Посттрансляционные модификации тубулина в системе микротрубочек клеток млекопитающих в ходе стандартного митоза и при патологии деления

• Автор: Балашова, Елена Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Аномалии митотического деления клеток высших животных

i viv и i vi.

IЛ Классификация патологических митозов.

1.2. Встречаемость и биологический смысл патологических

митозов

2. Организация митотического аппарата в ходе стандартного

митоза и при патологии деления.

2.1. Биполярный митоз.
2.1.1. Структурная организация митотического аппарата
соматических клеток млекопитающих
2.1.2. Белки, ассоциированные с микротрубочками.
2.1.3. Динамика структурных преобразований митотического
аппарата.
2.2. Патологические митозы
2.2.1. Кметафазы.
2.2.2. Многополюсные митозы.
2.3. Последствия нарушений митоза.
3. Центросома в нормальном митозе и при патологии деления
3.1. Структура и состав центросомы
3.2. Роль центросомы в клеточном цикле и митозе.
3.3. Редупликация центросомы
3.4. Организация центросомы при патологии деления.
4. Посттрансляционные модификации тубулина в составе
микротрубочек митотического аппарата.
4.1. Посттрансляционные модификации атубулина
4.2. Посттрансляционные модификации МТ веретена и
центриолей в ходе стандартного митоза
5. Участие системы МТ в регуляции различных клеточных
программ
5.1. Роль центросомы в формировании злокачественных
опухолей.
5.2. Особенности организации системы МТ при индукции
апоптоза.
Заключение.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Культуры клеток.
2. Постановка экспериментов
2.1. Культуры клеток ЗТЗ и 8УЗТЗ
2.2. Культура клеток СНОК1
3. Индукция апоптоза и выявление апоптотических клеток
4. Определение митотического индекса.
5. Иммунофлуоресцентное окрашивание
6. Электронная микроскопия.
6.1. Стандартная электронная микроскопия.
6.2. Иммуннопероксидазное окрашивание для электронной
микроскопии
7. Мечение митотических хромосом с помощью ВгсЮ
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Распределение посттрансляционномодифицированного а
тубулина в диплоидных клетках ЗТЗ АЗ 1 и гстероплоидных клетках 8УЗТЗ.
1.1. Характер распределения ацет и тиртубулина в ЗТЗ и 8У
ЗТЗ клетках световая микроскопия.
1.2. Электронномикроскопическое распределение ацет и тир
тубулина в цитоплазматических МТ.
1.3. Электронномикроскопическое распределение ацет и тир
тубулина в МТ центриолярного цилиндра
2. Распределение посттрансляционномодифицированного а
тубулина в митотических клетках СНОК1 в период, предшествующий апоптозу
2.1. Пролиферативная активность и накопление апоптотичсских
клеток в культуре, обработанной этопозидом.
2.2. Иммунофлуоресцентное окрашивание митотического веретена
2.3. Иммунофлуоресцентное окрашивание утубулина в
митотических клетках.
2.4. Ультраструктура митотических клеток
2.5. Электронномикроскопическое распределение ацет и тир
тубулина в МТ веретена.
2.6. Электронномикроскопическое распределение ацет и тир
тубулина в МТ центриолярного цилиндра и перицентриолярной области
2.7. Мечение митотических хромосом с помощью Вгби.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В последнее время появляется все больше данных о том, что уровень посттрансляционных модификаций тубулина основного белка в составе микротрубочек определяет взаимодействие цитоплазматических микротрубочек с различными ассоциированными с ними белками , . Известно, что микротрубочки центриолярного цилиндра подвергаются, по крайней мере, трем типам посттрансляционных модификаций детирозинированию . i . i . Тот факт, что опухолевая прогрессия сопровождается инактивацией одного из ферментов, обеспечивающих посттрансляционную модификацию тубулина, а именно тирлигазы . Однако в настоящее время нет данных о том, различается ли содержание детирозинированного и ацетилированного тубулина в микротрубочках центриоли в ходе стандартного митоза нормальных и трансформированных клеток. Сведения о закономерностях распределения посттрансляционных модификаций тубулина как в центриолярных, так и в цитоплазматических микротрубочках в ходе многополюсного деления, также отсутствуют. Сегодня принято считать, что многополюсные митозы, возникающие при запуске апоптоза или при делении опухолевых клеток, являются результатом сходных нарушений в организации центросомы и системы митотических микротрубочек. Однако завершение митотического деления может существенно различаться в двух этих случаях. . . . В опухолевых клетках, напротив, подавляющее большинство многополюсных митозов завершается цитокинезом образуется одно или несколько остаточных телец, и в результате деления в большом количестве появляются анеуплоидные одноядерные и многоядерные клетки Алов, Казанцева, . Таким образом, имеющиеся данные позволяют предполагать, что механизм функционирования системы микротрубочек различается в многополюсных митозах, возникающих при индукции апоптоза и в ходе клеточной трансформации. Однако до настоящего времени сравнительные исследования системы микротрубочек и центросомы в многополюсных митозах, различающихся по механизму завершения деления, не проводились. Целью настоящей работы явилось изучение закономерностей распределения посттрансляционномодифицированного тубулина в составе центриолярных и цитоплазматических микротрубочек в ходе стандартного и многополюсного митоза в нормальных и трансформированных клетках, а также в клетках при индукции апоптоза. Исследовать особенности распределения ацетилированного и тирозинированного атубулииа в цитоплазматических и центриолярных микротрубочках в интерфазе и в ходе двухполюсного и многополюсного митоза диплоидных клеток ЗТЗ и туморогенных гетероплоидных клеток V33 методом иммунохимического окрашивания. Изучить динамику митотического цикла и организацию многополюсного митотического аппарата при индукции апоптоза этопозидом в культуре клеток СНОК1 методами иммунофлуоресцентной и электронной микроскопии. СНОК1 до и после обработки этопозидом методом иммунохимического окрашивания. ГЛАВА I. Патологические митозы возникают при нарушении структуры и целостности хроматинового и ахроматинового компонентов митотической фигуры, а также при нарушении одной из стадий собственно митоза, например цитотомии. Несмотря на то, что в настоящее время существуют несколько классификаций патологических митозов, наибольшим признанием пользуется классификация, предложенная Аловым И. I. Патология митоза, связанная с повреждением хромосом задержка митоза в профазе, нарушение спирализация и деспирализация хромосом, раннее разделение сестринских хроматид, фрагментация хромосом, образование мостов между хромосомами в анафазе, повреждение кинстохора. II. Патология митоза, связанная с повреждением митотического аппарата задержка на стадии метафазы, рассредоточение хромосом в метафазе, групповая метафаза, многополюсные митозы, асимметричные митозы, моноцентрические митозы, Кмитозы. III. Патология митоза, связанная с нарушением цитотомии преждевременная цитотомия, задержка цитотомии, отсутствие цитотомии. В данной работе основное внимание уделялось формам патологии деления, в которых нарушено строение митотического аппарата. Из этой обширной группы патологических митозов наиболее частыми и важными являются Кмитозы и многополюсные митозы.