Исследование динамики формирования и механизмов регуляции сборки-разборки ядерных и цитоплазматических пор в синцитиальных эмбрионах Drosophila melanogaster

• Автор: Губанова, Наталья Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 144 с. : ил.

1.1. Ядерная оболочка

1.1 Л. Строение и белковый состав ядерной оболочки и ламины

1.1.2. Особенности организации ядерной оболочки клеток дрозофилы

1.2. Ядерные поровые комплексы.

1.2.1. Ультраструктура ядерных поровых комплексов

1.2.2. Биохимический состав ядерных пор

1.2.3. Механизмы транспорта молекул через ядерную пору.

1.3. Цитоплазматические поры пористых пластинок. Особенности распределения, структурная динамика и взаимосвязь с ядерными перовыми комплексами
1.3.1. Особенности распределения пористых пластинок в различных типах клеток и тканей.

1.3.2. Биохимический состав пористых пластинок и цитоплазматических пор.

1.4. Митотическая реорганизация ядерной оболочки и пористых пластинок

1.4.1. Характеристика основных этапов клеточного цикла.
1.4.2. Механизм разборки ядерной оболочки
1.4.3. Механизм сборки ядерной оболочки
1.4.4. Особенности сборкиразборки ядерных пор i vi и i viv
1.4.5. Сборкаразборка цитоплазматических пор в условиях i vi и в митозе i viv
1.5 Ранние эмбрионы дрозофилы как удобная модель для сравнительного исследования ультраструктурной динамики ядерной оболочки и пористых
пластинок i viv
1.5.1. Характеристика раннего эмбрионального развития дрозофилы
1.5.2.0собенности регуляции клеточного цикла в раннем эмбриогенезе дрозофилы.
Заключение
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Характеристика использованных в работе лабораторных линий дрозофил.
2.2. Получение эмбрионов дрозофилы на требуемой стадии развития
2.3. Фиксация и заливка эмбрионов для ультраструктурного анализа.
2.4. Получение, окрашивание и исследование полутонких и ультратонких срезов.
2.5. Определение цикла деления синцитиального эмбриона.
2.6. Морфометрический анализ.
2.7. Вестернблот и определение количества белка.
2.8. Субклеточное фракционирование.
2.9. Исследование фосфорилирования нуклеопорина р0.
2 Микроинъекции и конфокальная микроскопия на живых эмбрионах
дрозофилы.
Глава 3. Результаты
3.1. Сходство и различие ультраструктурной организации ядерных и цитоплазматических пор на стадии интерфазы.
3.2. Сравнительный анализ ядерных и цитоплазматических пор в процессе их сборкиразборки в митозе.
3.3. Особенности строения и распределения пористых пластинок на разных стадиях синцитиального развития дрозофилы
3.3. Морфометрический анализ количественной динамики ядерных и цитоплазматических пор на разных стадиях эмбриогенеза дрозофилы
3.4. Сравнительное исследование относительного количества отдельных нуклеопоринов в эмбрионах дрозофилы на разных стадии эмбриогенеза
3.5. Анализ распределения нуклеопоринов в ядерной, мембранной и цитозольной фракциях, выделенных из эмбрионов дрозофилы
3.6. Исследование фосфорилирования белков ядерных пор на примере нуклеопорина р
3.7 Влияние изменения уровня митотических циклинов на процессы сборкиразборки ядерных и цитоплазматических пор.
3.7.1. Исследование влияния микроинъекции циклогексимида в синцитиальные эмбрионы дрозофилы
3.7.2. Морфометрический анализ количества цитоплазматических пор в эмбрионах мутантов со сниженным уровнем циклинов
3.8. Исследование влияния инактивации в синцитиальных эмбрионах термочувствительных мутантов на процесс сборкиразборки ядерных и цитоплазматических пор .
3.9. Изучение действия окадаевой кислоты на процесс сборки ядерных и цитоплазматических пор.
3 Изучение влияния малой ГТФазы на сборку ядерных и
цитоплазматических пор.
Глава 4. Обсуждение
4.1. Динамика формирования ядерных и цитоплазматических пор в процессе митоза и раннего эмбриогенеза дрозофилы
4.2. Исследование функции пористых пластинок в синцитиальных эмбрионах дрозофилы
4.3. и белковые фосфатазы, чувствительные к окадаевой кислоте, являются ключевыми регуляторами сборкиразборки ядерных и цитоплазматических пор в митозе
4.4. Влияние на сборку ядерных и цитоплазматических пор
4.5. Заключение
Выводы.
Литература


