Изучение полиморфных маркеров ДНК в кандидатных генах болезни двигательного нейрона

• Автор: Жеребцова, Анна Леонидовна
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Клиническая картина болезни двигательного нейрона

2. Современные представления о этиопатогенезе болезни двигательного нейрона.

2.1. Оксидантный СТРЕСС.

2.1.1. Ген I1 как возможный кандидатный ген БДН

2.2. Изменение цитоскелета как причина БДН

2.2.1. Ген 2.

2.3. Эксайтотоксичность как один из возможных механизмов гибели нейронов при БДН
2.3.1. Транспортры глутамата.
2.3.1 Л. Транспортер глутамата ЕААТ2
2.3.2. Рецепторы глутамата в патогенезе БДН.
2.3.2.1. Ген ионотропного глутаматного рецептора I1
2.3.2.2. Ген ионотропного глутаматного рецептора I2
2.4. Система детоксикации ксенобиотиков как модулятор повреждающего действия факторов внешней среды в развитии БДН
2.4.1. Гены первой фазы детоксикации. Цитохромы Р0.
2.4.1.1. Ген цитохрома С 21
2.4.1.2. Ген цитохрома 26.
2.4.2. Гены второй фазы детоксикации
2.42.1. Ген глутатионБтрансферазы 1.
2.4.2.2. Ген глутатионБтрансферазы 1
2.4.2.3. Ген глутатион8трансферазы 1.
2.4.2.4. Ген ацетилтрансферазы 2
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
I. Общая характеристика больных
II. Молекулярно генетические методы исследования
1. Выделение ДНК из клеток крови человека
2. Постановка полимеразной цепной реакции ПЦР
3. Введение радиоактивной метки в праймеры для ПЦР амплификации.
4. Электрофорез в полиакриламидном геле
4.1. Исходные растворы для проведения электрофореза
4.2. анализ.
4.3. анализ.
4.4. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
5. Молекулярногенетический анализ мутаций и полиморфных
ВАРИАНТОВ ГЕНОВ
5.2. Анализ IV95 СА полиморфизма гена I1.
5.3. Анализ полиморфизма гена 26.
5.4. Анализ полиморфизма гена 21.
5.5. Анализ полиморфизма генов глутатион8трансфераз М1 и Т1
5.6. Анализ полиморфизма гена 1
5.7. Анализ полиморфизма гена 2.
5.8. Анализ полиморфизма гена ЕАА Т2.
5.9. Анализ полиморфизма гена I1
6.0. Анализ полиморфизма гена 12
III. Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Общая характеристика больных
2. Оценка вклада мутаций в гене 2 в патогенез спорадической формы БДН
3. Анализ IV95 СА полиморфизма гена I1.
4. Анализ полиморфизма 3 транспортра глутамата ЕААТ2. .
5. Анализ интронного полиморфизма АМРА глутаматных рецепторов.
6. Анализ инсерционного полиморфизма гена 21.
7. Анализ полиморфизма гена 26.
8. Анализ полиморфных маркеров генов глутатионБтрансфераз М1 иТ1
9. Анализ I5V полиморфизма гена 1
. Анализ полиморфизма гена 2.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Одним из доказательств роли белков цитоскелета в патогенезе БДН является выявление ассоциации между риском развития заболевания и полиморфизмом в кодирующей области гена тяжелой цепи нейрофиламентов и обнаружение очень редких мутаций в этом гене у больных БДН . Поэтому представляет интерес изучение и других белков, участвующих в формировании цитоскелета. АЬ, белковый продукт которого может играть важную роль в сигнальных путях клетки, внутриклеточном транспорте и организации цитоскелета, в частности, регуляции сборки микротрубочек . Ранее было показано, что мутации в этом гене приводят к развитию аутосомнорецессивной ювенильной формы БДН. Это позволяет предположить, что ген алсина может играть роль в патогенезе классической спорадической формы БДН. Детоксикация ксенобиотиков является одним из ключевых метаболических процессов в организме. Нарушения этого процесса могут приводить к развитию различных заболеваний, в том числе и нейродегенеративных. Рядом авторов уже отмечена ассоциация полиморфизмов некоторых генов системы детоксикации с развитием болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, БДН. Но такие исследования являются единичными и многие гены, белковые продукты которых вовлечены как в фазу активации, так и в фазу нейтрализации ксенобиотиков, ещ не были проанализированы у больных нейродегенеративными заболеваниями. Необходимо также подчеркнуть важность учета этнического фактора в ассоциативных исследованиях и даже в случае выявления ассоциации между ДНК маркером и заболеванием в одной популяции необходимо ее подтверждение в других, относящихся к разным этническим группам и популяциям. Исходя из важности роли в процессе детоксикации особый интерес для исследования представляют цитохромы СУР2Е1 и СУР6, ферменты глутатион Бтрансферазы Т1, М1, Р1, а также Иацетилтрансфераза . На сегодняшний день считается, что в механизмах гибели мотонейронов при нейродегенеративных заболеваниях, принимают участие процессы глутаматной эксайтотоксичности. Особый интерес представляют белок ЕЕАТ2, связанный с обратным транспортом глутамата, и ионотролные рецепторы глутамата I1 и 2 1,. В связи с этим целью настоящей работы было молекулярногенетическое исследование ассоциации болезни двигательного нейрона с генами, белковые продукты которых влияют на реакцию организма на оксидантный стресс, глутаматную эксайтотоксичность, функционирование цитоскелета мотонейронов и активность ферментов первой и второй стадий детоксикации ксенобиотиков. Провести поиск мутаций в кодирующей области и участках экзонинтронных соединений гена алсина 2. Провести анализ IV95 СА полиморфизма гена индуцируемого гипоксией фактора 1 I1 А. Провести анализ полиморфизмов генов глутаматэргической системы 3 гена транспортра глутамата ЕААТ2, и 9 генов ионотропных рецепторов глутамата I1 и I2. Исследовать полиморфизмы генов, белковые продукты которых принимают участие в процессах детоксикации ксенобиотиков инсерционный полиморфизм гена этанолиндуцибельного цитохрома Р0 21, 264 полиморфизм гена дебризоквин4гидролазы 26, делеционный полиморфизм генов глутатион8трансферазы , М1 и I 1, 1, 1, полиморфизм гена ариламинЫацетилтрансферазы 2. Для изучения вклада генетической составляющей в патогенезе БДН будут использованы методы ассоциативного анализа, основанные на исследовании полиморфных вариантов геновкандидатов в выборках больных и случайных контрольных выборках по типу случайконтроль с учетом пола, возраста и этнического происхождения больных БДН. Обнаружено, что в российской популяции развитие спорадической формы БДН не связано с мутациями в кодирующей области гена 2. Впервые показано, что генотип 1С1С гена 21 ассоциирован с шейным дебютом БДН, а инсерционный генотип 11 коррелирует с более тяжелыми формами БДН, такими как БДН с грудным и диффузным дебютами и прогрессирующим бульбарным параличом. Показано, что наличие мутантного аллеля 264 гена 26 ассоциировано с возрастом начала заболевания БДН в российской популяции. Выявлено снижение частоты нулевого генотипа гена 1 в группе больных БДН, что указывает на то, что нулевой аллель этого гена при БДН может играть роль протективного фактора.