Сравнительная характеристика эффектов фотодинамического воздействия на клетки сосудистой стенки in vitro

• Автор: Ударцева, Ольга Олеговна
• Шифр специальности: 03.03.04, 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 159 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Патология сосудистой стенки Заболевания артерий и их этиология
Клетки сосудистой стенки и их участие в реакциях на повреждение Роль эндотелия в патологических изменениях сосудистой стенки Роль клеток субэндотелиального слоя артерий в развитии поражений сосудистой стенки
Роль макрофагов в формировании изменений сосудистой стенки Значение процессов клеточной гибели в развитии патологии сосудистой стенки
Использование моделей для изучения функциональных особенностей клеток, участвующих в патологическом ремодслировании сосудистой стенки Фотодинамическое воздействие
Понятие фотодинамического воздействия и его компоненты Механизмы фотодинамического воздействия

Взаимодействие фотосенсибилизаторов и продуктов их активации с клеткамимишенями

Проблемы и преспективы использования фотодинамического воздействия для диагностики и лечения сердечнососудистых заболеваний

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Используемое оборудование, материалы и реактивы

Оборудование

Химические реагенты
Антитела
Клеточные культуры
Приготовление сред для культивирования клеток Приготовление полной среды
Приготовление среды для культивирования эндотелиальных клеток Приготовление среды для криоконсервации клеток
2.3. Выделение и культивирование клеток сосудистой стенки человека
2.3.1. Получение первичной культуры эндотелиальных клеток пупочной
вены человека
2.3.2. Получение первичной культуры эндотелиальных клеток аорты
человека
2.3.3. Получение первичной культуры клеток субэндотелиального слоя
аорты человека
2.3.4. Получение первичной культуры МСК из жировой ткани человека
2.3.5. Выделение лейкоцитов из периферической крови человека и
получение первичной культуры макрофагов
2.3.6. Пассирование культивируемых клеток
2.3.7. Криоконсервация культивируемых клеток
2.4. Методы исследования
2.4.1. Определение накопления и выведения Фотосенса клетками
2.4.2. Определение накопления Протогюрфирина IX клетками
2.4.3. Фотодинамическое воздействие на клетки сосудистой стенки
2.4.4. Проточная цитофлуориметрия
2.4.5. Иммуноцитохимическое окрашивание клеток
2.4.6. Выявление активных форм кислорода в клетках
2.4.7. Выявление апоптотичсских и некротических клеток
2.4.8. Определение жизнеспособности клеток методом МТТтеста
2.4.9. Выявление митохондрии и лизосом
2.4 Изучение адгезии лейкоцитов периферической крови к эндотелию
2.4 Определение фагоцитарной активности макрофагов
2.4 Определение активности матриксных металлопротсиназ2, 9
2.4 Исследование количественного содержания цитокинов в среде
культивирования
2.5. Активированный эндотелий клеточная модель и се характеристика
2.6. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕИЕ
3.1. Изучение эффектов фотодинамического воздействия с
использованием Фотосенса на клетки сосудистой стенки
3.1.1. Накопление Фотосенса клетками сосудистой стенки
3.1.2. Выведение Фотосенса клетками сосудистой стенки
3.1.3.
3.1.5.
3.2.1.
3.2.3.
3.3.1.
Влияние компонентов фотодинамического воздействия на клетки
сосудистой стенки
Клеточные эффекты фотодинамического воздействия с
использованием Фотосснса
Влияние дозы облучения при фотодинамическом воздействии па
механизм гибели клеток сосудистой стенки
Изучение влияния фотодинамического воздействия низкой
интенсивности на функциональные свойства клеток сосудистой
Влияние низких доз фотодинамического воздействия на
жизнеспособность клеток сосудистой стенки
Влияние фотодинамического воздействия низкой интенсивности на 2 адгезивные свойства эндотелиальных клеток
Функциональная активность макрофагов после фотодинамического 6 воздействия низкой интенсивности
Сравнение эффектов фотодинамического воздействия с
использованием Фотосснса, Фталосснса и 5аминолсвулиновоЙ кислоты на клетки сосудистой стенки
акопление Протопорфирина IX в клетках сосудистой стенки
Влияние фотодинамического воздействия с использованием
различных фотосенсибилизаторов на жизнеспособность клеток сосудистой стенки
