Оценка качества и эффективности биологически активных добавок с коэнзимом Q10

• Автор: Каленикова, Елена Игоревна
• Шифр специальности: 15.00.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 185 с. : 34 ил.

Обе формы убихинон и убихинол свободно перемещаются в липидной фазе мембран митохондрий, перенося электроны с НАДНдегидрогеназы на цитохром Ь5. Донорами электронов для убихинона служат, наряд с НАДНдегидрогеназой, другие флавиновые дегидрогеназы и супероксидный анионрадикал. В недавно открытой окислителыювосстановителыюй цепи в лизосомах переносчиком электронов служит полувосстановленная форма коэнзима р убисемихинон 8. Для определения коэнзимов применяют три основные группы методов электрохимические, спектрофагометрические и хроматографические. Наибольшее распространение получил метод ВЭЖХ в сочетании с различными вариантами детектирования. Наличие электрофорных групп в составе убихинона и его производных позволяет использовать для их определения электрохимические методы. В работе 7 описан полярографический способ определения i0. В основе данного метода лежит образование убихиионом комплекса включения с 3циклодекстрином в присутствии йодидиона в 0,1 М ацетатном буфере с 4,7. Предел обнаружения составил 0, мкмольл. Предложенный метод позволяет определять в фармпрепаратах и биологически акгивных добавках. При необходимости анализа электрохимическими методами биологических объектов мешающее влияние матрицы оказывается слишком велико. Для предварительного выделения анализируемых субстанций требуется сложная и длительная пробоподгаговка, в ходе кагорой с большой долей вероятности можег произойти изменение состава образца, в частности, изменение соотношения убихинонубнхинол в полученной пробе по сравнению с состоянием i viv. Для предотвращения окисления убихинола возможно добавление в пробу антиоксидантов, однако доказательств эффективности их действия в литературе не обнаружено. К преимуществам данной группы методов следует отнести доступность, быстрогу проведения и низкую стоимость анализа. Высокие коэффициенты молярного поглощения рассматриваемых соединений б и 0 молысм 1 для 9 и соответственно 4 позволяют проводить прямое спектрофотометрическое определение с чувствительностью, достаточной для анализа многих биологических объектов на уровне 0 мкгл. Ряд работ , посвяцсп анализу фармпрепаратов, в состав которых входят ретинол ацетат, токоферол ацетат и СоРю методом дифференциальной спекрофотометрии. Методика не требует проведения предварительных операций, таких как разделение или маскирование и может быть использована при серийном анализе. Поскольку спектры рассматриваемых соединений достаточно близки, для определения использовали спектры второго порядка. Для Сорю максимум в соответствующем спектре приходится на 2 нм. Закон БугсраЛамбсртаБера выполняется в диапазоне 0 мкгмл. Предел обнаружения составил 1,1 мкгмл. Недостатком является узкий круг объектов, к которым применима данная методика определение коэнзимов возможно только в препаратах, содержащих бинарные смеси активных компонентов Сорю токоферол ацетат или Сорю ретинол ацетат. Несмотря на эго, сочетание описанного метода с жидкостной или твердофазной экстракцией позволяет выполнять определение СоРю в плазме крови . Метод колориметрического определения Сорю в крови и моче человека был разработан в г. Предварительно проводили реакцию нуклеофильного замещения метоксигрупп цианэтилацетатом. При этом образуется соединение, обладающее интенсивной голубой окраской. Этот же подход был использован для анализа тканей морских беспозвоночных . Однако при анализе образцов с высоким содержанием жира наблюдалось значительное занижение результатов. Для устранения матричных эффектов Хагерман предложил использовать для селективного связывания и последующего выделения убихинона искусственно синтезированный пептид, состоящий из аминокислот . Коэнзим Р выделяли из раствора вместе с иммобилизованным на твердом носителе пептидом и проводили количественное определение спсктрофотомстричсски. Главным недостатком данной группы методов является недостаточно высокая чувствительность и низкая селективность. Устранение влияния матричных компонентов на стадии пробоподготовки усложняет процедуру и может приводить к ряду негативных последствий, описанных выше.