XIX Российской конференции но электронной микроскопии Москва, , III Международной конференции молодых ученых Актуальные вопросы современной биологии и биотехнологии Казахстан, АлмаАты, . Международном симпозиуме по проблемам мейоза СанктПетербург, , Международном симпозиуме Ядерная оболочка в передаче информации и генной регуляции Дарем, Великобритания, , III съезде ВОГИС Москва, и Дальневосточной школеконференции Владивосток, . Автором были зафиксированы образцы эмбрионов дрозофилы и приготовлены препараты для световой и электронной микроскопии, проведен качественный анализ электронномикроскопических образцов, а также выполнен морфометрический анализ количества ЯПК и ЦП. Гель электрофорез, Вестернблот анализ, субфракционирование, количественная оценка содержания нуклеопоринов в различных фракциях, конфокальная микроскопия и микроинъекции были проведены Е. А.Онищенко Содерторнский университетский колледж, Стокгольм, Швеция. Губанова Н. В Онищенко Е. А., Киселева Е. В. Динамика и функция окончатых мембран в ранних эмбрионах i Н Тезисы докладов XIX Российской конференции по электронной микроскопии, Черноголовка, РАН. Губанова Н. В Онищенко Е. А., Киселева Е. В. Динамика окончатых мембран в раннем эмбриогенезе i . Ультраструктуриые исследования и морфометрический анализ. Тезисы докладов Ш Международной научной конференции молодых ученых и студентов Актуальные вопросы современной биологии и биотехнологии, АлмаАты, Казахстан. С. 1 Губанова Н. В Онищенко Е. А., Киселева Е. В. Электронномикроскопический анализ динамики окончатых мембран в раннем эмбриогенезе у i . Ультраструктура пороподобных комплексов в процессе митоза. Тезисы докладов Международного Симпозиума но проблемам мейоза. СанктПетербург, Цитология. Т.9. С. 2. Е.А. V iv . V., . Ii i ii i v. Губанова . Онищенко , Киселева Е. В. Сравнительный анализ структурнофункциональной организации окончатых мембран и ядерной оболочки в раннем эмбриогенезе дрозофилы Тезисы докладов. III съезд ВОГиС. Москва, Россия. II С. ЕА, v V. Т, iv V, i i x i i i . V. 5. V., iv . V., . V. . Морозова , Губанова . Киселева Структурная организация и возможная функциональная роль пористых пластинок, содержащих цитоплазматические поры. Цитология. Т. 8. Губанова Н. В Онищенко Е. А., Киселева Е. В. Малая ГТФазы влияет на сборку ядерных пор, но не участвует в сборке цитоплазматических поровых комплексов. Тезисы докладов. X Международная молодежная Школаконференция, Владивосток, Россия. С. 2. Губанова Н. В Морозова К. Н., Киселева Е. В. Структурная организация и функция ядерных пор. Цитология. Т. . С. . Губанова Н. В Киселева Е. В. Структурная организация и функция ядерной оболочки Цитология. Т. 3 в печати. Глава 1. Ядерную оболочку ЯдО рассматривают как специализированный компартмент эндоплазматического ретикулума ЭПР, который формирует границу ядра у эукариот. Появление ЯдО позволило отделить процессы репликации и транскрипции ДНК от процессов трансляции. ЯдО состоит из пяти доменов наружной и внутренней ядерной мембраны мембран, перинуклеарного пространства, ядерной ламины и ЯПК Губанова и др. Наружная мембрана ЯдО содержит на своей поверхности рибосомы, а также контактирует и продолжается в мембраны эндоплазматического ретикулума ЭПР i . По своему биохимическому составу, наружная ядерная мембрана проявляет высокое сходство с мембранами ЭПР, в частности, по содержанию таких интегральных белков, как р и i , , i, , . Недавние исследования продемонстрировали, что в наружной ядерной мембране содержатся также белки несприны, ответственные за расположение ядра в цитоплазме клетки , , . ЭПР. Просвет между внешней и внутренней мембранами ЯдО перинуклеарное пространство соединено с просветом ЭПР Рис. Са2 диффундировать между этими компартментами. Слияние внешней и внутренней мембран происходит в области мембранного компонента поры, который характеризуется наличием интегральных мембранных белков ЯПК 0 и РОМ 1. В состав внутренней мембраны ЯдО позвоночных входят следующие интегральные белки ламинВ рецепторный белок ламинассоциированные белки, такие как 1 и 2 эмерин белок, выявленный впервые в ядерной оболочке больных мышечной дистрофией . ЯдО Рис.