Экстрахромосомные структуры, содержащие компоненты синтеза и созревания РНК в ядрах ооцитов травяной лягушки

• Автор: Квасов, Иван Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 170 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

1. Обзор литературы

1.1. Ядрышко

1.1.1. Общие сведения

1.1.2. Ядрышко, как полифунш даональная органелла

1.2. Тельца Кахала

1.2.1. Скрученное тельце и сфера

1.2.2. Состав телец Кахала

1.2.3. Динамика телец Кахала

1.3. Бснерпосомы и кластеры интерхроматиновых гранул

1.3.1. Кластеры интерхроматиновых гранул
1.3.2. Бснерпосомы
1.4. Пространственная организация синтеза и созревания РНК в ядре.
1.5. Заключение
2. Материал и методика
2.1. Объект исследования.
2.2. Получение препаратов диспергированного содержимого ядер ооцитов
2.3. Ингибирование транскрипции с помощью актиномицина Д.
2.4. Непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание.
2.5 Транскрипция i vi.
2.6. Гибридизация нуклеиновых кислот i i
2.7. Псевдогибридизация i i по Голлу
2.8. Электронная микроскопия и иммуноэлектронная цитохимия.
2.9. Выявление и актина.
2 электрофорез белков в ПААГ. Электроперенос белков. Иммуноблотинг.
2 Микроинъекции мРНК коилина в ооцит.
3. Результаты
3.1. Внутриядерные структуры, содержащие факторы созревания
РНК, в средних вителлогенных ооцитах III IV стадии
3.1.1. Хромосомыламповые щетки
3.1.2. Б снерпосомы
3.1.3. Тельца Кахала
3.1.4. Ядрышки
3.1.5. Микроядрышки
3.1.6. Микротельцасателлиты
3.2. Распределение фосфорилированиой и нефосфорилированной
форм РНК полимеразы II в ядрах ооцигов на III IV стадии развития
3.3. Распределение внутриядерного актина
3.4. Исследование внутриядерных структур ооцитов III IV стадий развития после воздействия актиномицина Д
3.5. Внутриядерные структуры, содержащие факторы созревания РНК,
в поздних вителлогенных ооцитах V VI стадии
3.5.1. Кариосфера и капсула кариосферы
3.5.2. Тельца Кахала
3.5.3. Ядрышки
3.5.4. Микроядрышки и другие структуры
3.6. Выявление локализации вновь синтезированного коилина р в ядрах поздних вителлогенных ооцитов методом микроинъекции
мРНК коилина
4. Обсуждение
4.1. Стадии развития ооцитов а
4.2. Бснерпосомы
4.3. Тельца Кахала
4.4. Ядрышки
4.5. Микроядрышки
4.6. Микротсльцасателлиты
4.7. Капсула кариосферы
Заключение
Выводы
Список литературы


Существенным кажется тот факт, что белки цыпленка появляются в цитоплазме гстсрокариона только после окончательного формирования ядрышка. В связи с этим наблюдением было высказано предположение о роли ядрышка в метаболизме мРНК i, . В дальнейшем был получен ряд фактов, подтверждающих это предположение. Стус мРНК , , , а также специфические белки участвующие в сплайсинге и экспорте мРНК x белок VI и v белок IV . ii . Обнаружена корреляция между аберрантной морфологией ядрышка дрожжей и мутациями в процессинге и экспорте мРНК i . В некоторых из этих мутантов полиА РНК накапливается в ядрышке при тепловом шоке i . Все эти факты указывают на возможную связь ядрышка с синтезом и процессингом мРНК, но не объясняют механизмов этих взаимодействий. Существует предположение об обязательном транзите некоторых форм мРНК через ядрышко на пути в цитоплазму, что может указывать на некую регуляторную функцию ядрышка в процессинге мРНК и ее экспорте из ядра , . Интересно отметить, что ядрышко, видимо, играет ключевую роль в созревании 6 мяРНК. Эта молекула, в отличие от других мяРНК, для посттранскрипционных модификаций не выходит в цитоплазму, а направляется в ядрышко. Здесь же, в ядрышке, была обнаружена и одна из двух малых РНК, принимающих участие в кэшировании 6 мяРНК i . С другой стороны, вновь транскрибированные 6 мяРНК локализуются сначала в ядрышках, и только потом перераспределяются в другие внутриядерные домены , . При инъекции в ооцит шпорцевой лягушки 6 мяРНК она наблюдается в районе ПФК. Вышеприведенные факты указывают на ключевую роль, которую играет ядрышко в созревании 6 мяРНК. Кроме 6 мяРНК в ядрышке были найдены некоторые тРНК. Здесь, вероятно, может происходить созревание этих молекул. Так, в ядрышке обнаружили один из ферментов, принимающих участие в процессинге IIi, , . Кроме того в ядрышке нашли специфическую РНК, входящую в состав РНКазы Р. По последним данным этот фактор может участвовать в двух процессах процессинге прерРНК и процессинге тРНК . Эти факты указывают на возможность созревания тРНК в ядрышке. В то же время не все тРНК были обнаружены в ядрышке. Видимо, процессинг части тРНК происходит в цитоплазме, а части в ядрышке , . Необходимо упомянуть еще две группы фактов, не имеющих прямого отношения к теме нашего исследования. В ядрышках разных групп животных обнаружены тсломеразная РНК , i, и РНК, входящая в состав частицы распознавания сигнала i ii i , , . После инъекции в ядро РНК, входящей в состав , она локализуется сначала в ядрышке, и только потом выходит в цитоплазму , , . Интересно отметить, что большинство нетрадиционных для ядрышка факторов, идентифицированных в последнее время, имеют рибонуклеиновую природу. РНК , . Свет на малоизученные функции ядрышек может пролить их взаимодействие с гельцами Кахала ТК. Это взаимодействие бывает настолько тесным, что в ряде случаев возникает переход материала ядрышка в состав ТК . Некоторые ядрышковые белки фибрилларин, 8, обнаруживаются в ГК , . Существует предположение, что ключевую роль в перераспределении фибрилларина в ТК играет 0 . С другой стороны при обработки клеток окадаевой кислотой, ингибирующей сериитреониновую белковую фосфотазу, маркерный белок ТК р коилин и мяРНК накапливаются в ядрышках . . Аналогичный эффект возникает и при мутации 2ой аминокислоты р коилина . Но и в нормальных ядрышках могут присутствовать вышеназванные факторы. Так, в ядрышках дрожжей обнаруживаются малые ядерные РНК сплайсинга ii, . Впервые структуры называемые сейчас тельцами Кахала ТК, были описаны испанским ученым РамонКахалом в году в ядрах нейронов млекопитающихСаа1, . Одна или несколько аргентофильных органелл практически всегда идентифицировались вблизи ядрышка.