Молекулярно-генетическая и иммунофенотипическая характеристика мезенхимных стромальных клеток из миелоидных органов крыс в онтогенезе

• Автор: Кожевникова, Мария Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.25, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 159 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОСНОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. МСК основные аспекты биолог ии

1.1.1. История открытия МСК.

1.1.2. Терминология.

1.1.3. Критерии МСК.

1.1.4. Источники МСК

1.1.5. Методы выделения МСК.

1.1.6. Условия культивирования МСК

1.1.7. Морфологическая, функциональная и биохимическая неоднородность популяции МСК
1.1.8. Антигенный фенотип и профиль экспрессии генов МСК
1.1.9. Возможные направления дифференцировки МСК. Явление пластичности
1.1 Перспективы практического использования МСК в современной медицине
1.2. Общая характеристика МСК из печени зародышей как транзиторного органа миелоидного кроветворения в эмбриогенезе
1.2.1. Роль МСК и их производных в создании кроветворного микроокружения. Миграционные свойства МСК.
1.2.2. Предпосылки изучения МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга в сравнительном аспекте
1. 3. Молекулярногенетические основы дифференцировки МСК
1.3.1. Роль сигнальных белков и транскрипционных факторов в клеточной дифференцировке
1.3.2. Молекулярногенетические аспекты остеогенной дифференцировки МСК
1.3.3. Молекулярногенетические аспекты адипогенной.
дифференцировки МСК.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Антигенный профиль МСК из печени зародышей и зрелого
костного мозга
3.1.1. Оценка экспрессии негативных маркеров МСК на разных сроках культивирования.
3.1.2. Оценка экспрессии позитивных маркеров МСК на разных сроках культивирования.
3.2. Молекулярногенетические и морфологические аспекты остеогенной дифференцировки МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга в сравнительном плане.
3.2.1. Гистохимический и иммуноцитохимический анализ
остеогенной дифференцировки МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга.
3.2.2. Сравнительный молекулярногенетический анализ
экспрессии генов, ответственных за реализацию остеогенеза в культурах МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга.
3.3. Молекулярногенетические и морфологические аспекты адипогенной дифференцировки МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга в сравнительном плане
3.3.1. Гистохимический и иммуноцитохимический анализ
адипогенной дифференцировки МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга
3.3.2. Сравнительный молекулярногенетический анализ экспрессии генов, ответственных за реализацию адипогенеза в культурах
МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга.
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Сравнительная оценка антигенного профиля МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга.
4.2. Молекулярногенетический и морфологический анализ остеогенной дифференцировки МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга в сравнительном аспекте.
4.3. Молекулярногенетический и морфологический анализ адипогенной дифференцировки МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга в сравнительном аспекте.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Несмотря на такую функционачьную разобщенность, есть все основания предполагать, что остеобласты и адипоциты происходят от общего бипотентного предшественника в составе популяции МСК i . К этому следует добавить, что клетки обоих типов объединяет выполняемая ими исключительно важная функция секреторная, благодаря которой они играют незаменимую роль в формировании и поддержании кроветворного микроокружения vi, . Цель и задачи исследования. Все вышесказанное позволило наметить основную цель диссертационной работы сравнительный молекулярногенетический и иммунофенотипический анализ антигенного профиля, остеогенных и адипогепных потенций МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга крыс. Охарактеризовать изучаемые клеточные популяции с позиции общепринятых критериев МСК по экспрессии специфических поверхностных антигенов СЭ, СО, СО 5. Изучить динамику экспрессии указанных маркеров на разных сроках культивирования. МСК из двух источников. МСК. МСК из двух источников. МСК. Научная новизна. На экспериментальной модели культуре МСК из печени зародышей крыс, впервые проведена комплексная оценка антигенного профиля и динамики экспрессии специфических маркеров МСК в ходе культивирования в сравнении с таковыми из зрелого костного мозга. Показано, что исследованные клеточные популяции обладают сходным иммунофенотипом, а именно экспрессируют специфические поверхностные антигены СО, С3, СО 5. Выявлено, что по мере увеличения сроков культивирования МСК из обоих источников наблюдается снижение экспрессии таких маркеров как СБ и С. Впервые проведен подробный иммунофеногипический и гистохимический анализ остеогенных и адипогенных потенций МСК из печени зародышей в сравнении с таковыми МСК из костного мозга половозрелых крыс. МСК из печени зародышей обладают менее выраженными потенциями к адипогенезу и не способны к завершению остеогенной дифференцировки, а именно к формированию зрелых остеобластов и минерализованного межклеточного матрикса, в отличие от выраженных адипо и остеогенных потенций МСК из зрелого костного мозга. Впервые проведен сравнительный анализ экспрессии ряда генов, кодирующих маркеры остеогенной и адипогенной дифференцировок, на разных сроках культивирования МСК из обоих источников в соответствующих индукционных средах. Выявлено, что МСК из печени зародышей характеризуются более низкой экспрессией генов, вовлеченных в реализацию как остеогенной, так и адипогенной программ дифференцировок, по сравнению с МСК из зрелого костного мозга. Теоретическое и практическое значение. Для решения поставленных в работе задач реализован комплексный подход, позволивший в сходных экспериментальных условиях сравнить МСК из транзиторного печень зародышей и дефинитивного зрелый костный мозг органов миелоидного кроветворения. Подобный сравнительный анализ представляет общебиологический интерес, поскольку позволяет получить более целостное представление о системе МСК. Кроме того, полученные сведения позволяют судить о фенотипическом сходстве МСК из двух источников, но не их идентичности, проявляющейся в различной степени реализации той или иной программы дифференцировки в сравнимых условиях культивирования. Неодинаковые индуцибельные свойства МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга могут быть связаны с разной органной принадлежностью этих клеток, в частности, с влиянием специфических локальных внутриорганных факторов. Проведенное сравнительное изучение МСК из печени зародышей в сравнении с таковыми из зрелого костного мозга имеет также важное практическое значение. В заключение автор выражает глубокую признательность своим научным руководителям, д. В.И. Старостину и к. Микаеляну, оказавшим неоценимую помощь в организации экспериментальных исследований, принявшим непосредственное участие в их проведении и теоретическом анализе. Автор искренне признателен д. Р.Д. Зиновьевой за ценные критические высказывания и консультации. Автор также выражает благодарность сотрудникам лабораторий Гистогенеза и Молекулярногенетических проблем онтогенеза за помощь в организации экспериментов и обсуждении полученных результатов.