Новое семейство генов иммунной системы млекопитающих, имеющих лизоцим-подобный домен, и их потенциальная применимость для генной терапии рака

• Автор: Киселев, Сергей Львович
• Шифр специальности: 03.00.26
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 220 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Обзор литературы

Основной принципы врожденного и приобретенного иммунитета 6 Рецепторы и лиганды, вовлеченные в неклональный иммунный ответ

Гуморальный иммунный ответ

Опухолевые антигены, кодируемые нормальными клеточными генами

Опухолевые антигены, кодируемые мутантными клеточными

генами

Опухолевые антигены, кодируемые вирусными генами

Клеточный иммунный ответ

Т лимфоциты
Натуральные киллеры и гимфокинактиеированные киллеры
Макрофаги
Факторы, ограничивающие эффективность действия противоопухолевого иммунитета
Клональные делении и игнорирование
Изменения в зкслресии молекул МНС
Селективная потеря антигена или элитолмых вариантов
Антигенная модуляция
Иммунологическое усиливание и блокирующие факторы
Агрессивное поведение самой опухоли
Белковые факторы, продуцируемые в процессе иммунного ответа сигналы опасности
Прямое цитолитическое действие на чужеродный антиген
Хемоаттракция хемотаксис
Стимуляция клональных Ти 8лимфоцитов и клеток врожденного иммунитета
Общая характеристика и свойства цитокинов
Семейство интерферонов
Интерлейкины
Семейство фактора нероза опухоли
Генная терапия и генная терапия опухолевых заболеваний
Системы переноса генов
Клинические исследования мишени, результаты и извлеченные уроки
Клинические исследования
Клиническая и техническая применимость
Использование генов для терапии опухолевых заболевании
Материалы и методы исследования
Ферменты и реактивы
Клеточные линии и первичные культуры клеток
Выделение нейтрофияов и лимфоцитов человека
Плазмидные и фаговые векторы
Штаммы бактерий
Трансформация клеток Е.
Выделение плазмидиой ДНК
Определение первичной последовательности ДНК
Выделение тотальной РНК
Реакция обратной транскрипции и амплификация фрагментов
ДНКад7
Нозерн и Саузерм блог гибридиэационмый анализ
Экспрессия рекомбинантного белка
Получение поликлональной антисыворотки и очистка антител
Иммунопреципитация белка Тэд7 из клеточных лизатов и кондиционной средыЗ
Электрофорез белков в полиакриламидном геле и Вестермблот анализ
Анализ мультимврной структуры белка
Иммуногистохимический анализ
Определение цитотоксической активности
Эгектронмомикросколический анализ опухолевых срезов
Получение стабильно трансфецированнь х клонов
Получение клеточной вакцины, модифицированной генами i vi
Анализ скорости роста опухолей i viv
Результаты исследования и их обсуждение
Клонирование и изучение генов 7 млекопитающих
Новое семейство генов млекопитающих, имеющих лизоцимподобмый домен 4 Разработка моделей генной терапии опухолей
Разработка лротизэопухолевей вакцины на основе аутологичных клеток, модифицированных геном 7 на мышиных моделях
Протокол клинических испытаний I фазы
Выводы
Благодарности
Список литературы


В низких концентрациях он представлен в нормальных взрослых тканях, таких как слизистая оболочка толстого кишечника, легочной ткани и в лактирующей молочной железе. Оценка уровня СЕЛ в сыворотке больных используется для диагностики опухолей легких, молочной железы и других типов , . Другим примером данного типа антигенов является аi , который в норме продуцируется фетальной печенью и клетками желточного мешка, и представлен в небольших количествах в сыворотке взрослых организмов Оценка количества в сыворотке пациентов обычно используется для детекции первичных опухолей печени и для мониторинга течения заболевания после терапии , . Эмбриональные и фетальные опухолевые антигены представлены в широком спектре опухолей человека. Клональные опухолевые антигены являются типичными для опухолей, имеющих Т и Вклеточное происхождение. Например, были получены идиотипы для поверхностно иммуноглобулинпозитивных Вклеточных опухолей . Для терапии данного типа опухолей успешно применяют идиотипслецифические антитела, которые предотвращают рост идиотиппозитивных клеток мышиной миеломы i vi И i VIV , , а также служат причиной частичной или полной ремиссии опухолей у пациентов с Вклеточной лимфомой , . Одним из подходов для индукции гуморального иммунного ответа в случае клональных антигенов является примененио моноклональных антиидиотипических вакцин, полученных против этих опухолевых антигенов . Идиотипическая специфичность, существующая у В и Тклеточных опухолей, определяет успешную терапию данного типа заболеваний. Опухолевые антигены, кодируемые мутантными клеточными генами. Некоторые типы опухолей, вызванных различными физическими или химическими карциногенами, несут мутации в клеточных генах, контролирующих нормальный рост и поведение клеток. Такие мутации случаются чаще всего в определенных генах и обладают высокой селективностью локализации в данном гене, многие из них непосредственно связаны с процессом опухолеобразования . Нормальный р действует как супрессор клеточного роста и экспрессируется в клетках в незначительных количествах, в то время как в опухолевых клетках был детектирован высокий уровень мутантного белка р , . Мутации чаще всего происходят в определенной эволюционно консервативной области гена , при этом различные мутации приводят к общим конформационным изменениям, что было установлено при помощи моноклональных антител к мутантным формам белка . Туморогенный потенциал протоонкогена также может быть приобретен в результате активирующих мутаций, затрагивающих его определенные сайты. Как было показано, мутантный вызывает продукцию специфичных антител , . Мутации, возникающие в ряде других генов, кодирующих такие белки как 8 , 4 и Ькатенин . Мутантные формы этих белков являются опухолевыми антигенами, узнаваемыми иммунной системой. Новые антигенные детерминанты могут также образовываться в результате внутренних делеций в кодирующей части гена, приводящих к возникновению нового белка, или к изменению его конформационной структуры Например, около глиобластом. , приводящую к экспрессии нового белка . Новая антигенная детерминанта узнается специфическими моноклональными антителами , и такие специфические для опухолевых клеток антитела успешно применяются в противоопухолевой терапии. Химерные белки могут также возникать в результате хромосомных транслокаций. Данный тип опухолевых антигенов часто встречается в различных опухолях человека . Наличие высоко консервативных участков поломки хромосом i приводит к тому, что при определенном типе заболеваний у различных индивидов могут возникать сходные химерные белки. Например, у пациентов с определенными типами лейкемии обнаруживается химерный белок . В других типах опухолей участки поломки хромосом могут знчительно варьировать, что приводит к образованию уникальных химерных белков Данный тип опухолевых антигенов специфически узнается антителами . Целый ряд ДНК содержащих онкогенных вирусов ассоциирован с человеческими опухолями.