Получение и молекулярно-генетическое исследование летальных мутаций гена leg-arista-wing complex у Drosophila melanogaster

• Автор: Модестова, Елена Андреевна
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Проблемы мутагенеза у дрозофилы

1.1.1. Радиационный мутагенез.

1.1.2. Химический мутагенез.

1.1.3. УФиндуцированный мутагенез

1.1.4. Мобильные элементы как мутагенные факторы.

1.1.5. РМгибридный дисгенез

1.1.6. Система продленной нестабильности.

1.1.7. Супернестабильность.

1.1.8. Горячие точки при мутагенезе

1.2. Использование генетической системы химерного белка для репрессии транскрипции гена
1.3. Характеристика гена ii x
1.3.1. Фенотип и картирование мутаций.
1.3.2. Исследование вкусовой и ольфакторной чувствительности у гомеозисных мутантов гена ii x у дрозофилы
1.3.3. Взаимодействие ii x с различными генами.
1.4. Краткая характеристика различных аллелей гена
1.5. Использование делеционного картировании для локализации мутаций и поиска межгенных взаимодействий.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Культивирование i .
2.2. Генетические методы.
2.3. Биохимические методы
2.4. Приготовление препаратов для микроскопии
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Поиск мутаций в мировой коллекции и их анализ
3.2. Результаты мутагенеза
3.3. Установление генотипа полученных леталей.
3.4. Дупликационнос картирование
3.5. Молекулярная природа полученных мутаций
3.6. Получение и анализ реинверсий и спонтанных мутаций.
3.7. Репрессия экспрессии генамишени при помощи химерного белка РРЬ
3.8. Нарушения в репродуктивной системе самок.
3.9. Нарушения в репродуктивной системе самцов
3 Поиск межгенных взаимодействий
ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Ионизирующее излучение оказывает довольно жесткое воздействие на ДНК, вызывая двухцепочечные разрывы и, как следствие этого, часто возникают различные типы хромосомных перестроек Лобашев, , Дубинин, Пашин, , ИнгеВечтомов, . Ауэрбах целый параграф назывался Вызывают ли рентгеновские лучи истинные генные мутации Рентгеновское излучение было первым освоенным способом проведения искусственного мутагенеза. Наиболее блестящие опыты на дрозофиле принадлежат Г. Мллеру, и до сих пор генетики используют многие мллеровские перестройки и хромосомыбалансеры ЬшсЫеу, 7л пип, . Сцепленные Ххромосомы, делении, инверсии большинством этих удобных и повседневно используемых генетических инструментов современные дрозофилисты обязаны пионерам радиационного мутагенеза. Методы искусственного получения и учета мутаций у дрозофилы метод сцепленных Ххромосом для учета видимых мутаций в Xхромосоме, метод С1В на летальные мутации в Ххромосоме, метод с хромосомой Мллер5, методы учета летальных мутаций в аутосомах получили широкое применение сразу же после обнародования Медведев, . Эксперименты по изучению мутагенного эффекта различных химических веществ были проведены В. В.Сахаровым и М. Е.Лобашевым уже в г. Но первые веществамутагены были несравнимо слабее уже принятого на вооружение учеными ионизирующего излучения. И лишь открытие Рапопортом и Ауэрбах мощных мутагенов дало зеленый свет химическому мутагенезу как методу Лобашев, . При химическом мутагенезе, как и при ионизирующем излучении, возникают все типы мутаций, хотя различным химическим агентам свойственна та или иная специфичность ИнгеВечтомов, , Дубинин, Пашин, . , для этилметансульфоната характерна в основном индукция точечных мутаций. В настоящее время на дрозофиле для получения мутаций чаще всего используется этилметансульфонат . Забегая вперед, скажу, что специфика как мутагена создала определенные проблемы при выполнении настоящей работы. Так индуцированная мутация 110, не комплементирующая с 1, была бы замечательной летальной мутацией в исследуемом гене, если бы, вопреки существовавшему описанию линии, в ней не присутствовали другие летальные мутации. Убедившись, что Ххромосома несет несколько более двух летальных мутаций неопределенной локализации, мы были вынуждены заняться самостоятельным получением новых мутаций. Уже без использования . Изучение мутагенного действия ультрафиолетовых лучей началось вскоре после открытия мутагенного эффекта рентгеновских лучей. В начале х годов было установлено, что УФлучи также способны взывать мутации, но так как в отличие от рентгеновских лучей и другого высокоэнергетического излучения вызывают только возбуждение атомов, а не ионизацию, то и спектр генетических повреждений от УФлучей несколько иной Ауэрбах, . Подобно рентгеновским лучам, ультрафиолет вызывает точковые мутации, небольшие делении, хромосомные аберрации, но они наблюдаются с другой относительной частотой преобладают точковые мутации и небольшие делении. Изучая воздействие ультрафиолетовых лучей на ДНК, обнаружили, что между соседними тимидинами могут возникать ковалентные связи сшивки, мостики, что повышает частоту точковых мутаций, нарушая нормальный процесс репликации ДНК. При работе с дрозофилой ультрафиолет как мутаген не используется. Мобильные элементы присущи живым организмам по крайней мере, найдены у всех болееменее изученных i . Благодаря своей относительной независимости и уникальным стратегиям репликации, дающим возможность увеличивать число копий и перемещаться, мобильные элементы сперва снискали славу генетических паразитов. Это мнение оказалось далеким от истины, ведь в хромосомах i , у которой нет теломерных повторов, в поддержании стабильности концов хромосом задействованы и элементы. Таким образом, в некторых случаях присутствие мобильных элементов вопрос жизни и смерти вида. У дрозофилы описано около сорока мобильных элементов i, i, . Наиболее мощное мутагенное воздействие присуще Р, , , , , и I i, i, . Как есть на радость биологам у ii i Iэлементы, бактериофаги X и Ми т.