Эндотелий-зависимая регуляция сокращения подкожной артерии у крыс в раннем постнатальном онтогенезе

• Автор: Гайнуллина, Дина Камилевна
• Шифр специальности: 03.03.01, 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 153 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Механизмы эндотелийзависимого расслабления сосудов.

1 1.1.1Простациклин

1.1.2 Оксид азота.

1.1.2.1 Регуляция экспрессии эндотелиальной Жсинтазы

1.1.2.1.1 Регуляция еМОБ на транскрипционном уровне.

1.1.2.1.2 Регуляция еЫОБ на постгранскрипционном уровне.

1.1.2.2 Регуляция еИОБ на поеггрансляционном уровне.

1.1.2.2.1 Посттрансляционная химическая модификация еЖБ

1.1.2.2.2 Взаимодействие еЫОБ с другими белками.

1.1.2.2.3 Регуляция активности еКОБ фосфорилированисм.
1.1.2.2.4 Регуляция активности еЫОБ доступностью субстрата и кофакторов.
1.1.2.3 Регуляция биодоступности оксида азота.
1.1.2.4 Сигнальные пути гладкомышечных клеток, обеспечивающие расслабление гладкомышечных клеток под действием
1.1.3 Эндотелиальный гиперполяризующий фактор.
1.1.4 Механизмы активации эндотелиальных клеток.
1.2 Изменение эндотелиальной функции в раннем постнатальном онтогенезе
1.2.1 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов легочного
кровообращения
1.2.1.1 Регуляция тонуса сосудов легочного круга кровообращения в раннем
посгнаталыюм периоде у свиней.
1.2.1.2 Регуляция тонуса сосудов легочного круга кровообращения в раннем
постнатальном периоде у овец
1.2.1.3 Регуляция тонуса сосудов легочного круга кровообращения в раннем
постнатальном периоде у других видов
1.2.2 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов большого
круга кровообращения
1.2.2.1 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции артерий эластического

