Кислородзависимая и нитроксидзависимая ферментные системы макрофагов при стафилококковой и листериозной инфекциях

• Автор: Гончарук, Юлия Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 153 с. : 14 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. Обзор литературы

1.1.Современные представления о функциональной активности бактери цидных систем мононуклеарных фагоцитов
1.2.Состояние внутриклеточных микробицидных систем мононуклеарных фагоцитов при бактериальных инфекциях

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. Материалы и методы

2.1. Инфекционные агенты и экспериментальные животные

2.2. Методы выделения фагоцитирующих клеток и их культивирование

2.3. Методы оценки функциональной активности фагоцитов

2.4 Методы оценки ферментативной активности мононуклеарных фагоци

2.5. Электронномикроскопические исследования
2.6 Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. Морфофункциональная характеристика мононуклеарных фаго
цитов при листериозной инфекции
3.1. Взаимодействие макрофагов первичной культуры с ii
3.1.1. Функциональная активность макрофагов первичной культуры при их контакте с .
3.1.2. Активность кислородзависимой ферментной системы макрофагов первичной культуры при их контакте с .
3.1.3. Активность нитроксидзависимой ферментной системы макрофагов первичной культуры при их контакте с .
3.1.4. Активность кислой фосфатазы в макрофагах первичной культуры при их контакте с .
3.2. Активность ферментных систем фагоцитов животных, зараженных .

