Антиген бруцеллезный эритроцитарный для реакции непрямой гемагглютинации : Технология получения, стандартизация, контроль, диагностическая эффективность

• Автор: Хаиров, Сайгидтага Гаджиевич
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Махачкала
• Количество страниц: 288 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ СТР

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

2.1 Реакция агглютинации РА

2.2 Реакция связывания Комплеига РСК, РДСК.

2.3 Кольцевая реакция с молоком КР.

2.4 Роз бенгал проба РБП.

2.5 Реакция непрямой гемагглютинации РНГА

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.2 ТЕХНОЛОГИЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ, КОНТРОЛЯ И СТАНДАРТИЗАЦИИ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РНГАЛ
3.2.1 Получение антигена из бруцелл
3.2.2 Формалинизацияэритроцитов
3.2.3 Сенсибилизация эритроцитов.
3.2.4 Определение оптимальных условий сенсибилизации эритроцитов
3.2.5 Изучение значения вида и штамма бруцелл для получения антигена.
3.2.6 Изучение механизма действия детергента на бруцелл.
3.2.7 Стандартизация антигена
3.2.8 Изучение срока годности антигена.
3.3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТОК КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.
3.3.1 Изучение специфичности эритроцитарного антигена.
3.3.2 ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РНГА ПРИБРУЦЕЛЛЕЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА.
1 Изучение чувствительности антигена для исследования в РНГА сывороток крови крупного рогатого скота, искусственно зараженного вирулентной культурой В.
2 Изучение чувствительности антигена для выявления естественно
инфицированного бруцеллезом крупного рогатого скота.
3 Диагностические титры РНГА у крупного рогатого скота при бруцеллезе
4 Результаты исследований по изучению возможности использования РИГА для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, иммунизированного и реиммунизированного вакциной из штамма.
5 Изучение диагностического значения РИГА для обнаружения бруцеллезных гемагглютинов в молоке укоров.
3.4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ В ГА СЫВОРОТОК КРОВИ ОВЕЦ
3.4.1 Изучение специфичности антигена.
3.4.2 Изучение чувствительности антигена для исследования в РНГА сывороток крови овец, искусственно зараженных вирулентными культурами В.
3.4.3 Результаты изучения чувствительности антигена для исследования в РНГА сывороток крови естественно инфицированных бруцеллезом овец и коз в неблагополучных хозяйствах
3.4.4 Диагностические титры РНГА при бруцеллезе овец
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО ИСПЫТАНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ РНГА
5. РЕЗУЛЬТАТЫ КОМИССИОННОГО ИСПЫТАНИЯ АНТИГЕНА БРУЦЕЛЛЕЗНОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДЛЯ РНГА.
6. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА В СРАВНЕНИИ С МЕДИЦИНСКИМ ДИАГНОСТИКУМОМ ДЛЯ РНГА.
7. ИСПЫТАНИЕ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕНА В РНАт иРТНГА
8. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ РНГА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ.
9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
. ВЫВОДЫ
. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
. ПРИЛОЖЕНИЯ 9
1. ВВЕДЕНИЕ
Одним из важнейших условий подъема животноводства и обеспечение населения продуктами питания является резкое снижение, а затем ликвидация инфекционных болезней, и в частности бруцеллеза, причиняющего большие потери народному хозяйству.
Экономический ущерб, наносимый бруцеллезом в пораженных им хозяйствах, обусловливается абортами, рождением слабого или нежизнеспособного приплода, послеродовыми осложнениями у животных и значительной яловостью маточного поголовья, в результате чего снижается продуктивность животных, нарушается воспроизводство стада и племенная работа. Поэтому борьба с бруцеллезом имеет большое народнохозяйственное значение.
Не менее важное значение имеет ликвидации бруцеллеза в эпидемиологическом отношении, так как больные бруцеллезом животные являются источником и резервуаром инфекции для людей. Ликвидация бруцеллеза представляв большую проблему, которая требует значительных затрат труда и материальных средств на проведение комплекса ветеринарносанитарных и организационно хозяйственных мер.
Актуальность


