Экспрессные иммунохимические тест-системы для определения токсикантов в продуктах питания

• Автор: Белоглазова, Наталия Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 183 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Некоторые загрязнители продуктов питания и неиммунохимическис методы их определения

1.1.1 Полициклические ароматические углеводороды (ПАУ)

1.1.2 Микотоксины

1.1.3 Антибиотики

1.2 Инструментальные иммунохимическне методы определения загрязнителей продуктов питания

1.2.1 Общая характеристика иммунохимических методов анализа (ИХМ)

1.2.2 Иммуноферметные методы анализа (ИФА)

1.2.3 Биосенсоры

1.2.4 Флуоресцентный иммуноанализ (ФИА)
1.2.5 Метод поляризационного флуоресцентного иммуноаншшза (ПФИА)
1.3 Неиструментальные иммунохимическне методы определения загрязнителей продуктов питания
1.3.1 Иммунохроматографический тсст-метод (ИХА)
1.3.2 Иммунофильтрационный тест-метод
1.3.3 Колоночный иммунохимический тест-метод
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1 Материалы и оборудование
2.2 Синтез используемых реагентов
2.2.1 Синтез этилендиаминфлуоресцеинтиокарбомата (ЭДФ)
2.2.2 Синтез конъюгатов ПАУ с флуоресцентными и ферментными метками и с белками-носителями
2.2.3 Синтез конъюгатов охратоксина А с флуоресцентными метками и пероксидазой хрена
2.2.4 Синтез конъюгатов афлатоксина В1 с флуоресцентными метками
2.2.5 Синтез конъюгатов цефалоспоринов с флуоресцентными метками
2.2.6 Синтез конъюгата гентамицина с ФИТЦ
2.2.7 Приготовление раствора коллоидного золота
2.2.8 Получение конъюгатов бензо[а]пирена с коллоидным золотом (КЗ)
2.2.9 Получение коъюгата специфичных к гентамицину антител с коллоидным золотом

2.2.10 Получение конъюгата бензо[а]пирена с квантовыми точками
2.3 Методы исследования
2.3.1 Методика проведения поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА)
2.3.2 Методика проведения анализа колоночным иммунохимическим тест - методом
2.3.3 Методика проведения анализа иммунохимической системой «Бепоча»
2.4 Расчет констант аффинности антител
2.5 Пробоподготовка анализируемых образцов
2.5.1 Пробоподготовка красного вина
2.5.2 Пробоподготовка пива
2.5.3 Пробоподготовка образцов пищевых добавок
2.5.4 Пробоподготовка молока
3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗАГРЯЗНИТЕЛЕЙ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ В ОБРАЗЦАХ С ПРОСТЫМИ МАТРИЦАМИ
3.1 Принцип и методика проведения анализа иммунохимическим колоночным тест-методом
3.2 Выбор оптимального носителя и способа иммобилизации антител для приготовления детектирующего иммунослоя
3.3 Определение пирена и бензо[а]пирена в воде колоночным иммунохимическим тест-
методом

3.3.1 Оптимизация условий определения пирена и бензо[а]пирена колоночным иммунохимическим тест -методом
3.3.2 Определение пирена колоночным иммунохимическим тест-методом
3.3.3 Определение бензо[а]пирена колоночным иммунохимическим тест-методом с добавленным в систему контрольным иммунослоем
3.3.4 Определение пирена и бензо[а]пирена в водных объектах колоночным иммунохимическим тест -методом
4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗАГРЯЗНИТЕЛЕЙ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ В ОБРАЗЦАХ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИХСЯ СЛОЖНЫМИ МАТРИЦАМИ
4.1 Определение охратоксина А в вине