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В условиях i vi низкоинтенсивное фотодинамическое воздействие с использованием Фотосенса оказывает противовоспалительный эффект на
клетки сосудистой стенки, значительно модифицируя их функциональные свойства, что выражается в уменьшении их способности к адгезии, снижении фагоцитарной и секретирующей ММП2, 9 активности. Фталосенса обеспечивает тотальную элиминацию клеток сосудистой стенки. Глава 1. В настоящее время сердечнососудистые заболевания такие как инфаркт миокарда, инсульт, сердечная недостаточность и др. Морфологической основой этих заболеваний в подавляющем большинстве случаев являются патологические изменения стенки сосудов, провоцирующие нарушение артериального кровотока, что приводит к ишемии. В генезе ишемии основную роль отводят интималыюй гиперплазии локальному утолщению внутренней оболочки артерий, влекущему за собой сужение просвета сосуда вплоть до полной окклюзии и нарушение кровотока. Гиперплазии интимы сопутствует таким заболеваниям, как атеросклероз, постангиопластический рестеноз и др. Атеросклеротические изменения сосудистой стенки играют важнейшую роль в патогенезе большинства сердечнососудистых заболеваний Аничков, Пальцев и Аничков, , и являются наиболее распространенными клеточными пролиферативными поражениями артериальной стенки Фустер, Росс, Гопол, . Термин атеросклероз относится ко всем изменениям, для которых характерно увеличение толщины сосудистой стенки за счет скопления клеточных элементов и формирования ими новой соединительной ткани. Отличительным признаком атеросклеротических поражений служит их преимущественная локализация во внутреннем интимальном слое артериальной стенки. В сердцевине бляшки происходят дегенеративные изменения некроз и аккумуляция липидов, поэтому для их описания стали применять терминоэлемент атеро. На поздних стадиях развития атеромы характеризуются особой микроанатомией и представлены соединительнотканной фиброзной покрышкой, покрывающей скопление некротических масс, и фиброзной тканыо см. Микроскопический анализ показал, что атеросклеротические бляшки содержат три основных компонента клеточный, волокнистый и липидный. Клеточный компонент, расположенный в соединительнотканной покрышке, включает в себя иитимациты, макрофаги Мф и лимфоциты, а в зонах под покрышкой и по бокам от нес гетерогенную популяцию пенистых клеток, субэндотелиадьных стромальных клеток и Тлимфоцитов. Пенистые клетки происходят преимущественно из моноцитов, дифференцирующихся в стенке
артерий в Мф, однако интимациты также способны поглощать липиды, превращаясь в пенистые клетки. Второй волокнистый компонент состоит из внеклеточного матрикса соединительной ткани, включающего в себя коллагеновые и эластические волокна, а также протеогликаны. Третий компонент представлен внутри и внеклеточными отложениями липидов, основная масса которых составляет некротическое ядро бляшки, состоящее из холестерина и его эфиров, пенистых клеток, детрита, белков плазменного происхождения и извести. Рисунок 1. Структура атеросклеротической бляшки. Основными факторами риска, способствующими развитию атеросклероза, являются повышение холестерина плазмы крови за счет увеличения уровня липопротеидов низкой плотности ЛНП, снижение уровня липопротсидов высокой плотности ЛВП, модификация ЛНП окисление, гликозилированис и др. Тклеточные иммунные реакции, вирусные и хламидиозные инфекции. Связь атеросклероза с этими факторами дала основание для формулирования гипотезы ответа на повреждение, объясняющую развитие атеросклеротических поражений. Одним из ключевых моментов атерогенеза является инфильтрация сосудистой стенки липидами и их внутри клеточное накопление Аничков, . При формировании атеросклеротических поражений включаются все виды клеточных ответов, опосредующих воспалительнофибропролиферативную реакцию на повреждение Фустер, Росс, Гопол, . За воспалением следует заживление в условиях высокоспецифичсского окружения внутри артериальной стенки. Таким образом, атерогенез является скорее не дегенеративным, а активным процессом, включающим специализированные элементы хронического воспаления, связанные с репарацией артериальной стенки.