Разработка и унификация методик анализа и стандартизации препаратов инсулина с использованием обращенофазовой жидкостной хроматографии высокого давления (ОФ ЖХВД)

• Автор: Пихтарь, Анатолий Васильевич
• Шифр специальности: 15.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : 16 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Роль инсулина в лечении сахарного диабета.

2. Биосинтез и биологическое действие инсулина.

3. Общая характеристика физикохимических и фармацевтических свойств инсулина

4. Препараты инсулина.

5. Методы производства, стандартизации и контроля качества препаратов инсулина.

6. Применение ЖХВД в фармацевтическом анализе инсулина

ГЛАВА 2. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ПОВЕДЕНИЕ ИНСУЛИНА В УСЛОВИЯХ ОФ ЖХВД
1. Методы и материалы
2. Обсуждение результатов
2.1. Влияние компонентного состава буферного раствора
2.2. Влияние концентрации натрия сульфата
2.3. Влияние температуры хроматографической колонки
2.4. Влияние органического модификатора
2.5. Влияние длины алкильного радикала привитой фазы .
2.6. Влияние длины хроматографической колонки
3. Выводы.
ГЛАВА 4. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ФАРМАКОПЕЙНЫХ МЕТОДИК АНАЛИЗА ПРЕПАРАТОВ ИНСУЛИНА, ОСНОВАННЫХ НА ПРИМЕНЕНИИ ОФ ЖХВД
1. Выбор оптимальных условий хроматографического определения инсулина и его примесей в лекарственных препаратах
2. Метрологические характеристики методики
3. Применение разработанной методики для испытания официнальных препаратов инсулина
4. Выводы.
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА ИНЪЕКЦИОННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ИЗОФАНИНСУЛИНА НА ОСНОВЕ МЕТОДА ОФ ЖХВД.
1. Выбор условий хроматографического определения протамина в лекарственных формах изофанинсулина.
2. Изучение хроматографических профилей протаминов, выделенных из различных видов рыб
3. Методика определения протамина в препаратах изофанинсулина.
4. Валидация разработанной методики.
5. Выводы.
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В январефеврале г инсулин впервые был применен у 7 больных сахарным диабетом, и первые клинические наблюдения были опубликованы Бентингом, Бестом, Коллипом, Кемпбелом и Флетчером в журнале канадской медицинской ассоциации в марте г. В этой статье приведена история болезни летнего мальчика Леонарда Томпсона, который первым начал получать инъекции инсулина 1 января года. У больного диабетом наблюдалось заметное улучшение общего состояния, резкое уменьшение полидипсии и полиурии, значительное снижение уровня сахара в крови, отмечено исчезновение ацетона в моче ,. Открытие инсулина, его получение и применение в клинике ознаменовали начало нового, весьма плодотворного этапа в изучении патогенеза, клиники сахарного диабета и разработке терапии этого тяжелого хронического заболевания. Несмотря на то, что фундаментальные исследования в области диабетологии раскрыли многие стороны этиологии и патогенеза заболевания, дали возможность предложить различные подходы к лечению больных сахарным диабетом, сегодня ежедневное введение инсулина остается единственным условием выживания больных инсулинзависимым и части больных инсулиннезаЕисимым сахарным диабетом ,. По оценкам ВОЗ з мире насчитывается свыше 0 млн. В Российской Федерации по обращаемости в течение последних лет регистрируется 2 млн. Проведенные в Москве, СанктПетербурге и других городах эпидемиологические исследования позволяют считать, что истинное количество больных сахарным диабетом в России достигает млн. Многие годы после внедрения в практику инсулина основная цель лечения инсулином сводилась к устранению клинических симптомов диабета, что давало возможность сохранить и продлить жизнь больных. Так, в гг. Совершенствование инсулинотерапии и системы помощи больным дало возможность существенно продлить жизнь больных. Реальность наших дней это не только сохранение жизни, но и введение в мировую клиническую практику диабетологии понятия улучшения качества жизни как одной из целей лечения больных . Реализация данной концепции тесным образом связана с проблемой производства высококачественных препаратов инсулина. Инсулин полипептидный гормон, который обнаружен у всех позвоночных. Местом биосинтеза и депонирования инсулина у млекопитающих животных и человека являются 6клетки островков Лангерганса поджелудочной железы ,. Биосинтез инсулина происходит в соответствии с информацией, закодированной в гене, локализованном в коротком плече й хромосомы ,1. Поэтапное течение процессов, с помощью которых осуществляется экспрессия гена инсулина, приводит к синтезу белковой молекулы предшественника инсулина препроинсулина ,1. Длина полипептидной цепи препроинсулина более чем в два раза превышает длину обеих цепей молекулы активного инсулина. Препроинсулин построен из препелтида аминокислотных остатка, цепи В инсулина , Спептида и цепи А аминокислотный остаток ,1. Препептиду по другому сигнальный пептид принадлежит роль в осуществлении сигнала переноса новосинтезирозанного на полисомах препроинсулина в просвет эндоплазматического ретикулума, где после его отщепления сигнального пептида и замыкания дисульфидных связей образуется проинсулик. Спептид обеспечивает необходимую для предшественника инсулина конфигурацию ,1. Проинсулин поступает в аппарат Гольджи и депонируется в клеточных везикулах, ргранулах. В этих гранулах проинсулин подвергается поэтапному вычленению Спептида. В результате каталитического протеолиза, с участием ферментов, сходных по своему действию с трипсином и карбоксипептидазой В, происходит удаление двух аргининов на стыке с цепью В, а также лизина и аргинина на стыке с цепью А ,1. Вследствие этого освобождается Спептид и молекула инсулина рисунок 1. Ка стадии вычленения Спептида образуются промежуточные формы проинсулина интермедиаты I и II. Интермедиат I форма проинсулина, в которой Спептид отделен от терминальной группы цепи А. Интермедиат II форма проинсулина, в которой Спептид отделен от Сконца цепи В. У человека образование инсулина из проинсулина, в основном, протекает через формирование интермедиата I ,1.