритроцитов
3.5. Проверка специфичности полученных диагностикумов
3.6. Получение специфических гипериммунных
сывороток к ПГ3
3.7. Апробация диагностикума
3.8. Постановка в различных модификациях
3.9. Сравнительная характеристика метода РНГЛ
3 Экономическая целесообразность применения РНГЛ
для серодиагностики парагриппа3 крупного рогатого скота
3 Сроки хранения диагностикума
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
6. I ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6.1. Рекомендации по использованию научных выводов
6.2. Сведения о практическом использовании
полученных результатовНЮ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Оптимизирована схема получения гипериммунных сывороток к белкам вируса парагриппа3 крупного рогатого скота на телятахдонорах для использования в качестве специфических референссывороток. Установлены значения диагностического титра антител к вирусу парагриппа3 крупного рогатого скота. Также получено положительное решение о выдаче патента на изобретение Способ получения эригроцитарного диагностикума для обнаружения антител к вирусу парагриппаЗ крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагтлютинации от апреля года по заявке от . Практическое значение результатов исследований. Разработана тестсистема для выявления антител в сыворотках крови к вирусу парагриппа3 крупного рогатого скота на основе реакции непрямой гемагглютинации. Разработано Временное наставление по применению набора эритроцитарного диагностикума для серодиагностики парагриппа3 крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации. Разработаны Технические условия набора эритроцитарного диагностикума для серодиагностики парагриппа3 крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации. Проведены межведомственные комиссионные испытания набора эритроцитарного диагностикума в составе набора эритроцитарных диагностикумов для серодиагностики инфекционного ринотрахеита, парагриппа3, вирусной диареи, аденовирусной, респираторносинцитиальной инфекций и хламидиоза крупного рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации РИГА на основании приказа Департамента ветеринарии МСХ РФ от апреля года, акт от апреля года, которые показали их высокую чувствительность и специфичность в соответствии с техническими условиями проект. Опытно промышленная серия наборов эритроцитарного диагностикума для серодиагностики парагриппа3 крупного рогатого скота апробирована в 5 ветеринарных лабораториях и показана их высокая диагностическая ценность. Материалы исследований внедрены в учебный процесс и на их основе разработаны лабораторнопрактические занятия при изучении возбудителей респираторнокишечных вирусных инфекций на кафедре ветеринарной вирусологии МГЛВМиБ им. К.И. Скрябина. Апробация работы. Результаты работы доложены на Третьей Международной РоссийскоИранской конференции Сельское хозяйство и природные ресурсы, на межкафедральном совещании профессорскопреподавательского состава МГАВМиБ им. К.И. Скрябина г. По теме диссертации опубликовано 3 научные работы. Получено решение о выдаче патента на изобретение Способ получения эритроцитарного диагностикума для обнаружения антител к вирусу парагриппа3 крупною рогатого скота в реакции непрямой гемагглютинации от апреля года по заявке от . Технология подготовки эритроцитов овцы для получения контрольного и специфического к парагриппуЗ крупного рогатого скота эритроцитарных антигенов. Технология получения тестсистемы для выявления антител к вирусу парагриппа3 крупного рогатого скота в сыворотках крови методом РИГА на основе получения высокоактивных вируссодержащих клеточных суспензий, специфических вирусных антигенов, специфического и контрольного эритроцитарных антигенов и гипериммунных сывороток. Результаты апробации разработанной тестсистемы на основе РИГА в производственных условиях. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Впервые в г. Чсннок описал С i вирус, выделенный от детей с острым ларинготрахеитом, а затем в г. Ченнок с соавторами выделили от детей с респираторными заболеваниями новые вирусы в культуре ткани почки обезьяны методом гемадсорбции . Сходный вирус М был выделен в г. Джонсоном и сотрудниками от детей и взрослых лиц. Парамиксовирусы были идентифицированы только у позвоночных животных. Парамиксовирусы относятся к вирусам, содержащим односпиральную несегментированную РНК негативной полярности, семейству xvii, входящее в отряд vi. Последовательность генов у вирусов, отнесенных к разным родам данного семейства, различна Табл. Классификация парамиксовируеов приведена в табл. Помимо двух идентифицированных вирусов, обозначаемых vi рептилий V и iv vi V грызунов, известно еще несколько вирусов, выделенных от пингвинов, и отличающихся от парамиксовируеов . Более того, вирус , родственный подсемейству xvii родственны гены , Н, М, II, V, С, был выделен от растительноядных летучих мышей и лошадей в Австралия.