Экспрессия регуляторных генов при регенерации хрусталика и сетчатки у взрослых тритонов

• Автор: Макарьев, Евгений Олегович
• Шифр специальности: 03.00.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 182 с.

Содержание
Введение
1. Обзор литературы. Морфологические и молекулярногенетические аспекты исследования развития и регенерации глаза позвоночных.

1.1 Предшествующий этап исследования регенерации

1.2 Морфологические и цитохимические исследования регенерации хрусталика и сетчатки у позвоночных рыб, амфибий, птиц, млекопитающих

1.3 Молекулярногенетические подходы в исследовании механизмов регенерации.

1.4 Развитие глаза регуляторные гены и морфология

1.5 Роль морфогенетических факторов и регуляторных генов в регенерации глаза у различных видов животных

1.6 Идентификация и структурнофункциональная характеристика генов семейств x, x, ix

2. Материалы и методы

2.1 Объект исследования и техника получения образцов.

2.2 Получение гистологических препаратов нативной и регенерирующей сетчатки
2.3 Выделение тотапьной РНК
2.4 Выделение мРНК
2.5 Синтез кДНК
2.6 Нормировка кДНК библиотек
2.7 Полимеразная цепная реакция
2.8 Конструирование праймеров
2.9 Агарозный электрофорез
2. Выделение ДНК из агарозного геля на магнитных частицах
2. Выделение ДНК из агарозного геля с помощью i
2. Секвенировшше ДНК
2. Выращивание клеток, ведение культуры
2. Получение компетентных клеток
2. Клонирование в векторе ТОРО
2. Выделение плазмидной ДНК на колонках
2. Подготовка РНК зондов для i i гибридизации
2. I i гибридизация
3. Результаты
3.1 Стратегия исследований
3.2 Идентификация, секвенирование и клонирование ГТЦРфрагментов генов Рахб, x, ix3
3.3 Количественная оценка уровня экспрессии исследуемых генов в нативной и регенерирующей сетчатке
3.4 Локализация экспрессии генов Рахб, x, ix3 в нативной и регенерирующей сетчатке взрослых тритонов
4. Обсуждение
4.1 Введение
4.2 Основные результаты исследования
4.3 Клеточные источники регенерации сетчатки у позвоночных животных
4.4 ПЦРанапиз уровня экспрессии генов Рахб, x, ix3
4.5 Экспрессия изучаемых генов в хрусталике и роговице
4.6 Трансдифферснцировка клеток пигментного эпителия
4.7 Экспрессия генов Рахб, x и ix3 в дифференцированных и недифференцированных клетках сетчатки и пигментного эпителия у тритонов
4.8 Заключение
Выводы
Литература


Источником регенерации хрусталика у взрослых испанских тритонов являются клетки дорсальной области радужки обзоры , v, iv, Миташов, . В процессе регенерации хрусталика клетки дорсальной области радужки постепенно депигментируются, начинают активно пролиферировать и продуцировать специфические белки кристаллины, что приводит к восстановлению удаленного хрусталика. Вентральная область радужки в норме не способна к такой регенерации, однако при некоторых экспериментальных воздействиях клетки этой области формируют хрусталикоподобные структуры лентоиды и даже полноценные хрусталики i . i, I I, i, , 6 vi, , I . . Рис. Схема основных событий в процессе регенерации сетчатки у взрослых рыб. А при разрушении клеток наружного ядерного слоя происходит его восстановление за счет пролиферации клетокпрсдшсственников, являющихся источником формирования палочек в процессе роста глаза рыб. Источником сигналов, запускающих клеткипредшественники восстанавливать наружный ядерный слой, являются факторы, продуцируемые клетками наружного ядерного слоя на схеме сигналы няс. Б при разрушении палочек и колбочек клеткипредшественники палочек являются источником формирования, как палочек, так и колбочек. Пролиферирующие клетки обнаружены вблизи наружной ограничивающей мембраны. Источниками сигналов, запускающих клеткипредшественники палочек восстанавливать палочки и колбочки, являются факторы, продуцируемые клетками пигментного эпителия и наружной ограничивающей мембраной на схеме апикальные сигналы. В при разрушении палочек, колбочек и нейронов внутреннего ядерного слоя клеткипрсдшествснники палочек являются источником регенерации всех погибших клеток сетчатки. Пролиферирующие клетки обнаружены в контакте с наружной ограничивающей мембраной и Мюллеровскими глиальными клетками. Источниками сигналов, запускающих клеткипредшественники папочек восстанавливать палочки, колбочки и нейроны внутреннего ядерного слоя, являются факторы, продуцируемые клетками пигментного эпителия, наружной ограничивающей мембраной, Мюллеровскими клетками, внутренней ограничивающей мембраной на схеме апикальные и базальные сигналы. Из Вга1с1 е1 а1. Рис. Схема дифференцировки палочек. А Предполагаемая схема происхождения фоторецегтгоров. Предшественники сетчатки в периферической ростовой области СО В многослойной сетчатки стволовые клетки в внутреннем ядерном слое 1МЬ дают начало предшественникам, которые продолжают пролиферировать и мигрировать в внешний ядерный слой ОМЬ и становятся предшественниками палочек, которые пролиферируют и дифференцируются в палочковые фоторецепторы. В Предполагаемый ответ пролиферативных клеток во внутреннем и во внешнем ядерном слое в ответ на повреждения. Таким образом, клетки, вентральной и дорсальной областей радужки, неотличимые по морфологии и имеющие общее эктодермальное происхождение, реализуют в ходе регенерации хрусталика разные программы, причем с помощью экспериментального воздействия, возможно, их переключение с одной программы на другую. В процессе регенерации хрусталика выделяется ряд последовательных морфологичеких стадий, которые описываются в литературе согласно классификации Сато , , составленной для регенерирующего хрусталика тритона i , или по более поздней классификации, предложенной Ямадой для взрослых тритонов i vii , Рис. Следующая модель регенерация сетчатки в личиночном глазу лягушек i. Деваскуляризация сетчатки личинок лягушек приводит к дегенерации исходных клеток сетчатки1 и ее последующей регенерации в результате трансдиффсренцировки клеток пигментного эпителия , , . В формировании клеток нейроэпителия много общего с процессами, обнаруженными в глазу у взрослых тритонов. Авторы детально охарактеризовали процессы отслойки клеток пигментного эпителия от мембраны Бруха и последующую их миграцию в полость стекловидного тела Они обнаружили установление контакта мигрировавших клеток с васкулярной мембраной, сохраняющей свое строение.