Разработка и эффективность полимеразной цепной реакции при диагностике инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

• Автор: Котенева, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 110 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Характеристика инфекционного ринотрахеита пустулезного

вульвовагинита крупного рогатого скота ИРТИПВ КРС

2. Особенности клинического проявления ИРТ КРС и значение

латентно инфицированных быковпроизводителей в распространении заболевания

3. Родственные связи вируса ИРТ КРС с вирусами семейства

Воутае.

4. Структура и функционирование генома вируса ИРТ

КРС
5. Разработка и применение метода полимеразной цепной реакции
ПЦР для выявления вируса ИРТ КРС.
6. Заключение по обзору литературы.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Материалы и методы
2. Результаты исследований.
2.1. Разработка ПЦР для выявления ДНК вируса ИРТ КРС
2.1.1. Подбор праймеров для постановки ПЦР.
2.1.2. Компоненты ПЦР
2.1.3. Отработка оптимального режима амплификации
2.2. Определение чувствительности и специфичности ПЦР с
праймерами на ген тимидинкиназы
2.3. Тестирование при помощи ПЦР референтных штаммов и
изолятов вируса ИРТ КРС, выделенных на территории РФ и типированных в реакции нейтрализации.
2.4. Эффективность ПЦР при выявлении ДНК вируса ИРТ КРС
2.4.1. Сравнительная эффективность различных методов выявления вируса ИРТ КРС при исследовании проб биоматериала от животных разных половозрастных групп.
2.4.2. Эффективность ПЦР при выявлении ДИК вируса ИРТ КРС в пробах биоматериала от больных телят.
2.4.3. Эффективность ПЦР при выявлении ДНК вируса ИРТ КРС в пробах биоматериала от коров.
2.4.4. Эффективность ПЦР при выявлении ДНК вируса ИРТ КРС в сперме быковпроизводителей
2.4.4.1 Определение чувствительности ПЦР при исследовании искусственно контаминированной вирусом спермы быковпроизводителей.
2.4.4.2 Сравнительное изучение эффективности ПЦР при диагностике заболевания ИРТИПВ у быковпроизводителей.
2.5. Степень контаминации вирусом ИРТ КРС банков спермы на племпредприятиях, установленная с помощью ПЦР
2.6. Генотипирование изолятов вируса ИРТ КРС, выделенных из спермы быковпроизводителей, с помощью ПЦРПДРФ анализа
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРА


Г. Глотов, . НТД на нее утверждена Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ г. При помощи тестсистемы можно проводить массовые диагностические обследования животных в короткие сроки, что важно для планирования и проведения оздоровительных и профилактических мероприятий. Однако чувствительность ее в некоторых случаях недостаточна, т. Полимеразная цепная реакция ПЦР становится одним из важных диагностических тестов в ветеринарной вирусологии . Метод имеет явные преимущества в скорости и чувствительности по сравнению с традиционными вирусологическими методиками, а при высокой специфичности его значение для ветеринарной практики возрастает. В литературе имеются сообщения о выявлении ДНК вируса при помощи ПЦР в сперме i . В качестве мишеней амплификации исследователи выбирали гены гликопротеинов . Vi, . Xi . V. . ПЦР, или ПЦР в комбинации с блотгибридизацией в порядке достижения наивысшей чувствительности i . При помощи метода ПЦР можно в короткие сроки и с высокой точностью исследовать различные виды биоматериала от животных на наличие вируса ИРТ КРС. Большой интерес представляет исследование банков спермы на племпредприятиях с целью выявления эякулятов, инфицированных вирусом. Цель и задачи исследований. Целью работы являлась разработка ПЦР для диагностики ИРТ КРС и сравнительное изучение ее диагностической эффективности. Провести подбор праймеров и оптимальных параметров проведения диагностической ПЦР, определить ее чувствительность и специфичность. Изучить степень контаминации вирусом банков спермы, полученной от латентно инфицированных быковпроизводителей, на головных племпредприятиях Сибири и провести генотипирование выделенных изолятов. Научная новизна. Впервые методом ПЦР изучена степень контаминации банков спермы, полученной от инфицированных быковпроизводителей, на племпредприятиях, а также проведено генотипирование выделенных изолятов вируса при помощи ГПДРПДРФ анализа с использованием праймеров, комплементарных последовательностям гена гликопротеина В вируса. Научная новизна подтверждена двумя патентами Российской Федерации. Теоретическая и практическая значимость работы. Методических рекомендаций Вирусные заболевания крупного рогатого скота в Сибири и на Урале Особенности эпизоотологии, клинического проявления, диагностика, меры профилактики и борьбы, утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН прот. Россельхозакадемии Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дапьнего Востока прот. Методических рекомендаций Выявление вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции с последующей дифференциацией вакцинного штамма и эпизоотических изолятов, утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН прот. Россельхозакадемии Проблемы инфекционной патологии животных в регионе Сибири и Дальнего Востока прот. Результаты исследований представляют теоретическую и практическую ценность, создают перспективы использования ПЦР не только в диагностике ИРТ КРС, но и в молекулярной эпизоотологии болезни и могут быть использованы для оптимизации противоэпизоотических мероприятий. Разработанная ПЦР может найти широкое применение в практике для диагностики различных форм ИРТ КРС у животных разных половозрастных групп. Особое значение имеет данный метод при исследовании банков спермы бы ковпроизводителей. Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на Международной научнопрактической конференции Покров, Международной научнопрактической конференции Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях Воронеж, IV Всероссийской научнопрактической конференции Генодиагностика инфекционных заболеваний Москва, 6й Международной научнопрактической конференции Аграрная наука Сибири, Монголии, Казахстана и Башкорстана сельскому хозяйству Новосибирск, 2й Международной научнопрактической конференции Ставропольского ГАУ Ставрополь, . Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ журнал Ветеринария, сборники научных трудов, патенты РФ.