4.1.1 Оптимизация условий определения охратоксина А в красном вине колоночным иммунохимическим тест-методом
4.1.2 Разработка методики пробоподготовки образцов вина
4.2 Одновременное определение двух аналитов различной природы (охратоксина А и 2,4,6-трихлорфенола) в вине колоночным иммунохимическим
тест-методом
4.2.1’ Подбор оптимальных условий для определения ТХФ в образцах вина
4.2.2 Аналитические характеристики определения 2,4,6-трихлофенола
4.2.3 Одновременное определение двухнеродственных по природе аналитов
4.2.4 Анализ образцов красного вина
4.3 Оптимизация способа пробоподготовки пива перед определением в нем афлатоксина
В1 методом ПФИА
4.4. Разработка методик ПФИА определения антибиотиков в молоке
4.4.1 Определение цефалоспориновых антибиотиков в молоке методом

4.4.2 Определение гентамицина в образцах молока методом ПФИА
5. РАЗРАБОТКА ИМУНОХИМИЧЕСКОГО ТЕСТ-МЕТОДА С КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ИНТЕРПРЕТАЦИЕЙ РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1 Возможность применения детектирующей иммунохимической системы «Senova» для определения бензо[а]пирена
5.2 Разработка колоночного иммунохимического тест-метода с количественной
интерпретацией результатов
5.2.1 Оптимизация условий проведения анализа
5.2.2 Определение бензо[а]пирена в образцах пищевых добавок
6. ВАРЬИРОВАНИЕ ДЕТЕКТИРУЮЩЕЙ МЕТКИ В КОЛОНОЧНОМ ИММУНОХИМИЧЕСКОМ ТЕСТ-МЕТОДЕ
4.5.1 Использование в качестве метки коллоидного золота
4.5.2 Использование в качестве метки Cd/Te квантовых точек
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

реакции антиген-антитело, возможность легкого химического присоединения к антигену (наличие в структуре функциональных групп) и необходимость различия в длинах волн возбуждения и эмиссии ее и присутствующих в пробе других способных флуоресцировать соединений или группировок [152; 200; 201]. Особенно удобным для ПФИА оказался флуоресцеин- и его производные, который обладает многими из вышеперечисленных достоинств.
К достоинствам ПФИА можно отнести высокую чувствительность и селективность определения, отсутствие стадий пробоподготовки реагентов, минимальный объем требуемой пробы, достаточно хорошую воспроизводимость результатов, быстроту анализа большого числа образцов. К настоящему моменту поляризационный флуоресцентный иммуноанализ разработан и используется для контроля за содержанием; лекарственных соединений- [202], пестицидов [203] и т.д. Описаны случаи определения инфекций методом ПФИА [204].
Разработаны ПФИА методики определения большинства.основных микотоксинов (афлатоксины, фуманизины, ОТА, зеараленона, дезоксиниваленола и пр.), и некоторые из них коммерчески доступны. Тема определения микотоксинов методом ПФИА освещена в ряде статей [205, 206]. Отдельные работы посвящены детекции афлатоксинов в кукурузе,позволяющие детектировать токсины с содержанием 5 нг/г и выше [207], ОТА в рисе (предел обнаружения 6 нг/г) [208, 209] и многих других микотоксинов, не рассматриваемых в данной-работе. Разработка ПФИА методик для определения-АфВ1 в пиве к настоящему моменту в литературе не описана.
В работе Ъътха Б. и др. описана разработка ПФИА методики для определения ОТА в красном вине [210] Достигнутый предел обнаружения, составил 0.7 нг/мл. Для очистки вина образцы обрабатывали метанолом и проводили твердофазную экстракцию с использованием аминопропилдериватизированного силикагеля.
Предел обнаружения бензо[а]пирена данным методом в работе И. Горячевой и др. составил 0.9 нг/мл, что делает возможным определять токсикант в продуктах питания и объетах окружающей среды [211].
Практически все работы по определению гентамицина ПФИА методом датированы концом XX в., более поздних работ на эту тему не найдено. Описано определение его содержания данным методом в биологических объектах [212, 213], а работ по определению его в молоке анализ литературных источников не выявил.
Упоминания о разработке ПФИА для определения цефалоспоринов в молоке к настоящему моменту в литературе не встречается.