Влияние молекулярно-наносомальных гибридных композиций с биологически активными субстанциями на фагоцитирующие клетки in vitro

• Автор: Зайковская, Мария Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 134 с. : 17 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.1. Проблема разработки новых средств адресной доставки биологически активных веществ и лекарственных препаратов в органы и клеткимишени.
1.1.2. Перспективы применения лекарственных препаратов адресной доставки для лечения заболеваний с внутриклеточной псрсистенцией возбудителя.

1.2.1. Современные средства адресной доставки биологически

активных веществ и лекарственных препаратов.

1.2.2. Применение нанотехнологий для разработки лекарственных

средств направленного адресного действия

1.3. Полимерные системы как матричный субстрат для иммобилизации биологически активных веществ, предназначенных
для направленной доставки в клетки и клеточные
системы.
1.3.1. Свойства полимерных систем, используемых в конструировании композиций для направленного транспорта биологически активных веществ.
1.3.2. Биологические эффекты полимерных систем
1.3.3. Искусственные и природные полимерные системы в
конструировании композиций для направленного транспорта биологически активных веществ.
1.3.3.1. Бактериальные полисахариды как перспективные матрицы для иммобилизации лекарственных веществ.
1.3.3.2. Активационные свойства бактериальных полисахаридов.
1.3.3.3. Декстраиы как перспективные полисахаридные матрицы для иммобилизации лекарственных веществ.
1.3.4. Новые формы лекарственных препаратов, полученных с применением технологий иммобилизации на полимерах
1.4. Проблемы и перспективы разработки носителей лекарственных
препаратов и биологически активных веществ направленного транспорта в клетки системы мононуклеарных фагоцитов. Особенности системы мононуклеарных фагоцитов как акцептора лекарственных средств адресного действия.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Методы получения и культивирования перитонеальных клеток
2.2. Методики получения окисленных декстраиов и молекулярнонаносомальных гибридных композиций.
2.3. Методы исследования структурноразмерных параметров нанолипосом
2.4. Методы изучения биологических свойств молекулярноианосомальных гибридных композиций и их компонентов
2.4.1 Молекулярнонаносомальные гибридные композиции и их компоненты.
2.4.2 Методы оценки степени биосовместимости молекулярнонано
сомальных гибридных композиций и их компонентов
2.4.3 Методы оценки параметров, характеризующих биотропность
молекулярнонаносомальных гибридных композиций.
2.4.3.1. Методы оценки адгезивной способности молекулярнонаиосомальных гибридных композиций в отношении мембран макрофагов.
2.4.3.2. Методы оценки фагоцитозной активности макрофагов в отношении молекулярнонаносомальных гибридных композиций
2.4.4. Методы оценки биоактивных свойств молекулярнонаиосомальных гибридных композиций.
2.4.4.1. Метод оценки влияния молекулярнонаносомальных гибридных композиций на процесс фагосомнолизосомного слияния в макрофагах.
2А.4.2. Иммуноцитохимические методы выявления внутриклеточной продукции фактора вМСБР, антиапоптотического белка Вс и экспрессии кластера дифференцировки СЭ на мембранах
макрофагов
2.5. Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Результаты исследований структурноразмерных параметров нанолипосом
3.2. Результаты исследований биологических свойств молскулярнонаносомальных гибридных композиций и их компонентов.
3.2.1.Оценка свойств биосовместимости молекулярнонаносомальных гибридных композиций и их компонентов.
3.2.1.1. Изучение свойств биосовместимости компонентов молекулярнонаносомал ьных гибридных композиций.
3.2.1.2. Изучение свойств биосовместимости молекулярнонаносомальных гибридных композиций, содержащих окисленные декстраны декстранали с молекулярной массой и кДа, находящихся в различных наноразмерных диапазонах
3.2.1.3. Изучение свойств биосовместимости молекулярнонаносомальных гибридных композиций, содержащих конъюгаты окисленных декстранов с молекулярной массой и к Да с гидразидом изоникотиновой кислоты декстразиды, в нанолипосомах различного размера
3.3.2. Результаты оценки свойств биотропности молекулярнонано
сомальных гибридных композиций и их компонентов.
З.З.2.1. Оценка адгезивной способности нанолипосом, входящих в состав молекулярнонаносомальных гибридных композиций, содержащих окисленные декстраны с М.м. и кДа, конъюгированные с гидразидом изоникоти новой кислоты декстразиды, в отношении мембран макрофагов
3.3.2.2. Оценка фагоцитозной активности макрофагов в отношении нанолипосом молекулярнонаносомальных гибридных композиций, содержащих окисленные декстраны, конъюгированные с гидразидом
изоникотиновой кислоты.
3.3.3. Оценка свойств биоактивности молекулярнонаносомальных гибридных композиций, содержащих озсисленные декстраны с различной молекулярной массой, конъюгированные с гидразидом изоникотиновой кислоты
3.3.3.1. Оценка влияния молекулярнонаносомальных гибридных композиций, содержащих окисленные декстраны, конъюгированные с гидразидом изоникотиновой кислоты, на процесс фагосомнолизосомного слияния в макрофагах, в зависимости от молекулярной
массы окисленных декстранов
3.3.3.2. Оценка свойств биоактивности молекулярнонаносомальных
гибридных композиций, содержащих окисленные декстраны, конъюгированные с гидразидом изоникотиновой кислоты, с