1.2.2.2 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов головного
1.2.2.3 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов скелетных мышц.
1.2.2.4 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов брыжеечного бассейна.
1.2.2.5 Возрастные изменения эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов других
бассейнов
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Объект исследования
2.2 Эксперименты на изолированных сосудах
2.2.1 Исследование сокращения в изометрическом режиме
2.2.1.1 Нормализация определение оптимального растяжения сосуда
2.2.1.2 Активация препарата и проверка функциональной активности эндотелия.
2.2.1.3 Протоколы экспериментов
2.2.1.3.1 Основной протокол эксперимента.
2.2.1.3.2 Другие протоколы экспериментов.
2.2.1.4 Обработка результатов
2.2.2 Влияние уровня растяжения кольцевого препарата артерии взрослой крысы на его
сократительную активность
2.2.3 Исследование сокращения в изобарическом режиме.
2.2.3.1 Активация препарата и проверка функционального состояния эндотелия.
2.2.3.2 Протокол экспериментов в изобарическом режиме
2.2.3.3 Обработка результатов
2.3 Исследование уровня экспрессии мРЫК методом полимеразной цепной реакции ПЦР .
2.3.1 Приготовление образцов мРНК.
2.3.2 Праймеры для еЖ8, пЫОБ, 1М и ГАФД.
2.3.3 Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией.
2.3.4 Синтез комплементарной ДНК.
2.3.5 Количественная ПЦР или ПЦР в реальном времени
2.3.6 Обработка результатов количественной ПЦР.
2.4 Исследования содержания и степени фосфорилирования белков в тканях сосудов
2.4.1 Приготовление образцов тканей для проведения биохимических исследований.
2.4.2 Экстракция белков
2.4.3 Разделение белков методом гель электрофореза.
2.4.4 Выравнивание образцов но филамину
2.4.5 Электроперенос белков.
2.4.6 Иммунодетекция белков с использованием антител.
2.4.7 Стриппирование мембран.
2.4.8 Обработка результатов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1 Сравнение сократительных ответов на метоксамин подкожных артерий
новорожденных и взрослых крыс
3.2 Исследование механизмов антиконстрикторного влияния эндотелия в сосудах новорожденных крыс.
3.2.1 Влияние блокады, синтеза простациклина на антиконстрикторную функцию эндотелия у новорожденных крыс.
3.2.2 Влияние блокады синтеза оксида азота на антиконстрикторную функцию эндотелия у новорожденных крыс.
3.2.3 Влияние ингибитора индуцибельной ЫОсинтазы на сокращение артерий новорожденных крыс.
3.2.4 Влияние блокады действия эндотелиального гиперполяризующего фактора на антиконстрикторную функцию эндотелия у новорожденных крыс
3.3 Исследование антиконстрикторного влияния эндотелия на сокращение артерий новорожденных крыс, вызванное
3.4 Исследование сокращения на метоксамин артерий новорожденных крыс с интаюгным эндотелием в изобарических условиях
3.5 Исследование регуляторных механизмов ЫОпути на эндотелиальном уровне
3.6 Исследование регуляторных механизмов Жпути на уровне гладкой мышцы артерий .
3.7 Исследование механизмов, обеспечивающих активацию ЫОсинтазы у
новорожденных животных.
4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
4.1 Основные результаты исследования.
4.2 Эндотелий ослабляет сокращение артерий новорожденных крыс
4.3 Природа антиконстрикторной роли эндотелия у новорожденных крыс.
4.4 Синтез оксида азота у новорожденных крыс проявляется в изобарических условиях эксперимента.
4.5 Возможные причины различия в эндотслийзависимой регуляции тонуса подкожной
артерии у новорожденных и взрослых крыс
4.5.1 Сигнальные каскады ЫОпути в гладкой мышце не изменены в раннем постнатальном онтогенезе.
4.5.2 Повышенное содержание и способы активации еЫОБ в эндотелии артерий
новорожденных крыс.
4.6 Физиологическая роль активного МОпути в эндотелии артерий у крыс в возрасте 1
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В отличие от большинства опубликованных исследований, в которых эндотелийзависимос расслабление изучалось с использованием веществ, напрямую активирующих эндотелиальные клетки, в данной работе обнаружено влияние эндотелия на эффекты сократительного агента, активирующего гладкомышечные клетки и не оказывающего прямого влияния на эндотелий сосудов. В то время. Всемирной Организации. Здравоохранения, одним из наиболее распространенных заболеваний, в детскоми подростковом возрасте признаки сердечнососудистых расстройств часто внешне не проявляются Тем не менее, наличие скрытых патологических изменений, в томчисле изменений эндотелиальной функции, может приводить, к серьезным последствиям в более поздние годы жизни. Для определения механизмов возникновения и прогрессирования таких заболеваний сначала необходимо выяснить изменения эндотелиального фенотипа, происходящие в. Однако работ, посвященных изучению происходящих в норме возрастных изменений эндотелийзависимой регуляции тонуса артерий большого круга кровообращения,, крайне мало, они охватывают лишь отдельные регионы сосудистого русла и часто носят феноменологический характер. Изучение тонких механизмов эндотелийзависимой. Результаты данного исследования указывают на необходимость учитывать при фармакологических воздействиях не только региональные, но и возрастные особенности механизмов эндотелийзависимой регуляции тонуса сосудов. Механизмы эндотелийзависимого расслабления сосудов. Эндотелий представляет собой монослой, выстилающий внутреннюю поверхность сосудистого русла. У взрослого человека эндотелий образован примерно клеток и его масса составляет около 1,4 от массы, тела , , . Впервые он был описан в году Теодором. Шванном как отчетливо различимая мембрана ii i , однако свое название он приобрел позднее, в году, от Уильяма Гиса i i. В е гг. XX в. И только в г. Фарчготг , позднее получивший. Нобелевскую премию, и Завадски i обратили внимание на важную роль эндотелия. На кольцевых препаратах аорты кролика показали, что ацетилхолин вызывает расслабление гладкой мышцы сосуда только в присутствии эндотелия Как выяснилось позднее, оксид азота являлся тем выделяющимся из эндотелия фактором, который и приводил к расслаблению . В последние три десятилетия стало понятно, что помимо 0 эндотелий продуцирует или играет важную роль в продукции и другие вещества, которые обеспечивают поддержание баланса между вазоконстрикцией и вазодилятацией. К таким веществам относятся продукты метаболизма арахидоновой кислоты, пептиды эндотелин1 и ангиотензин II, супероксид анион. В норме, т. Кроме этого, в последнее время все больше данных накапливается о еще одном факторе, продуцируемом эндотелием и приводящем к расслаблению гладкой мышцы, эндотелиальном гиперполяризующем факторе, или i, i, . В экспериментальных условиях активацию эндотелия часто осуществляют при помощи ацетилхолина. В нормальных физиолошческих условиях активацию эндотелийзависимых сосудорасширительных механизмов связывают, главным образом, с напряжением сдвига. Важно подчеркнуть, что эндотелий может проявлять антикоистрикторную функцию, заключающуюся в противодействии сокращению сосудов Мслькумянц, Балашов, . Вероятно, такое противодействие сокращению может оказаться чрезвычайно важным для нормального функционирования организма, предотвращая чрезмерные сократительные реакции и вазоспазмы. В настоящее время выделяют 3 основных эндотелиальных фактора, приводящих к расслаблению гладкой мышцы. К ним относятся простациклин, оксид азота и гиперполяризация. Относительный вклад этих механизмов в реализацию эндотел и йзависимого расслабления сосудов и регуляцию кровотока варьирует в зависимости от пола и вида животного, а также размера сосуда и типа сосудистого русла. Кроме того, может наблюдаться изменение соотношения значимости каждого из механизмов при развитии и стлрении организма, а также при различных патологиях . Простациклин. Среди сосудорасширительных факторов, выделяемых эндотелием, простациклин был открыт первым . Простациклин один из основных продуктов метаболизма арахидоновой кислоты по циклооксигеназному пути. Он является мощным эндогенным ингибитором агрегации тромбоцитов , V, . Механизм расслабления артерий под действием простациклина включает в себя образование циклического аденозинмонофосфата цАМФ который активирует протеинкиназу А РКА.