Иммунобиологические свойства бирнавируса птиц и разработка средств специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни

• Автор: Алиева, Айзанат Кадыровна
• Шифр специальности: 03.02.02, 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 316 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление

Перечень условных обозначений.

1. Общая характеристика работы

2. Обзор литературы

2.1. Инфекционная бурсальная болезнь птиц

2.2. Характеристика вируса.

2.3. Патогенез и связь с другими болезнями.

2.4. Средства специфической профилактики ИББ.

2.4.1. Живые вакцины для специфической профилактики ИББ

и схемы их применения

2.4.2. Инактивированные вакцины при ИББ и схемы их применения
2.4.3. Инактиванты и их характеристики
2.4.4. Адъюванты и их свойства
2.4.5. Новые направления в иммунопрофилактике ИББ.
3. Собственные иследования.
3.1. Материалы и методы
3.1.1 .Характиристика использованных материалов.
3.2. Результаты исследований.
3.2.1. Сравнительное изучение иммунобиологических свойств
изолятов и эталонного штамма вируса ИББ
3.2.2. Оценка репродуктивной способности вакцинных штаммов вируса ИББ в различных биологических системах.
3.2.2.1. Репродукция вируса в эмбрионах птиц.
3.2.2.2. Репродукция в культурах клеток.
3.2.3. Разработка технологии производства живой вакцины против ИББ из штамма КБК.
3.2.3.1. Оценка антигенной активности вакцинных штаммов вируса ИББ
3.2.3.2. Проверка штамма КБК на стабильность и безвредность
3.2.3.3. Иммуногенная активность вакцинного штамма КБК
3.2.3.4. Иммуиодепрессивная активность штамма КБК вируса ИББ.
3.2.3.5. Термостабильность и устойчивость к действию различных физикохимических факторов штамма
КБК вируса ИББ
3.2.3.6. Гемагглютинирующая активность
3.2.3.7. Морфология и структура штамма КБК вируса ИББ
3.2.3.8. Комиссионная проверка вакцинного штамма КБК
вируса ИББ.
3.2.3.9. Изучение экспериментальных серий вакцины из
штамма КБК в лабораторных условиях
3.2.3.9.1. Изучение иммуногенности вакцины из штамма КБК при различных методах
введения.
3.2.3.9.2. Изучение сроков наступления и продолжительности иммунитета
3.2.3.9.3. Ассоциированная вакцинация против ИББ и болезни Марека
3.2.3.9.4. Разработка методов контроля вирусвакцины против ИББ
3.2.3 Испытания вирусвакцины в полевых условиях.
3.2.4. Разработка технологии производства инактивированной вакцины
против ИББ
3.2.4.1. Разработка технологии получения вирусного сырья
3.2.4.2. Разработка метода очистки вируса ИББ.
3.2.4.3. Разработка режима инактивации вируса ИББ.
3.2.4.4. Выбор адъюванта для инактивированной вакцины
против ИББ.
3.2.4.5. Разработка методов контроля эмульсионной инактивированной вакцины против ИББ
3.2.4.6. Испытания эмульсионной инактивированной вакцины
против ИББ в полевых условиях
3.2.5. Характеристика производственных серий вакцин
против ИББ
4. Обсуждение результатов исследования
5. Выводы.
Практические предложения
Список литературы


В режиме реального времени ОТПЦР используется в качестве основного инструмента для молекулярной диагностики ИББ. Этот метод позволяет потенциально быстро дифференцировать классические штаммы от высоковирулентных и вариантных штаммов вируса ИББ2. Культивирование вируса. Вирус ИББ активно культивируется в развивающихся эмбрионах СПФкур, а также в культурах клеток фибробластов, почек и фабрициевых сумок куриных эмбрионов 6, , 6. Хотя не все эмбрионы кроме СПФ могут быть восприимчивы к вирусу ИББ. Установлено, что эмбрионы из хозяйств, неблагополучных по ИББ, устойчивы к заражению данным вирусом изза наличия в эмбрионах антител к вирусу ИББ. Поэтому выбор сырьевого источника при производстве вакцин против ИББ все еще остается актуальным. Возбудитель ИББ, как уже указывалось, хорошо размножается в первичной культуре клеток куриных фибробластов. Помимо клеток куриного происхождения, вирус также размножается в культурах клеток, полученных из индюшиных и утиных эмбрионов 2, , , , 6, 2, 1, а также клеточных линиях млекопитающих, происходящих из почек кролика ЮС. Уего 2, 8 иВСМ 2. П.С. ИББ в трех клеточных линиях почек обезьян МА4, Уего и ВСМ. Репликация вируса наблюдается во всех трех клеточных линиях, однако цитопатические изменения более всего были заметны в клетках ВОМ. Кривая роста одного из штаммов, проверенных в клетках ВОМ, была подобна той, которая наблюдалась в культуре фибробластов куриных эмбрионов. Инфицированные эмбрионы в большинстве случаев погибают на 35 день после их заражения, хотя гибель может наблюдаться до 79 дней. Наибольшая гибель эмбрионов наблюдается при инокуляции вируса на хорионаллантоисную оболочку, затем при введении в аллантоисную полость. Заражение эмбрионов в желточный мешок вызывает низкий процент их гибели 8. Поэтому многие авторы рекомендуют для первичного выделения вируса и быстрой адаптации, вновь выделенных штаммов заражение куриных эмбрионов проводить на хорионаллантоисную оболочку 8. При культивировании вируса на утиных эмбрионах заражение их вирусом ИББ на хорионаллантоисную мембрану и в желточный мешок одинаково эффективно. В зараженных куриных эмбрионах самая высокая концентрация вируса обнаружена в хорионаллантоисной оболочке и тканях эмбриона через часов. Концентрация вируса в аллантоисной жидкости очень низкая. По мере увеличения числа пассажей степень отставания в росте и смертность у зараженных эмбрионов возрастает. Гибель зараженных эмбрионов обычно наблюдают на 34 пассаже через ч после заражения. Характерными изменениями у куриных эмбрионов, зараженных вирусом ИББ, являются гиперемия и отек кожи в области головы и щей, кровоизлияния в коже и подкожной клетчатке, утолщение и помутнение хорионаллантоисной оболочки. В более поздние сроки 46 день после заражения, кроме того, появляются отеки в области брюшной стенки зародыша, обширные кровоизлияния на кожном покрове, в суставе пальцев. Эмбрионы отстают в росте и развитии. Наблюдаются поражения внутренних органов. Печень увеличена, желтоватого цвета, с наличием на поверхности бледнозеленых очажков различной формы, пятнистых кровоизлияний. Селезенка увеличена, бледного цвета с наличием небольших некротических фокусов. В почках гиперемия, пятнистый некроз. Сердечная мышца обесцвечена. Легкие гиперемированы 8, 1. Вирус ИББ патогенен для утиных эмбрионов и вызывает у них при заражении в дневном возрасте такие же изменения, как и у куриных эмбрионов, хотя несколько менее выраженные. Ранние дегенеративные изменения обнаруживаются в печени в виде воспаления. Печень приобретает зеленоватый оттенок 6, . В культуре клеток вирус ИББ вызывает специфическую цитопатологию, которая четко проявляется через ч и характеризуется образованием в монослое пустот. В процессе дальнейшего инкубирования появляются цитопатические изменения, вакуолизация и округление отдельных групп клеток монослоя, цитолиз и пикноз ядер, образование клеточных конгломератов, соединенных цитопатическими тяжами. Сроки наступления цитопатических изменений зависят от дозы вируса и количества пассажей.