Миогенный ответ сосудов : роль пуринергических рецепторов и натрий-калий-хлор котранспорта

• Автор: Кольцова, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.03.01, 03.01.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 146 с. : ил.

1. Введение.

2. Обзор литературы

2.1. Общие принципы регуляции сокращения ГМК.

2.2. Пуринергические рецепторы как регуляторы тонуса сосудов.

2.2.1. Р2Х и Р2У рецепторы.

2.2.2. Физиологическое и патофизиологическое значение

2.3. Ионные механизмы регуляции сокращения ГМК сосудов.

2.3.1. Хлорные каналы

2.3.2. Хлорсопряженные переносчики

2.3.2.1. Основные свойства и регуляция 1КСС

2.3.2.2. Роль 1ЧКСС1 в физиологических и патофизиологических процессах

2.4. Миогенный ответ сосудов микроциркуляторного русла.
2.4.1. Физиологическая значимость
2.4.2. Роль в патологических процессах.
2.5. Молекулярные механизмы формирования миогенного ответа.
2.5.1. Первичный стимул
2.5.2. Первичный сенсор
2.5.3. Деполяризация как универсальный механизм развития МО
2.5.4. Внутри клеточные сигнальные пути, активирующиеся при МО
2.5.5. Специфика МО в сосудах различной локализации
3. Материалы и методы
3.1. Объекты исследования
3.1.1. Брыжеечные артерии мыши.
3.1.2. Гладкомышечные клетки линии V
3.1.3. Приготовление тканевого лизата
3.1.4. Получение эритроцитов.
3.2. Оценка сократительной активности брыжеечных артерий.
3.3. Методы изучения ионного гомеостаза клеток.
3.3.1. Активность , К, 2СГ котранспорта в культуре ГМК.
3.3.2. Активность , К, 2СГ котранспорта в эритроцитах
3.3.3. Измерение внутриклеточного содержания СГ
3.3.4. Определение концентрации свободного внутриклеточного кальция .
3.3.5. Электрофизиологические измерения
3.4. Биохимические методы
3.4.1. Измерение концентрации белка модифицированным методом Лоури
3.4.2. Измерение концентрации белка методом Бредфорда
3.4.3. Электрофорез белков в полиакриламидном геле.
3.4.4. Вестернблот
3.5. Растворы
3.6. Реактивы
3.7. Статистическая обработка результатов
4. Результаты
4.1. Р2Х и 2 рецепторы роль в регуляции сокращения и миогенного ответа брыжеечных артерий
4.1.1. Р2 рецепторы как тригеры сокращения брыжеечных артерий
4.1.2. Влияние буметанида на сокращения брыжеечных артерий, вызванные АТР и
4.1.3. Роль Р2 рецепторов в регуляции миогенного ответа
4.2. Петлевые диуретики как регуляторы сокращения брыжеечных артерий роль анионов бикарбоната.
4.2.1. Регуляции сокращения брыжеечных артерий буметанидом и НС
3.2. Оценка сократительной активности брыжеечных артерий.
3.3. Методы изучения ионного гомеостаза клеток.
3.3.1. Активность , К4, 2СГ котранспорта в культуре ГМК
3.3.2. Активность , К, 2СГ котранспорта в эритроцитах
3.3.3. Измерение внутриклеточного содержания С Г.
3.3.4. Определение концентрации свободного внутриклеточного кальция
3.3.5. Электрофизиологические измерения
3.4. Биохимические методы
3.4.1. Измерение концентрации белка модифицированным методом Лоури.
3.4.2. Измерение концентрации белка методом Бредфорда
3.4.3. Электрофорез белков в полиакриламидном геле.
3.4.4. Всстернблот
3.5. Растворы
3.6. Реактивы
3.7. Статистическая обработка результатов
4. Результаты
4.1. Р2Х и 2 рецепторы роль в регуляции сокращения и миогенного ответа брыжеечных артерий
4.1.1. Р2 рецепторы как тригеры сокращения брыжеечных артерий
4.1.2. Влияние бумеганида на сокращения брыжеечных артерий, вызванные АТР и .
4.1.3. Роль Р2 рецепторов в регуляции миогенного ответа
4.2. Петлевые диуретики как регуляторы сокращения брыжеечных артерий роль анионов бикарбоната.
4.2.1. Регуляции сокращения брыжеечных артерий буметанидом и НСОэ
Список используемых