Изучая кольцевую реакцию с молоком,многие исследователи пришли к выводу, что эта реакция является простым и доступным для практических специалистов,ценным методом диагностики бруцеллеза у коров. Большинство, авторов рекомендуют ее для контроля благополучия дойных стад по бруцеллезу. На Международном симпозиуме по бруцеллезу крупного рогатого скота представители Австралии, Англии, Аргентины, Ирландии, Канады, Мексики, США также заявили,что ни один из имеющихся диагностических тестов не является совершенным для выявления всех больных животных . Одновременное применение РБП, РА, РСК и РДСК не обеспечивает выявления всех больных бруцеллезом животных в неблагополучном хозяйстве в короткие сроки. Кроме указанных методов, для диагностики бруцеллеза многими исследователями применялись некоторые дополнительные методы диагностики бруцеллеза реакция преципитации РП, определение неполных антител реакция Кумбса, реакция иммунофлуоресценции РИФ, опсонофагоцитарная реакция
ОРФ, реакция иммуноферментного анализа ИФА и др. Однако они не вышли за рамки научноисследовательских лабораторий, что связано с недостаточной изученностью их. В последние годы для диагностики бруцеллеза у животных предложена полимеразная цепная реакция ПЦР,которая является наиболее точной 6 и внедрена в г. В. М. Чекишевым с соавт. Б.И. Антоновым с соавт. ОПС антигеном и внедрена в ветеринарную практику для дифференциации поствакциональных реакций от реакции больных бруцеллезом животных. В нашей стране и за рубежом проводится большая работа по изысканию более чувствительных реакций чем те, чем те которые существуют в практике. Из новых серологических методов диагностики бруцеллеза до настоящего времени ни один не получил пракического применения в ветеринарной медицине. Из изучаемых сравнительно новых реакций при диагностике бруцеллеза наиболее перспективной для практического применения является реакция непрямой гемагглютинации РНГА. По имеющимся литературным данным, РИГА специфична и чувствительна,характеризуется простотой и удобством постановки и быстротой получения результатов. В то же время,эта реакция еще не получила практического применения в ветеринарной медицине. Широкому внедрению ее в практику препятствовала недостаточная изученность реакции и отсутствие стандартного эритроцитарного антигена, обеспечивающего воспроизводимость результатов в РНГ А. Кроме того, методы приготовления антигена были сложны, выход конечного продукта незначительным,что не удовлетворяло запросам практики. Таким образом, возникает необходимость дальнейшего усовершенствования диагностики бруцеЛезй1 л сельскохозяйственных животных. Целью наших исследований явилась разработка новой технологии изготовления, контроля и стандартизации эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации РНГАи изучение диагностического значения этой реакции при бруцеллезе животных. НД но изготовлению, контролю, стандартизации и применению антигена для РНГА при диагностике бруцеллеза животных. Научная новизна. Впервые разработана технология изготовления, контроля и стандартизации эритроцитарного антигена для реакции непрямой пассивной гемагглютинации РНГА при бруцеллезе крупного рогатого скота, овец и коз а. Установлены основные преимущества антигена, которые заключаются в его специфичности высокой активности в РНГА, стандартности и стабильности при хранении. На большом фактическом материале убедительно показано, что РНГА с предложенным антигеном по чувствительности превосходит применяемые на практике серологические реакции РБП, РА, РСК, РДСК вместе взятые, выявлять больных бруцеллезом животных наиболее полно и в более ранние сроки после заражения. Показана пригодность изготовленного нами антигена для выявления бруцеллезного антигена в биоматериале с помощью реакции нейтрализации антител РНАт. Определены диагностические титры РНГА при бруцеллезе крупного рогатого скота, овец и коз. Установлена возможность использования РНГА с предложенным нами антигеном для исследования на бруцеллез сывороток крови иммунизированного вакциной из штамма крупного рогатого скота.