Клонирование и молекулярно-генетическая характеристика (GATA)n-содержащих локусов генома партеногенетических ящериц Darevskia unisexualis

• Автор: Корчагин, Виталий Иванович
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

. Гипервариабельные последовательности генома минисателлиты.

Минисателлиты М типа

Мутации в минисателлитах.

ф II. Гипервариабельные последовательности генома микросателлиты

Типы микросателлитов.

Геномная локализация.

Участие в формировании хромосомных структур.

Влияние на рекомбинацию.

Влияние на репликацию.

Участие в регуляции экспрессии генов.
Участие в образовании неканонических структур ДНК.
Механизмы нестабильности микросателлитов.
Факторы, влияющие на нестабильность микросателлитов.
Рстропозоны и нестабильность тандемных повторов ДК.
III. Использование мини и микросателлитных последовательностей в
0 молекулярногенетических исследованиях.
Однополые позвоночные как модельные организмы для исследования изменчивости гипервариабельных последовательностей ДНК.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Получение геномной библиотеки О. итвехиаНв и отбор клонов, содержащих
м икросателлитныс повторы.
2. ПЦРанализ внутри и межпопуляционного полиморфизма й. ипЬехиаШ по локусам Ои3,Ои5иОи1.
3. ПЦРанализ локусов, гомологичных Ои3, Ои5 и Ои1, у родительских видов
О. пшгепвк и О. ii.
4. Нуклеотидные последовательности аллельных вариантов локусов Эи3,1и5 и
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При этом любые генетические признаки, сегрегирующие в поколениях, может быть маркированы вариантами ПДРФ, которые наследуются как простые менделевские признаки Виип е1 а Ценность отдельного полиморфною маркера зависит от числа его аллельных вариантов в популяции. В большинстве случаев варианты ПДРФ возникают в результате точковых нуклеотидных замен, небольших делений и вставок в сайтах узнавания рестриктазами. Такие изменения мутации приводят к появлению всего двух аллельных вариантов. Однако диморфные маркеры . Поэтому используют ДНКзонды, детектирующие области генома с повышенной вариабельностью, позволяющие получить маркеры, характеризующиеся многоаллельностью. А. Вайманом и Р. Уайтом i, . Этот гипервариабельный локус выявили с помощью клонированной анонимной последовательности ДНК из теломерного района хромосомы человека. Проведенный сегрегационный анализ показал, что все аллельные варианты данного локуса наследуются по меиделевскому типу. Авторы также показали, что по структуре локус представляет собой повторяющиеся олигонуклсотидные звенья. Позднее подобные локусы были обнаружены в других участках генома человека. Характерным свойством локусов, состоящих из тандемно повторяющихся о л и го нукл еоти дн ых звеньев, является заметная асимметрия в содержании пуринов и пиримидинов в разных звеньях, что напоминает сателлитную ДНК. При таком необычном нуклеотидном составе они, как правило, не содержат сайтов узнавания большинства рестрикгаз. Однако, в отличие от сателлитной ДНК, сконцентрированной в основном в центромерных районах хромосом, эти локусы имеют разную геномную локализацию. Поскольку гипервариабелыгые локусы высоко полиморфны, то их информативность как маркеров, в частности для анализа сцепления, значительно выше, чем у большинства биохимических маркеров например, изозимов ферментов или групп крови, а гетерозиготностъ в популяциях приближается к 0. Минисателлиты это участки ДНК длиной 0. . Последовательность нуклеотидов, образующая повторяющееся звено получила название Минисателлиты могут отличаться не только коровой л последовательностью, но и количеством се повторений, а также некоторыми различиями в составе самого повторяющегося звена. Такие минисателлиты представляют собой разные атлельные варианты, число которых в популяциях живых организмов может быть очень велико. По этой причине минисателлиты также называют гипервариабельными участками ДНК vi i Н V. Роль минисателлитов в геноме практически не изучена. Считается, что они могут участвовать в процессе связывания различных белков, а также являются горячими точками рекомбинации. В пользу последнего предположения свидетельствуют факты гомологии между последовательностями некоторых минисателлитов и участков, отвечающих за рекомбинацию например, коровая последовательность Джеффриса М минисателлит и iсайт . Последовательность, гомологичная коровой последовательности Джеффриса, была найдена в гене Ер главного комплекса гистосовместимости мышей, который содержит горячую точку рекомбинации. Однако ряд данных, указывают на то, что присутствие минисатсллита не является необходимым условием для рекомбинации , . Таким образом, выяснение роли минисателлитов и других типов тандемных повторов в геноме живых организмов требует проведения дополнительных исследований. Значительный вклад в изучение гипервариабельных локусов и их использование для генетического анализа внесли Л. Джеффрис и соавт. . В первом интроне миоглобинового. Используя данную коровую последовательность в качестве зонда для скрининга библиотеки геномной ДНК человека, А. Джеффрис показал, что этот фрагмент способен гибридизоваться с другими участками ДНК человека. В результате были выделены и охарактеризованы мшшеателлитные последовательности, состоящие из 3 тандемно организованных звеньев, повторяющиеся единицы которых различались но нуклеотидному составу и варьировали по длине от до п. Однако все повторяющиеся звенья содержали практически одинаковую коровую последовательность длиной нуклеотидов. За пределами коровой последовательности повторяющиеся звенья не имели гомологии.