Оксидантный статус и ростовые процессы в нервной ткани новорожденных крыс после пренатальной свинцовой интоксикации и фармакологическая коррекция возникающих нарушений

• Автор: Кравцов, Александр Анатольевич
• Шифр специальности: 03.01.04, 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 150 с. : ил.

Введение.

1 Обзор литературы

1.1 Общая характеристика токсического воздействия свинца

1.2 Действие свинца на нервную систему

1.3 Пути реализации нейротоксического действия свинца.

1.4 Активация свинцом окислительных процессов в нервной ткани.

1.5 Изменение работы ферментов в нервной ткани под влиянием свинца

1.6 Развитие нервной системы, нейритный рост и свинец.

1.6.1 Нейритный рост

1.6.2 Нарушение нейритного роста под воздействием свинца

1.7 Глутатионовая система и свинец

1.7.1 Биологическая роль глутатиона.
1.7.2 Содержание, распределение и метаболизм глутатиона в мозге.
1.7.3 Ферменты глутатионовой системы
1.7.4 Защитная роль АТС при свинцовой интоксикации
1.8 Роль глутамата в мозге в условиях нормы и патологии.
1.8.1 Физиологическая роль глутамата
1.8.2 Патогенетическая роль глутамата.
1.8.3 Нарушение функций глутамата под воздействием свинца.
1.9 Предупреждение последствий свинцовой интоксикации.
1. Коменовая кислота
1. Заключение по обзору литературы
2. Методика исследования.
2.1 Содержание и кормление животных.
2.2 Схемы экспериментов.
2.3 Культура ткани
2.3.1 Культивирование спинальных ганглиев.
2.3.2 Культивирование клетокзерен мозжечка.
2.4 Методика экспериментов i vi.
2.4.1 Воздействие ацетатом свинца на спинальные ганглии.
2.4.2 Воздействие глутаматом на клеткизерна мозжечка.
2.5 Биохимический анализ
2.5.1 Определение малоиового диальдегида
2.5.2 Определение концентрации общего глутатиона, и
2.5.3 Определение активности глутатионредуктазы.
2.5.4 Определение активности глутатионпероксидазы.
2.5.5 Определение свободных радикалов.
2.6 Количественный анализ результатов.
2.6.1 Оценка ростовых процессов в культуре спинальных ганглиев
2.6.2 Оценка выживаемости нейронов после воздействия глутамата
2.6.3 Оценка результатов биохимических и хемилюминесцентных .
исследований
3 Результаты собственных исследований.
3.1 Пренатальное воздействие АС на оксидантный статус и АГС ткани головного мозга новорожденных крыс
3.2 Влияние свинцовой интоксикации на нейритный рост в культуре спинальных ганглиев новорожденных крыс
3.2.1 Изменение нейритного роста после пренатального воздействия АС
3.2.2 Изменение нейритного роста при прямом воздействии
АС на спинальные ганглии i vi.
3.3 Действие КК на оксидантный статус и состояние АГС ткани мозга
при свинцовой интоксикации
3.4 Нейропротекторный эффект КК при цитотоксическом действии глутамата в культуре клеток мозжечка
3.4.1 Нейропротекторный эффект КК в культуре клеток мозжечка дневных крыс, не подвергавшихся действию АС.
3.4.2 Нейропротекторный эффект I в культуре клеток мозжечка дневных крыс, подвергавшихся действию АС пренаталыто и в лактационный период.
4 Обсуждение полученных результатов
4.1 Индукция свинцом окислительного стресса в ткани развивающегося головного мозга
4.2 Нарушение нейритного роста при воздействии i viv и i vi
4.3 Нормализация КК оксидантного статуса и состояния АГС
в развивающемся мозге крыс при свинцовой интоксикации.
4.4 Цитотоксическое действие глутамата i vi на фоне свинцовой интоксикации и нейропротекторный эффект КК
4.5 Возможность использования КК для защиты развивающегося мозга
от последствий свинцовой интоксикации.
Заключение
Список использованных источников
СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧНЕНИЯ
АГС антиоксидантная глутатионовая система АС ацетат свинца
АФК активные формы кислорода
АХЭ ацетилхолинэстераза
ГАМК гаммааминомасляная кислота
ГПО глутатионпероксидаза
Г6ФД глукозо6фосфатдегидрогеназа
ГР глутатионредуктаза
ГТ глутатионтрасфераза
ДТНБ 5,5дитиобис2нитробензоат
ИЗР интенсивность зоны роста
ИПС исходная питательная среда
КК коменовая кислота
КН1 количество нейритов в пучке
МВЗР максимальная величина зоны роста
МДА малоновый диальдегид
НАДФ никотинамидадениндинуклеотидфосфат НТСБ 2нитро5тиосульфобензоат
НТВ 2нитро5тиобензоат
ОВЗР относительная величина зоны роста
ОКД отсроченная кальциевая дизрегуляция ПОЛ псрекисное окисление липидов
ППН плотность пучка нейритов
СМГ спинномозговые ганглии
СРО свободнорадикальное окисление
ССР сбалансированный солевой раствор
СОД супероксиддисмутаза
ТБК тиобарбитуровая кислота
ФАД флавинадениндинуклеотид
ФРН фактор роста нервов
XI хемилюминесценция
цАМФ циклическая аденозинмонофосфорная кислота
