Протеомный анализ околоплодных вод при физиологической и осложненной беременности

• Автор: Гунько, Виктория Олеговна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 157 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Околоплодные воды: функции, источники поступления, белковый состав
1.2. Протеомные технологии и их применение в биомедицинских
исследованиях
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Определение содержания белка по методу Брэдфорда
2.2. Подготовка образцов околоплодных вод для проведения электрофоретических исследований
2.3. Фракционирование белков двумерным электрофорезом
2.3.1. Изоэлектрофокусирование в иммобилизованном градиенте pH (Сбг§ А. И а1., 1995)
2.3.2. Электрофорез белков в градиенте полиакриламидного геля в присутствии ДДС-ТЧа
2.4. Окраска белков в гелях азотнокислым серебром
2.5. Масс-спектрометрическая идентификация белков
2.6. Определение содержания цинк-а-2-гликопротеина в околоплодных водах
2.7. Определение содержания супрессора метастазирования рака молочной железы-1 в околоплодных водах
2.8. Определение ДНК-связывающей активности субъединицы р65 транскрипционного фактора МЧсВ в околоплодных водах
2.9. Определение содержания цинка в околоплодных водах
2.10. Определение содержания меди в околоплодных водах
2.11. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ЗЛ. Анализ протеомного спектра околоплодных вод в разные периоды физиологически протекающей беременности
3.2. Сравнительный анализ протеомного спектра околоплодных вод при физиологической беременности и осложненной задержкой роста плода
3.3. Сравнительный анализ протеомного спектра околоплодных вод при физиологической беременности и осложненной гестозом
3.4. Сравнительный анализ протеомного профиля околоплодных вод при разных акушерских патологиях
3.5. Количественная оценка белков-маркеров осложненной беременности методами иммуноферментного анализа
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
2Д-ЭФ - двумерный электрофорез АА - акриламид
АФК - активные формы кислорода ДДС-Na - додецилсульфат натрия ДТТ - дитиотреитол ЖК - жирные кислоты ЗРП - задержка роста плода ИЛ - интерлейкин
ИГ И - иммобилизованный градиент pH ИПФР - инсулиноподобный фактор роста ИЭФ - изоэлектрическое фокусирование МАПК - митоген-активруемая протеинкиназа МБА - метиленбисакриламид
НАДФН - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный
ПААГ - полиакриламидный гель
ПГ - простагландин
ПЛ - плацентарный лактоген
ПОЛ - перекисное окисление липидов
ТЕМЕД - Х/КДИ’-тетраметилэтилендиамин
ТФР-[3 - трансформирующий фактор роста-[3
ФНО-а - фактор некроза опухоли-а
ХАПС - (3-(3-Холамидопропил)диметиламмоний-)-1 -пропансульфонат ЭФР - эндотелиальный фактор роста
CDK - cyclin-dependent kinases -циклин-зависимые киназы ESI- electrospray ionization - электроспрейная ионизация Hsp - heat shock protein - белок теплового шока MALDI - matrix-assisted laser desorption/ ionization-матрично-ассоциированная лазерная десорбция/ ионизация

плазме крови, что свидетельствует о существенных различиях в белковом составе этих биологических жидкостей, в связи с особенностями их функций (Park S. J. et al., 2006). Nillson S. и соавт. (2004) с помощью протеомного анализа в околоплодных водах выявили 219 белков, из которых 96 являются уникальными для этой среды, 70 - присутствуют в сыворотке крови матери, 18 - в цервико-вагинальной жидкости и 35 белков - во всех трех жидкостях. Максимальные различия в составе белков обнаруживаются в период между первым и вторым триместрами беременности.
В настоящее время с применением протеомного анализа расширился спектр белков, используемых для прогнозирования и диагностики ряда акушерских патологий. Разными группами исследователей проводился протеомный анализ околоплодных вод для диагностики преждевременных родов (Buhimschi I. A. et al., 2008; Queloz P.A. et al., 2007; Romero R. et al., 2008). Buhimschi I.A. и соавт. выявили в качестве маркеров внутриамниотической инфекции и воспаления с риском преждевременных родов - кальгранулин С, нейтрофильные дефензин-1 и дефензин-2. По результатам других авторов эти белки являются маркерами резус-конфликта между матерью и плодом. Группа других зарубежных авторов занимается поиском в амниотической жидкости маркеров ранней диагностики анеуплоидии, в том числе и синдрома Дауна (Cho C.K. et al., 2007, Tsangaris G.T et al., 2005; Park S.J. et al., 2008; Hassan M.I. et al, 2008).
Лишь одна публикация посвящена исследованию протеомного спектра околоплодных вод и сыворотки пуповинной крови при ЗРП (Cecconi D. et al., 2011), а также всего две статьи, в которых изучался протеомный профиль этой жидкости при преэклампсии. Так, по данным Vascotto С. и соавт. (2007) одним из ранних маркеров преэклампсии является окисленный транстиретин, т.е. мономерная форма этого белка, a Park J.S. и соавт. (2008) выявили 2 белка отличия при указанном осложнении беременности проаполипопротеин А-2 и белок SBBI42.