Морфофункциональная характеристика гранулярных клеток предсердия брюхоногого моллюска Achatina fulica

• Автор: Шабельников, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 141 с. : ил.

Оглавление

Список принятых сокращений.

Введение

Обзор литературы.

Кровеносная система брюхоногих моллюсков

Особенности организации кровеносной системы брюхоногих моллюсков

Строение сердца брюхоногих моллюсков

Иннервация и нерогуморальный контроль сердца брюхоногих моллюсков

Гранулярные клетки брюхоногих моллюсков

Гуморальные защитные факторы моллюсков.

Нсйроиммунные взаимодействия у моллюсков.

Молекулярные основы нейроиммунных взаимодействий.
Реакгии гемоцитов на медиаторы
Стрессорные реакции моллюсков
Нейроиммуиные реакции на вторжение патогена
Материалы и методы
Объект исследования
Световая микроскопия.
Антитела.
Иммуногистохимия.
Электронная микроскопия
Иммуноэлекгронная микроскопия
Фармакологические эксперименты на изолированном сердце А.иса
Перфузия сердца п ви и электрическая стимуляция сердечного нерва
Приготовление тотального нейрокардиаяьного препарата.
Экстракция белка из перфузата
Электрофорез в ПААГ
Окрашивание электрофоретических гелей
Окрашивание кумасси .
Окрашивание нитратом серебра.
Окрашивание 1А Ф
Иммуноблотинг
Получение поликлональных антител к белку кДа
Получение сыворотки
Аффинная очистка поликлональных антител
Выделение нативного белка кДа из предсердия.
Геяьфипьтрационная хроматография.
Ионообменная хроматография.
Определение антибиотической активности препарата Е0
Определение опсонизирующей активности препарата Р.0
Получение гемолимфы
Приготовление .монослоев гемоцитов.
Приготовление дрожжей меченых I.
Исследование фагоцитарной активности гемоцитов i vi
Определение агглютинирующей активности препарата Е0
Методы статистического анализа.
Результаты
Морфологическая характеристика ГК
Локализация ГК в сердце ахатины
Особенности ультраструктури ой организации ГК
Иммунолокализация нейромедиаторов в предсердии.
Локализация пептидных медиаторов.
Локализация ацеппахолина и иорадреиалина.
Иммуноштохимичсская локализация белка теплового шока кДа.
Анализ лизата предсердия методом иммуноблотгинга.
Исследование влияния и на частоту сердечных сокращений у моллюска
Влияние стимуляции сердечного нерва на секреторную активность сердца.
Содержание общего белка в перфузате
Белковый состав перфузата
Морфологические изменения ГК при стимуляции сердечного нерва.
Иммунолокализация белка кДа.
Выделение нативного белка кДа из предсердия.
Характеристика белка кДа
А нт ибиот ическая акт леность.
Опсошаирующая активность.
Агглютинирующая активность.
Обсуждение.
Секреторная функция ГК.
Морфологическая характеристика ГК
Иммунолокализация пептидных медиаторов в ГК
Иммунолокализация норадреналина в ГК.
Пммунолокализация белка теплового шока кДа в ГК.
Взаимодействие ГК с нервном системой.
Морфологическая характеристика контактов ГК с нервными терминалами.
Иммунолокализация пептидных медиаторов в нервных терминалах
Иммунолокализация ацетилхолина и норадреналина в нервных терминалах
Влияние стимуляции сердечного нерва на секреторную активность ГК.
Участие ГК в продукции гуморальных защитных факторов.
Заключение.
Выводы.
Список использованной литературы


Стенка сердца образована эпикардом, миокардом и прерывистым слоем эндотелиальных клеток. Эпикард желудочка представляет собой слой однорядного эпителия, под которым расположен толстый слой внеклеточного матрикса. У некоторых гастропод голожаберные и переднежаберные предсердие участвует в образовании первичной мочи. В этом случае эпикард предсердия образован эпителиальными клетками, дающими отростки, которые контактируют с отростками соседних эпителиальных клеток с образованием щелевых диафрагм рис. Эпителиальные клетки вместе с подстилающей базальной мембраной участвуют в ультрафильтрации гемолимфы в перикардиальную полость, сообщающуюся реноперикардиальным протоком с почкой , , , i, , , . , . У лгочных моллюсков в стенке сердца не обнаружено морфологических структур, которые могли бы свидетельствовать об ультрафильтрации Воег . Мышечная ткань предсердия и желудочка организована в тонкие трабекулы, омываемые гемолимфой, что позволяет обходиться без коронарного кровоснабжения , . Миокард образован одноядерными мышечными клетками, контактирующими между собой при помощи интеркалярных дисков, десмосом и нексусов. В кардномиоцитах гастропод сократительный аппарат организован по косоисчсрченному типу , . Со стороны просвета сердца к миокарду примыкают многочисленные эндотелиальные клетки, образующие в желудочке почти сплошной слой. Рис. Строение стенки предсердия пресноводного моллюска Vivi vivi i . Ножки пд подоцитов под плотно прилегают к базальной мембране бм, отделяющей полость предсердия по от стенки этого органа. Эпикардиальныс клетки эп соединены оптированными контактами ск и образуют многочисленные инвагинации и. Некоторые клетки эпикарда подобно подоцитам образуют ножки, примыкающие к базальной мембране средняя часть рисунка. В некоторых местах эпикард образован столбчатыми клетками, контактирующими с базальной мембраной и не образующими ножек правая часть рисунка. Здесь базальная мембрана подстилается мышечными клетками мс и коллагеновыми волокнами i, гц гемоцит, мг молекулы гемоцианина, пп периподоцитарное пространство. Под эндотелиальными клетками и, как правило, возле нервных окончаний расположены крупные гранулярные клетки. Иннервация и нейрогу. Сердце гастропод обладает миогенной автоматией с диффузно расположенным водителем ритма , и находится под сложным нервным контролем ряда иептидэргических и непептидэргических нейронов , i, i . Детали иннервации сердца гастропод в некоторой степени варьируют. Здесь главное внимание будет уделено лгочным моллюскам ix, и в особенности i. Сердце i иннервирует сердечный нерв, представляющий собой перикардиальную ветвь интестинального нерва, отходящего от висцерального ганглия. К желудочку и предсердию нервные волокна подходят в местах их соединения с перикардом, при этом перикард так же получает иннервацию. Об интенсивности иннервации сердца свидетельствует большое количество волокон в сердечном нерве, например у оно составляет около волокон v, Ii, . Ультраструктурные исследования миокарда гастропод выявили высокую плотность иннервации предсердия, в то время как желудочек иннервирован слабо, за исключением его части, примыкающей к аорте i, , . По морфологическим критериям нервные волокна предсердия и нейрониля центральных ганглиев ix разделяют на четыре типа i, , . Аксоны первого типа содержат светлые синаптические везикулы диаметром около нм. Аксоны второго типа содержат преимущественно везикулы размером нм с элсктронноплотной сердцевиной и небольшое количество везикул, характерных для аксонов первого типа. В аксонах третьего типа находятся электронноплотные гранулы со средним диаметром 0 нм. К четвртому типу относятся аксоны, содержащие электронноплотные везикулы меньшего размера, чем у аксонов второго типа.