Динамика и механизмы формирования цитоплазматических дериватов ядрышка в митозе

• Автор: Жарская, Оксана Олеговна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : ил.

На основании полученных данных, авторами предложена гипотеза постмитотической сборки ядрышка в клетках эукариот, согласно которой материал ЦЯД и проядрышск используется для построения формирующегося ядрышка, а порядок миграции индивидуальных белков в ядрышки отражает этап биогенеза рибосом, в котором этот белок участвует. Однако имеющийся на сегодняшний день экспериментальный материал не дает возможности однозначно раскрыть проблему формирования ядрышка в конце митоза. В частности, остаются неизвестными механизмы регуляции сборки производных ядрышка в митозе, а также функции, выполняемые этими митотическими образованиями. До конца не выяснена роль различных составляющих производных ядрышка в поддержании их структурной и функциональной целостности. Практически ничего не известно о механизмах, обеспечивающих транспорт материала ядрышковых дериватов в дочерние ядра и ядрышки. Одним из подходов к изучению механизмов формирования производных ядрышка в митозе является разработка условий для индукции их сборки на тех стадиях митоза, когда в нормальном митозе они отсутствуют. Ранее показано, что эффективным индуктором образования проядрышек в ядрах интерфазных клеток различных культур млекопитающих является обратимое воздействие растворов низкой ионной силы на живые клетки i . ЦЯД, до начала выполнения настоящей работы оставался открытым. Известно, что важную роль в реорганизации ядрышка в митозе играет уровень фосфорилирования его белков, таких как транскрипционные факторы рДНК i, , ii . Внуклеофозмин и Снуклеолин, участвующие в созревании транскриптов прерРНК . Киназой, осуществляющей дополнительное фосфорилирование этих белков в митозе у высших эукариот, является основная митотическая киназа , которая проявляет активность в комплексе с циклинами А и В Епифанова, . По мерс завершения митоза происходит деградация циклинов А и В под действием убиквитинзависимых протсолитичсских ферментов сложного белкового комплекса АРСС i x iii i, стимулирующего анафазу. Каскад этих реакций приводит к инактивации комплексов циклин. В то же время в анафазе происходит образование ЦЯД. Можно предположить, что два этих процесса взаимосвязаны и инактивация является индуктором сборки ЦЯД. Известно, что в метафазе белки Внуклеофозмин, Снуклеолин и фибрилларин образуют растворимые макромолекулярные комплексы, в стабилизации которых, повидимому, принимает участие рРНК ii, . Есть основания полагать, что в метафазе эти комплексы находятся в растворимом состоянии, поскольку экстракция метафазных клеток буфером, содержащим детергент, препятствует иммуномечению цитоплазмы на В и другие белки. Напротив, телофазные ЦЯД оказываются устойчивыми к экстракции i и др. Однако практически не решенным остается вопрос о том, какую роль играет митотическое фосфорилированиедефосфорилирование и, следовательно, изменение свойств ядрышковых белков в сборке цитоплазматических производных ядрышка. Основная цель работы исследование динамики, состава и возможных механизмов формирования цитоплазматических производных ядрышка в разных типах культур клеток млекопитающих, а также в клетках корневой меристемы лука i сера . Провести сравнительный анализ закономерностей формирования и состава индивидуальных ЦЯД рРНК, белки зрелого ядрышка фибрилларин, Снуклеолин, Внуклсофозмин, , на завершающих стадиях нормального митоза. Исследовать влияние ингибирования синтеза и процессинга рРНК на сборку ЦЯД в митотических клетках млекопитающих. Исследовать возможность индукции преждевременной сборки цитоплазматических дериватов ядрышка в митозе в клетках млекопитающих в условиях обратимого воздействия растворов низкой ионной силы гипотонического шока, который индуцирует появление проядрышск в ядрах интерфазных клеток i . Изучить возможность индукции преждевременной сборки ЦЯД в митозе в клетках млекопитающих и растений под действием специфического росковитин и менее специфического стауроспорин ингибиторов активности митотической циклин Взависимой киназы . Изучить влияние ингибиторов митотической на электрофоретическую подвижность основных белков ядрышка фибрилларина, Снуклсолина, Внуклеофозмина.