Бикарбонат уменьшает буметанидчувствительную компоненту сопряжения возбуждения и сокращения ГМК брыжеечных артерий. Ингибирующее действие НСОз обусловлено снижением буметанидчувствительиой компоненты регуляции мембранного потенциала,
внутриклеточных концентраций ионов Са и СГ, что частично связано с ингибирующим действием этого аниона на активность 1. Ингибирующее действие буметанида на сокращения и развитие миогенного ответа брыжеечных артерий обусловлено взаимодействием с универсальной изоформой ,, котранспорта ГМК этих сосудов. Основной функцией гладких мышц является их способность к поддержанию базального тонуса и развитию сократительных реакций тканей, которые контролируются большим числом гормонов и пейротрансмиттеров. Вне зависимости от природы стимула, сокращение ГМК осуществляется за счет движения относительно друг друга нитей актина и миозина, энергетические затраты которого обеспечиваются АТФазной реакцией, обнаруженной В. А. Энгельгардгом и М. Н. Любимовой , iv, . Механизм регуляции этого процесса в ГМК рассмотрен ниже. Активация гладких мышц различными агонистами или электрической деполяризацией приводит к быстрому повышению концентрации внутриклеточного кальция Са2, обусловленному высвобождением Са2 из саркоплазматического ретикулума СПР и входом Са через потенциалзависимые кальциевые каналы. В отличие от скелетной и сердечной мускулатуры, где АТФазная активность актомиозинового комплекса
инициируется взаимодействием Са с тропонином С Филатов и др. ГМК требуется предварительное фосфорилировние легких цепей миозина i i i, 2 специализированной киназой i i i i, , активирующейся при взаимодействии с
комплексом Са кальмодулин Шуба, Кочемасова, . Да. Основные свойства миозиновой фосфагазы обусловлены 1 и включают связывание РР1с и субстрата миозин. Функция третей субъединицы не известна I . Таким образом, расслабление ГМК может быть вызвано как нормализацией 7 с последующей инактивацией
г так и стимуляцией рис. Ингибирование основной механизм Са2 сенситизации в большинстве изученных на этот предмет ГМК рис. Ингибирование активности этого голофермента может происходить как за счет его диссоциации арахидоновой кислотой . Последний механизм опосредован рядом сигнальных белков, включая киназу, Ii киназу, I киназу киназа, связывающаяся лейциновой молнией, протеинкиназа мышечной дистрофии, I ингегринсвязанные киназы, РАК рактивированная киназа и 1 более подробно см. I, , , . Наряду с прямым фосфорилированием регуляторной субъединицы ингибирование этого фермента может быть опосредовано фосфорилированием протеинкиназой С РКС белка I i i i i Iii. I эндогенный теплостойкий белок с молекулярной массой кДа специфически
ингибирующий . Было показано, что этот белок широко экспрессируется в гладкомышечных тканях, особенно в артериях, и является субстратом для РКС . Сейчас известно, что другие киназы, включая киназы , I, I, РАК и протенкиназу , способны фосфорилировать и активировать I. Как упоминалось выше, эти протеинкиназы так же могут напрямую фосфорилировать 1 и, таким образом, регулировать активность . Ряд данных указывает на то, что , I и I также могут осуществлять фосфорилирование , что является достаточным условием для Са2независимого сокращения ГМК более подробно см. I, , . Сравнительно недавно было установлено, что регуляция актомиозиновой АТФазы может проходить при участии калъдесмона и кальпонина. Капьдесмон и кальпонин актин и кальмодулин связывающие белки, расположены периферически вдоль спирали полимеризованного актина. Оба белка обладают способностью связываться с актином и тем самым ингибировать активность актомиозиновой АТРазы Гусев, . В свою очередь фосфорилирование этих белков будет снимать их ингибирующее действие. Возможными кандидатами, которые могут фосфорилировать кальдесмон и кальпонин являются РКС и РКА . V . Хорошо известно, что с АМР и зависимые протеинкиназы РКА и , соответственно играют важную роль в развитии Са десенситизации ГМК. Одним из механизмов действия циклических нуклеотидов является фосфорилирование рис.