ЦНС центральная нервная система
ЭДТА этилендиаминтатраацетат
АМРА иамино3гидрокси5метил4изоксалолпропионовая кислота АР белок , ассоциированный с ростом
восстановленный глутатион
окисленный глутатион
гидроскиэтилпиперазин1этансульфоновая кислота МАР белки, ассоциированные с микротрубочками
ЫметилОаспартат
стандартный фосфатный буфер.
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Полученные данные исследования систем антиоксидантной защиты в ткани мозга после его пренатальной интоксикации свинцом дополняют результаты опубликованных ранее работ, показавшие прооксидантный и нейрогоксический эффект свинца, вводимого во время беременности, на ряд структур головного мозга потомства и, таким образом, расширяют представления о механизмах токсического действия свинца на развивающуюся нервную систему. Данные о нейропротекторном эффекте КК i viv и i vi служат экспериментальным обоснованием проведения доклинических и клинических испытаний препаратов на ее основе, в том числе, препарата Бализ2, для изучения возможности их использования с целью предотвращения отрицательного воздействия свинца на нервную систему в период эмбриогенеза и лактации. Окислительные процессы в ткани головного мозга потомства крыс после пренатальной интоксикации свинцом усиливаются, а механизмы антиоксидантной защиты подавляются. В культуре спинномозговых ганглиев новорожденных крыс после их внутриутробной интоксикации свинцом происходит нарушение нейритного роста. Оксидангный статус и состояние антиоксидантной глутатионовой системы в ткани головного мозга крыс, подвергнутых пренатально и во время лактации интоксикации свинцом, под влиянием коменовой кислоты нормализуются. Толерантность культивируемых нейронов мозжечка крыс к цитотоксическому действию глутамата после их интоксикации свинцом в пренатальный и ранний постиатальный периоды снижается. Коменовая кислота повышает толерантность культивируемых нейронов мозжечка крыс, подвергнутых во внутриутробный и лактационный периоды свинцовой интоксикации, к цитотоксичности глутамата. Апробация работы. СанктПетербург, г. Новые технологии в рекреации здоровья населения Владикавказ, г. Международной научной конференции Перспективы развития вузовской науки Дагомыс, Сочи, г. Международном конгрессе ветеринарных фармакологов Эффективные и безопасные лекарственные средства С. Петербург, г. III Международной научной конференции Традиционная медицина современное состояние и перспективы развития УланУдэ, г. Конференции получателей грантов регионального конкурса Российского фонда фундаментальных исследований и администрации Краснодарского края Вклад фундаментальных исследований в развитие современной инновационной экономики Краснодар, г. Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликовано печатных работ, в том числе 8 статей, из них 2 в журналах, рецензируемых ВАК. Подана заявка на получение патента. Структура и объм диссертации. Диссертация изложена на 0 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение, заключение и выводы. Работа иллюстрирована таблицами и рисунками. Указатель литературы включает отечественных и 5 иностранных публикаций. Работа выполнена при поддержке РФФИ гранты 3рюга 7рофи. Токсические эффекты свинца и веществ, содержащих свинец, интенсивно исследовались в течение более чем ста лет. В результате многочисленных экспериментальных и клинических исследований установлено, что практически все органы и ткани организма в той или иной степени могут повреждаться свинцом Переслегина и Загоскин, . Этот металл является одной из причин заболеваний сердечнососудистой системы Зербино и др. Гнидой и Дихлярук, , печени и почек . Золотов и Хмелевская, v . Каширина и Рогозина, , органов пищеварения Луговской и Легкоступ, и нервной системы Гаврилова, , Розанов, i, . Свинец накапливается в мембранах эритроцитов, связываясь со свободными группами белков Зербино и др. К настоящему времени выяснено, что свинец ингибирует синтез тема и гемоглобина, изменяет морфологию и жизнеспособность эритроцитов , , ухудшает состояние стенок сосудов Зербино и др. В конечном итоге вс это может явиться причиной гипоксии в различных органах Зербино и др. Свинец способен накапливаться в организме, прежде всего в костях Макаров и др. Зербино и др. Период полувыведения этого металла из костей исчисляется годами. Кроме того, накопленный в прошлом свинец особенно активно высвобождается из костной ткани в период деминерализации беременность, лактация, постменопауза, что ведт к повышению его уровня в других тканях.