3.2.1. Активность эктоферменгов плазмалеммы фагоцитов животных, зараженных .
3.2.2. Активность кислородзависимой ферментной системы фагоцитов животных, зараженных
3.2.3. Активность нитроксидзависимой ферментной системы фагоцитов животных, зараженных,,
ГЛАВА 4. Состояние микробицидных систем моноцитовмакрофагов при стафилококковой инфекции
4.1. Взаимодействие макрофагов первичной культуры с
4.1.1. Функциональная активность макрофагов первичной культуры при их контакте с .
4.1.2. Активность кислородзависимой ферментной системы макрофагов первичной культуры при контакте с .
4.1.3. Активность нитроксидзависимой ферментной системы макрофагов первичной культуры при контакте с .
4.1.4. Активность кислой фосфатазы в макрофагах при их контакте с .
4.2. Функциональная активность фагоцитов животных, зараженных .
4.2.1. Активность эктофермеитов плазмалеммы фагоцитирующих клеток животных, зараженных .
4.2.2. Активность кислородзависимой ферментной системы фагоцитов животных, зараженных .
4.2.3. Активность нитроксидзависимой ферментной системы фагоцитов животных, зараженных .
ГЛАВА 5. Сравнительная характеристика ферментых систем фагоцитов при стафилококковой и листериозюй инфекция
5.1. Сравнительная характеристика ферментных систем макрофагов пер
вичной культуры, взаимодействующих с . и .
5.1.1. Функциональная активность макрофагов первичной культуры при их контакте со . и .
5.1.2. Сравнительная характеристика активности эктоферментов плазмалеммы резидентных макрофагов при их контакте со . и .
5.1.3. Сравнительная характеристика активности кислородзависимой ферментной системы макрофагов первичной культуры при их контакте с
. и .
5.1.4 Сравнительная характеристика активности нитроксидзависимой ферментной системы макрофагов первичной культуры при контакте с . и .
5.2. Сравнительная характеристика активности ферментных систем фагоцитов животных, зараженных . и .
5.2.1. Сравнительная характеристика активности эктоферментов плазмалеммы фагоцитирующих клеток животных, зараженных . и .
5.2.2.Сравнительная характеристика активности кислородзависимой ферментной системы фагоцитов животных, зараженных . и .
5.2.3. Сравнительная характеристика активности нитроксидзависимой ферментной системы фагоцитов животных, зараженных . и .
5.3 Характеристика ультраструкгурных изменений макрофагов, зараженных . и .
5.4 Взаимосвязь кислородзависимой и нитроксидзависимой ферментных систем резидентных макрофагов, зараженных . и . ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРА ТУРЫ
АМК АТФаза ГМФЩ ИБ КОЕ КФ ЛДГ Мф
НАД ЫАО
НАДН ЫАОН
НАДФ ЫАОР никотинамидадениндинуклеотидфосфат НАДФНИАОРН никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстанов
ленный
нет нитросиний тетразолий
ПГЕ простагландинЕ
сдг сукцинатдегидрогеназа
сод супероксиддисмутаза
ФП фагоцитарный показатель
ФЧ фагоцитарное число
цАМФ циклический аденозинмонофосфат
еЫОБ эндотелиальная нитроксидсинтаза
БАБ флавиновый динуклеотид
ЕМПМ флавиновый мононуклеотид
НЬ гемоглобин
НО гидроксильный радикал
Н пероксидный радикал
Н пероксидный ион
Н2 перекись водорода
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
активные метаболиты кислорода
аденозинтрифосфатаза
гексозомонофосфатный шунт
индекс бактерицидносте
колонисобразующая единица
кислая фосфатаза
лактатдегидрогеназа
макрофаг
никотинамидадениндинуклеотид
никотинамидадениндинуклеотид восстановленный
I1 интерлейкин
I6 интерлейкин
I интерлейкин
I интерферон гамма
i индуцибельная нитроксидсинтаза
доза, летальная для подопытных животных
миоглобин
естественный киллер
нейрональная нитроксидсинтаза
оксид азота
0 нитроксильный анион
нитросониевый катион
2 нитрит
ЫОз нитрат
молекулярный кислород
супероксидный анионрадикал
синглетный кислород
перокси нитрит
I реактивные промежуточные продукты окисления
кислорода
I реактивные промежуточные продукты окисления
оксида азота
фактор некроза опухолиальфа
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Наличие мощных бактерицидных механизмов, которыми обладают макрофаги, определяет их основную функцию для борьбы с теми бактериями, вирусами и простейшими, которые могут существовать внутри клеткихозяина , . Помимо этого, макрофаги играют центральную роль в иммунном ответе они обеспечивают элиминацию внеклеточно расположенных бактерий, презентацию бактериальных антигенов лимфоцитам, секретируют провоспалительные и противовоспалительные цитокины, участвующие в запуске специфического иммунного ответа . В очаге острого воспаления в первые часы моноцитымакрофаги составляют менее 5 инфильтрирующих клеток, значительно уступая по численности гранулоцитам. Однако через ч от начала воспаления макрофаги становятся доминирующими клетками инфильтрата, приходя на смену быстро погибающим нейтрофилам . Современные представления о роли системы мононуклеарных фагоцитов основываются на ее фенотипической и функциональной гетерогенности . К данной системе относят следующие клетки монобласты, промоноциты, моноциты, альвеолярные макрофагов, звездчатые ретикулоэндотелиоциты печени клетки Купфера, микроглия, свободные и фиксированные макрофаги лимфоидных органов, гистиоциты соединительной ткани, плевральные и перитонеальные макрофаги, остеокласты, гистиоциты и белые отростчатые эпидермоциты кожи. Из характерных морфологических особенностей макрофагов следует отметить выраженную складчатость клеточной плазматической мембраны с большим количеством пальцевидных и клапановидных псевдоподий, что увеличивает общую площадь поверхности при их активной подвижности. Макрофаги имеют развитый аппарат Гольджи и выраженный шероховатый эндоплазматический ретикулум. В цитоплазме выявляется большое количество вакуолей и лизосомальных гранул, среди которых различают первичные и вторичные лизосомы. Ыацетил3глюкоза мин и дазу, 3глицерофосфатазу, аманнозидазу, кислую фосфатазу, анафтилэстеразу, кислую эстеразу, кислую РНКазу, арилсульфатазу, липазу, 3галактозидазу, нафтиламидазу, катепсин В, О, в, эластазу антибактериальные ферменты лизоцим, нейтральные протеазы, Всвязывающий белок. Фаголизосомы возникают в результате слияния лизосом с пино и фагоцитарными вакуолями. В их состав входят содержимое лизосом, пиноцитированый или фагоцитированый материал и продукты его деградации . Учитывая качественный состав содержимого лизосомальных гранул, можно отметить, что набор их ферментов достаточен для деградации большинства липидов, полисахаридов и белков бактерий, часто подвергающихся значительной деструкции . Ферменты секреторных гранул могут действовать на патогены, находящиеся как внутри клетки, так и вне ее. Для фагоцитов характерны два хорошо различаемых функциональных состояния исходное, с низким уровнем протекания метаболических процессов, и активированное, переход в которое обусловлен взаимодействием клеток с различными стимуляторами . Известно, что активация и процесс фагоцитоза сопровождаются выраженными изменениями клеточного метаболизма возрастают потребление кислорода и продукции молочной кислоты, усиливается метаболизм глюкозы, активируется гексозомонофосфатный шунт ГМФШ, усиливается синтез липидов мембраны, снижается активность 5нуклеотидазы I, , 5, 6. Отмечено, что при активации макрофагов пылевыми частицами кварца потребление кислорода увеличивается в 4 раза, частицами диоксида титана в 1,5 раза 5. Данная реакция фагоцитов получила название дыхательного или метаболического взрыва, в результате которого происходит быстрое образование больших количеств активных метаболитов кислорода АМК или I , , относящихся к кислородзависимым механизмам фагоцита. Фагоцитирование чужеродной частицы состоит из следующих последовательных этапов хемотаксис, адгезия, активация и инвагинация мембраны фагоцита, образование фагосомы, слияние фагосомы с лизосомами, уничтожение и переваривание объекта фагоцитоза и выброс продуктов деградации . По современным представлениям, микробицидное и цитотоксическое действие профессиональных фагоцитов, в частности моноцитовмакрофагов, осуществляется двумя бактерицидными механизмами кислородзависимым и кислороднезависимым , 1, .