молекулярной массой декстрановых матриц и кДа
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЕ
СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
БАВ биологически активное вещество
ГИНК гидразид изоникотиновой кислоты
декстраналь химически окисленный декстран
дексгразид химически окисленный декстран, конъюгированный
с гидразидом изоникотиновой кислоты
ИЦХ иммуноцитохимия
ЛВ лекарственное вещество
I лизосомотропное вещество
М.м. молекулярная масса
МНГК молекулярнонаносомальная гибридная композиция МФ макрофаги ,
I нанолипосомы
СМФ система мононуклеарных фагоцитов
X декстразнд химически окисленный декстран, конъюгированный с гидразидом изоникотиновой кислоты
гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор
I интерлейкин I интерферонгамма
макрофагальный колониестимулирующий фактор полиинозинполицитидиловая кислота
фактор некроза опухоли альфа
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Впервые показано, что свойства биосовместимости, биотропности и биостимуляции в отношении макрофагов определяются не только суммой соответствующих свойств компонентов, входящих в состав молекулярнонаносомальных гибридных композиций, а представляют собой новое качество, формирующееся при конструировании нанолипосомальиых композиций, зависящее от их физикохимических характеристик, задаваемых размерами нанолипосом и молекулярной массой окисленных декстранов, входящих в их состав. Обоснована вероятная эффективность применения изучаемых молекулярнонаносомальных гибридных композиций в качестве средств направленной доставки биологически активных веществ. Научнопрактическая значимость работы. Исследование выполнено в рамках гранта Федеральной целевой научнотехнической программы Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научнотехнологического комплекса России на годы в соответствии с государственным контрактом . Разработать технологию конструирования молекул ярнонаносомальных гибридных биосовместимых композиций для адресной доставки биологически активных веществ в клетки и клеточные системы. Результаты исследования могут быть использованы при разработке средств направленной доставки биологически активных веществ или лекарственных средств с заданными биологически активными свойствами в клетки и органымишени, в частности, для лечения ряда заболеваний, в основе которых лежит гранулематозное воспаление. Основные положения, выносимые на защиту. Окисленные декстраны с молекулярной массой кДа и кДа декстраналь и декстраналь обладают высокой биосовместимостыо в отношении перитонеальных клеток. Конъюгаты окисленных декстранов с гидразидом изоникотиновой кислоты декстразид и дскстрзид обладают более низкой биосовместимостью по сравнению с декстраналем и декстраналем. Молекулярнонаносомальныс гибридные композиции, включающие окисленные декстраны или их конъюгаты с гидразидом изоникотиновой кислоты, обладают высокой биотропностью в отношении клеток системы мононуклеарных фагоцитов. Биотропность молекулярнонаносомальных гибридных композиций возрастает при уменьшении размеров нанолипосом. Молекулярнонаносомальные гибридные композиции с размерами нанолипосом нм, включающие окисленные декстраны или их конъюгаты с гидразидом изоникотиновой кислоты, обладают биостимулирующими свойствами в отношении клеток системы мононуклеарных фагоцитов стимулируют процесс фагосомнолизосомного слияния, продукцию гранулоцитарномакрофагального колониестимулирующего фактора СМСББ и внутриклеточного антиапоптотического белка Вс, повышают экспрессию кластера дифференцировки С5 на мембранах макрофагов. Молекулярнонаносомальные гибридные композиции с размерами нанолипосом нм, содержащие окисленные декстраны с молекулярной массой кДа, обладают более высоким биостимулирующим действием по сравнению с композициями, содержащими окисленные декстраны с молекулярной массой кДа. ГЛАВА 1. Проблема разработки новых средств адресной доставки биологически активных веществ и лекарственных препаратов в органы и клеткимишени. Одним из перспективных направлений создания новых лекарственных форм является синтез композиций адресного действия, оказывающих эффективное терапевтическое воздействие, имеющих заданные фармакокинетические свойства и не обладающих или имеющих минимальные побочные эффекты Шкурупий В. А. и др. Шкурупий В. А., М. Востребованность в препаратах адресного действия объясняется новым этапом развития современных технологических подходов коррекции функционального состояния живых систем. Все более широкое распространение получают методы модифицирования строения, функций живых систем для получения определенно новых по свойствам биологических объектов. Эти методы успешно применяются в области генной инженерии, разработки вакцин, фармакологии, косметологии и медицине. При разработке средств направленной доставки возникает ряд вопросов об их структуре Машковский М. Д., , i . Биологически активное вещество должно быть заключено в контейнер для направленной доставки Матвиенко П. В., . Такой контейнер должен удовлетворять ряду параметров. Необходимым условием является обеспечение защиты содержащегося в его внутреннем объеме биологически активного вещества во время транспорта. Такие параметры, как жесткость, устойчивость к внешним влияниям и стабильность являются основными для обеспечения этой функции.