Предупреждение 2-клеточного блока развития в агрегационных химерах мыши : Роль межклеточных взаимодействий

• Автор: Неганова, Ирина Эриковна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 175 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ 4 Стр.

2. ГЛАВА 1. МОЛЕКУЛЯРНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ Стр.

ОСОБЕННОСТИ ДВУ КЛЕТОЧНОЙ СТАДИИ

РАЗВИТИЯ МЛЕКОПИТАЮЩИХ.

3. ГЛАВА 2.ИЗУЧЕНИЕ ДОИМПЛАНТАЦИОННОГО СТР.

РАЗВИТИЯ ЗАРОДЫШЕЙ МЫШЕЙ В УСЛОВИЯХ I

VI, ФЕНОМЕН 2КЛЕТОЧНОГО БЛОКА И ПУТИ ЕГО ПРЕОДОЛЕНИЯ.

4. ГЛАВА 3. ХИМЕРЫ МЛЕКОПИТАЮЩИХ, Стр.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХИМЕР ДЛЯ СПАСЕНИЯ ЗАРОДЫШЕЙ, НЕКОМПЕТЕНТНЫХ К САМОСТОЯТЕЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ.

5. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Стр.

6. РЕЗУЛЬТАТЫ 7 Стр.
7. ОБСУЖДЕНИЕ СТР.
8. ЗАКЛЮЧЕНИЕ СТР.
9. ВЫВОДЫ 9 0 Стр.
. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ Стр.
ВВЕДЕНИЕ


Синтез начинается через 3 часа после перехода с одно па дву клеточную стадию и достигает максимума через 9 часов после первого деления дробления. К концу 2 фазы второго клеточного цикла синтез снижается и остается на базовом уровне . Установлено, что для активации белка теплового шока необходим транскрипционный фактор 1 ,что делает этот фактор кандидатом на роль главного регулятора начала активации эмбрионального генома vi . Группа белков, экспрессирующихся на 2клеточной стадии, была давно идентифицирована как большое семейство белков теплового шока . Позже было показано, что транскрипция одного из членов этого семействаЬ8р. ДНК. Оказалось, далее, что при культивировании зародышей в течение 2 клеточной стадии имеет место индуцирующее влияние процесса культивирования на уровень транскрипции . Второй раунд репликации ДНК маркирует конец первой, минорной фазы активации эмбрионального генома и определяет начало его второй мажорной фазы i . В пятых, экспрессия репортер генов легко обнаруживается на 2кле гочной стадии и, таким образом ,также служит индикатором активации эмбрионального генома ii . Экспрессия зависимого репортер гена люциферазы определяется уже в одноклеточных зародышах, находящихся на стадии 2 , . Рсгу. Экспрессия репортер генов на 1клеточной стадии определяется только вследствие их микроинъекцин в мужской пронуклеус . Кроме того, различия в способности мужского и женского пронуклеусов поддерживать экспрессию экзогенных репортер генов так же наблюдается в период культивирования, соответствующий концу второго клеточного цикла ii . Эти данные позволяют предполагать, что активация эмбриональною генома АЭГ начинается в конце одноклеточной стадии и что существуют различия в способности мужского и женского пронуклеусов поддерживать транскрипцию репоргер генов и, в связи с этим, вероятно и генов зародыша . Часть 2 . Независимость активации эмбрионального генома от прогресса клеточных циклов. У видов, таких как X, АЭГ зависит от ядсрноцитонлазматичсского соотношения и количества раундов репликации ДНК i,. В противоположность этому, у мышей АЭГ ,как показывает синтез , более связана со временем, прошедшим после оплодотворения, чем с прогрессом клеточных циклов. В связи с этим, АЭГ регулируется некими внутренними зиготическими часами ii . Часть 3. Роль фосфорилировання белков в активации эмбрионального генома. То, что первый клеточный цикл находится под полным материнским контролем и транскрипция не является необходимым условием для перехода на 2клеточную стадию, предполагает, что посттрансляционные модификации белков материнского происхождения принимают участие в АЭГ. Некоторые изменения в белковом синтезе, которые происходят во время первого клеточного цикла, связаны с пополнением материнских мРНК i . Многие из этих изменений евязаны е такими посттрансляционными модификациями, как фосфорилирование ,V ,. Фосфорилирование белков играет важную роль в регулировании зиготических часов, которые являются триггером АЭГ. Вместе с тем, фосфорилирование белков может регулировать активность белков, являющихся трансдуктерами сигналов, генерируемых зиготичсскими часами. Фосфорилирование белков, катализируемое цАМФзависимой протеин киназой РКА, оказывается необходимым для АЭГ. Ни один из ингибиторов РКА, каждый из которых ингибирует фермент определенным образом, не ингибирует дробление 1клеточного зародыша на 2клеточный, но эти ингибиторы подавляют синтез и деление 2клеточного зародыша с образованием 4х клеточного i, , . Действие этих ингибиторов идентично оказываемому ааманитином. Роль РКА в АЭГ осуществляется на уровне транскрипции. Нельзя исключить и возможность того, что РКА регулирует и посттранскрипционные события, такие как процессинг мРНК . Ингибирование активности РКА подавляет экспрессию микроинъецированных репортер генов в такой же зависимости от используемой концентрации, что и при ингибировании синтеза ,. Гипотеза о том, что фосфолирирование белков, имеющих материнское происхождение, регулирует начало АЭГ предполагает, что АЭГ независима от белкового синтеза.