Изучение механизмов внутриклеточного распределения митохондрий

• Автор: Некрасова, Оксана Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : ил.

1.1 Распределение митохондрий связано с их функциями в клетках

1.2 Роль микротрубочек и актина в распределении митохондрий

1.2.1. Общие черты микротрубочек и актиновых микрофиламентов.

1.2.2. Особенности системы микротрубочек

1.2.3. Особенности актинового цитоскелета.

1.2.4. Транспорт митохондрий вдоль микротрубочек роль кинезиновых и динеиновых моторов в этом процессе

1.2.5. Актин зависимый транспорт митохондрий с участием моторных белков.

1.2.6. Актин зависимое движение митохондрий без участия моторных белков в дрожжах.

1.2.7. Прикрепление митохондрий к микротрубочкам и актиновым микрофиламентам.

1.2.7.1. Роль микротрубочек ассоциированных с ними белков

1.2.7.2. Прикрепление митохондрий к фибриллярному

1.3. Роль промежуточных филаментов в распределении митохондрий в клетках
1.3.1. Особенности промежуточных филаментов.
1.3.2. Сборка виментиновых промежуточных филаментов в клетках.
1.3.3. Взаимодействие промежуточных филаментов с митохондриями
1.3.4. Плектин белок ассоциированный с промежуточными филаментами
1.4. Фибронектин регулятор внутриклеточных процессов.
1.5. Роль протеинкиназы С в регуляции перестроек
цитоскелета
1.6. Регуляция распределения митохондрий ростовыми факторами.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Культивирование клеток
2.2. Иммунофлюоресценция.
2.2.1. Фиксация клеток.
2.2.2. Иммунофлюоресцентное окрашивание
2.2.3. Антитела
2.2.4. Окрашивание актина
2.2.5. Окрашивание митохондрий.
2.2.6. ДНК конструкции.
2.2.7. Трансфекция клеток
2.2.8. Получение покровных стекол, покрытых фибронектином или его фрагментами
2.2.8.1. Получение фибронектина и его фрагментов
2.2.8.2. Пришивка фибронектина и его фрагментов к покровным стеклам.
2.2.9. Посадка клеток на стекла, покрытые фибронектином или его фрагментами
2.3. Электрофорез и иммуноблотинг.
2.4. Видеомикроскопия.
2.5. Обработка данных.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Роль фибронектина, в регуляции формы и внутриклеточного распределения митохондрий в клетке.
3.1.1. Прикрепление клеток к фибронектину.
3.1.2. Влияние фибронектина на формирование стрессфибрилл в клетках.
3.1.3. Влияние фибронектина на форму митохондрий
3.1.4. Процесс удлинения и распределения митохондрий на периферии клетки зависит от взаимодействия их с микротрубочками.
3.1.5. Локализация митохондрий на периферии клетки
3.2. Роль промежуточных филаментов в распределении митохондрий
3.2.1. Отсутствие промежуточных филаментов приводит к увеличению подвижности митохондрий в клетке
3.2.2. Роль промежуточных филаментов во взаимодействии митохондрий с актиновым цитоскелетом
3.3. Протеинкиназа С регулирует подвижность митохондрий
3.3.1. Подвижность митохондрий зависит от активности протеинкиназы С.
3.3.2. Протеинкиназа С регулирует связь митохондрий с промежуточными филаментами
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ.
3аминопропилтриэтоксиксилан
I бисиндолилмалеимид
3,Здиаминобензидин
диацилглицерол
сухая среда для клеток ii i желтый флуоресцентный белок i киназа фокальных контактов
актин фибриллярный актин
1 флуоресцеинизотиоцианат
актин глобулярный актин
зеленый флуоресцентный белок i
Нер2 домен гепарин связывающий участок в молекуле фибронектина I интегрин связывающая киназа
МАР белки, ассоциированные с микротрубочками
i белок форминового семейства, гомолог продукта гена диафанус у
млекопитающих
фактор роста нейронов
фосфатный буфер
I 3 киназа фосфоинозитид 3 киназа
фенилметилсульфонилфторид
РКА протеинкиназа А
РКС протеинкиназа С
трипептид в белках внеклеточного матрикса
ТРА Отетрадеканоилфорбол ацетат
I тетраметилродаминизотиоцианат
АТФ аденозин5трифосфат
БСА бычий сывороточный альбумин
ВКМ внеклеточный матрикс
ГТФ гуанозин 5трифосфат
ЛФК лизофосфатидная кислота
ПФ промежуточные филаменты
ПЭГ полиэтиленгликоль
цАМФ циклические аденозинмонофосфаты
ЭГТА этиленгликоль бис Раминоэтилтетрауксуная кислота ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота
ЭР эндоплазматический ретикулум.
ВВЕДЕНИЕ


СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ. ВВЕДЕНИЕ. Глава 1. Общие черты микротрубочек и актиновых микрофиламентов. Особенности актинового цитоскелета. Актин зависимый транспорт митохондрий с участием моторных белков. Актин зависимое движение митохондрий без участия моторных белков в дрожжах. Прикрепление митохондрий к микротрубочкам и актиновым микрофиламентам. Прикрепление митохондрий к фибриллярному
1. Особенности промежуточных филаментов. Сборка виментиновых промежуточных филаментов в клетках. Фибронектин регулятор внутриклеточных процессов. Регуляция распределения митохондрий ростовыми факторами. Глава 2. Иммунофлюоресценция. Фиксация клеток. Окрашивание митохондрий. ДНК конструкции. Пришивка фибронектина и его фрагментов к покровным стеклам. Электрофорез и иммуноблотинг. Видеомикроскопия. Обработка данных. Глава 3. Роль фибронектина, в регуляции формы и внутриклеточного распределения митохондрий в клетке. Прикрепление клеток к фибронектину. Влияние фибронектина на формирование стрессфибрилл в клетках. Процесс удлинения и распределения митохондрий на периферии клетки зависит от взаимодействия их с микротрубочками. Подвижность митохондрий зависит от активности протеинкиназы С. Глава 4. СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ. ЭР эндоплазматический ретикулум. ВВЕДЕНИЕ. Митохондрии занимают особое место среди других органелл клетки, благодаря способности синтезировать АТФ, участвовать в регуляции уровня внутриклеточного кальция, и контролировать процесс регулируемой клеточной гибели, апоптоз. Для нормального функционирования митохондрий большое значение имеет их внутриклеточное распределение. Во многих клетках митохондрии локализуются вблизи мест высокого потребления энергии. Локализация митохондрий находится под контролем внешних и внутренних факторов и достигается при помощи транспорта этих органелл вдоль микротрубочек и актиновых филаментов моторными белками. Считается, что транспорт митохондрий и других органелл происходит в две стадии на большие расстояния они переносятся по микротрубочкам, а по актиновым филаментам происходит их перемещение на небольшие расстояния и локализация , v . При этом скорость движения вдоль микротрубочек намного выше, чем вдоль микрофиламентов i , . Недавно в нашей лаборатории было показано, что фибриллярный актин актин1, полимеризующийся в результате действия белков семейства форминов, специфически взаимодействует с митохондриями и ограничивает их транспорт Кулик и др. Однако оставалось не ясным, какие белки или структуры обеспечивают это взаимодействие. Мы обнаружили, что если убрать промежуточные филаменты ПФ к ядру подвижность митохондрий на периферии клеток возрастает. Это может говорить о роли ПФ, как одного из элементов, удерживающих митохондрии в определенных местах. ПФ это третий компонент цитоскелета клетки. См.