Стимуляция роста нервных волокон стромальными клетками жировой ткани и дифференцировка этих клеток в нейральном направлении

• Автор: Лопатина, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.25, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Физиологическое обновление нервной ткани механизмы регуляции нейрогенеза

Генетические механизмы, запускающие нейрогенсз

Пронейральные гены

Нейротрофические факторы

Рецепторы нейротрофических факторов

Рост и регенерация нервных окончаний

Рост периферических нервов

Регенерация нервного волокна.

Стромальные клетки жировой ткани как материал для стимуляции роста нервов
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Выделение стромальных клеток из жировой ткани
Культивирование СКЖГ
Моделирование гипоксии
Индукция нейральной дифференцировки СКЖТ
Выделение РНК из клеток
Синтез первой цени ДИК на матрице РНК и ПЦР в реальном времени
Анализ содержания факторов роста в среде культивирования с помощью нммуноблоттннга
Имплантация СКЖТ в матригелс
Иммунофлуоресцеитный анализ
Анализ содержания ТгкВ на СКЖТ с помощью проточной цитометрии
Оценка плотности нервных волокон в матрнгеле
Оценка выживаемости и миграции СЮКТ при трансплантации
Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
СКЖТ стимулируют рост нервных волокон в Матрнгеле
СКЖТ секретируют нсиротрофичсскис факторы роста
Индукция нейральной дифференцировки СКЖТ
Индукция нейральной дифференцировки повышает экспрессию нейротрофическнх факторов в СКЖТ
Индукция нейральной дифференцировки СКЖТ повышает их способность стимулировать рост нервных волокон в матрнгеле
Индукция СКЖТ повышает выживаемость этих клеток при
трансплантации в нервную ткань
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Нейральная дифференцировки СКЖТ
Наличие в популяции СКЖТ нейральных предшественников
Секреторная активность СКЖТ регулирует дифференцировку нейральных
и эндотелиальных предшественников, стимулирует рост нервных
окончаний
Возможность применения СКЖТ для репарации нервной ткани
Планируемое развитие данного исследования
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Регенерация нервного волокна. . Физиологическое обновление нервной ткани взрослого организма происходит благодаря пролиферации и дифференцировке нейральных стволовых клеток в центральной и периферической нервной системе. Однако при обширных повреждениях мозга в результате инсультов и травм, при нейродегенеративных заболеваниях, а также при утрате значительной части нерва, активности нейральных стволовых клеток оказывается недостаточно для полноценного восстановления нервной ткани. Так, повреждения нервного волокна протяженностью более 3 см индуцируют его дегенерацию 1, поэтому в таких случаях восстановления иннервации тканимишени не происходит. В свою очередь ткань, не получающая нервные импульсы в течение длительного времени, также подвергается дегенерации 2, поэтому скорость восстановления нервного волокна шрает решающую роль в сохранении функциональной ткани. Поскольку существующие мстодел медикаментозной терапии и классической нейрохирургии не приносят желаемых результатов, а использование донорских нервных трансплантатов раничено в связи с иммунологическими реакциями на чужеродные ткани, поиск подходов для стимуляции роста нервных волокон и восстановления клеток ценчральной нервной системы является актуальной темой в медицинской биологии. Эффективным подходом для лечения неврологических заболеваний может оказачься трансплантация клеток, которые способны не только встроиться в поврежденную ткань, по и долговременно стимулировать репарацию этой ткани путем секреции нейротрофичсских и других факторов роста. В начале х В частности, для репарации поврежденного спинного мозга была использована трансплантация эмбриональных стволовых клеток, мезенхимальных клеток костного мозга, нейральных стволовых клеток 36. Однако применение аллогенных клеток для трансплантации может приводить к переносу инфекций от донора реципиенту, а также вызывать реакцию отторжения со стороны иммунной системы реципиента. Поэтому возможно, более эффективной станет трансплантация аутологичных клеток. Терапия собственными аутологичными клетками уже находит применение для лечения ишемических заболеваний 7, невропатий 8, для замещения костных и хрящевых дефектов, а также для восстановления кожного покрова после ожогов. Исследования последних лет показали огромный потенциал клеточной чрансилангологии для восстановления иннервации после повреждения периферических нервов 9. Немаловажное значение иннервация имеет для ишемизированных тканей, гак как известно, что рост сосудов зависит от роста нервов . С точки зрения регенерации поврежденных нервных окончаний наиболее изученными в клеточной терапии являются эмбриональные стволовые клетки , гсмоиоэтические стволовые клетки , нейральные предшественники , мезенхимальные клетки костного мозга и культивированные предшественники эндотелиальных клеток .