Пространственно-временная организация репликации субхромосомных доменов ДНК в ядрах клеток человека

• Автор: Чагин, Вадим Олегович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 146 с.

Также не существует стандартного подхода, к выделению на изображении индивидуальных сегментации изображения. Используемые способы, сегментации приводят к ошибкам в подсчете количества наблюдаемых сегментация по порогу иили в определении их размеров сегментация по локальным максимумам интенсивности , Ма , . РС, получение препаратов ядер клеток с фокусами репликации, по возможности содержащими РУД, которые соответствуют отдельным репликонам или по крайней мере, известному небольшому 2 4 их количеству, т. В этом направлении основными задачами являются совершенствование цитохимических методов приготовления препаратов и разработка более точных методов оценки содержания ДНК в отдельных фокусах репликации. Существенным результатом была бы также оценка параметров синхронности и размера отдельных единиц репликации. Цели и задачи работы Целью настоящей работы являлось исследование при высоком разрешении характеристик единиц репликации на уровне препаратов ядер индивидуальных клеток с учетом динамики прохождения ими 8фазы клеточного цикла. Исследование динамики прохождения клетками К2 8фазы клеточного цикла методом проточной ДНКцитометрии, выявление моментов замедления и ускорения прохождения клетками 8фазы. Разработка методов стандартного анализа репликативных структур при использовании широкопольной флуоресцентной микроскопии на пределе оптического разрешения. Исследование характеристик единиц репликации на уровне препаратов ядер индивидуальных клеток на высоком уровне разрешения репликативных структур при различной динамике прохождения клетками клеточного цикла. Измерение характеристик индивидуальных репликонов или комплексов из известного небольшого числа репликонов на препаратах ядер. I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Временная структура фазы клеточного цикла эукариот. Геном большинства млекопитающих содержит порядка 9 пар нуклеотидов п. ДНК. Гаплоидный геном человека содержит хромосомы и имеет размер 4. Ю9 пн , . Репликация осуществляется во время фазы синтеза фаза, длительность которой у большинства теплокровных млекопитающих, за исключением клеток ранних эмбрионов составляет 6 часов iv,. Было обнаружено что хромосомы эукариот реплицируются не как единое целое, а по частям, синтез которых привязан к определенным моментам фазы , , причем синтез идет параллельно во многих участках хромосом Соответственно был сделан вывод, что каждой хромосоме эукариот соответствуют многочисленные единицы репликации. Позднее, было непосредственно показано существование таких единиц репликации в клетках млекопитающих i,. Было также показано, что размер репликонов меньше размера частей хромосом, реплицирующихся в определенные промежутки фазы , . Универсальной особенностью строения митотических хромосом высших организмов является их деление на участки различные по своим цитохимическим свойствам сегменты или диски хромосом. Различают , Гимзаотрицательные и положительные и Сдиски диски часто называют или дисками, т. Сдисках нет генов ii, , i . Световой микроскоп позволяет различить в гаплоидном наборе прометафазных хромосом человека 3. Средний диск, получаемый при окрашивании Гимзой, содержит м. ДНК, а самые мелкие диски содержат м. По включению 3Нтимидина в ядрах фазных клеток обнаружено, что эухроматин реплицируется в начале фазы, позже вступает в репликацию гетерохроматин , v, i, ii, , . Большинство транскрибируемых генов реплицируются1 рано, в то время как большая часть инертной или факультативно инертной ДНК реплицируется поздно Ляпунова, Хаитова, . Временная последовательность репликации сегментов хромосом в определенные моменты фазы в целом сохраняется между клеточными циклами , , , , . Таким образом, уже на уровне сегментов хромосом существуют временные закономерности репликации, выражаемые как удвоение участков хромосом в определенные промежутки фазы и в определенном порядке. Каждый сегмент хромосомы может содержать несколько репликонов. Репликон по определению представляет собой участок ДНК,, который реплицируется как единое целое в результате единичного события инициации. Считают, что подавляющая часть репликонов двунаправленные .