Внутриклеточный процессинг ЭФР-рецепторных комплексов на различных стадиях клеточного цикла

• Автор: Авров, Кирилл Олегович
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 129 с. : ил.

ЭФР является стабильным одноцепочечным полипептидом с молекулярной массой Да, состоит из аминокислот и содержит три внутримолекулярные дисульфидные связи, необходимые для сохранения третичной структуры Никольский и др. ЭФР мыши, крысы и человека v, , . Да. Кроме того, экстраклеточный домен содержит два участка, богатых цистеинами i, . Лаке с соавторами предположил, что между ними расположен сайт связывания ЭФР x . Далее, на основании функционального анализа лигандсвязывающего экстраклеточного домена в опытах с химерными рецепторами и электронномикроскопического изучения очищенного рецептора было выдвинуто предположение о четырехдоменной организации внешнего участка молекулы ЭФР i, i, . Рецептор ЭФР содержит один гидрофобный участок из аминокислотных остатков, проходящий через плазматическую мембрану. Этот трансмембранный домен выполняет пассивную функцию в проведении сигнала, что было подтверждено многочисленными заменами аминокислотных остатков в результате точечных мутаций . Можно предположить, что трансмембранный участок обеспечивает лишь заякоривание рецептора ЭФР в плазматической мембране. В тоже время, точечная мутация в трансмембранном домене в демонстрирующем высокую гомологию по отношению к рецептору ЭФР интегральном белке ЕгЬВ2 приводит к постоянной активации ТК последнего i . Трансмембранный домен рецептора отделяется от цитоплазматического так называемым подмембранным участком. Полагают, что подмембранный домен участвует в модуляции функций рецептора. ЭФР vi, . С , . Да. Внутриклеточный домен рецептора состоит из 2 аминокислотных остатков и содержит участок из приблизительно 0 аминокислотных остатков, который гомологичен каталитическому домену протеинкиназ, кодируемых онкогеном . Наиболее важен для стимуляции ТК активности лизин 1, являющийся сайтом связывания АТФ. Было показано, что при замене лизина на аланин наблюдается полное нарушение ТК активности рецептора как i vi, так и i viv за счет нарушения гидролиза АТФ . На концевом участке цитоплазматического домена расположены пять сайтов независимого автофосфорилирования по тирозину три основных Тир , и и два минорных Тир 2 и . Этот участок имеет молекулярный вес кДа и легко отщепляется под действием протеаз. В СООНконцевом домене рецептора ЭФР можно довольно четко выделить участки, несущие те или иные регуляторные функции. Участок, состоящий из 4 аминокислотных остатков , можно назвать ингибиторным доменом, поскольку его делеция приводит к увеличению ЭФРзависимого фосфорилирования внутриклеточных субстратов. Последовательность с 3 по аминокислотных остатков является доменом интернализации, регулирующим перемещение рецептора с клеточной поверхности в цитоплазму . Автофосфорилирование трех остатков тирозина в ингибиторном домене приводит к конформационным изменениям, при которых освобождается ТК домен и домен интернализации. Авторы назвали его i, подчеркивая его связь с регуляцией потоков кальция и интернализацией . Как уже было отмечено выше, эти регуляторные домены содержат пять тирозиновых остатков, которые могут быть фосфорилированы рецептором. По всей видимости, в результате фосфорилирования рецептор приобретает особую конформацию, при которой облегчается взаимодействие внутриклеточных субстратов с фосфотирозинами. Установлено, что после связывания рецептора ЭФР с лигандом происходит его димеризация, активация рецепторной тирозинкиназы ТК и стимуляции сигнальных каскадов i i, . Вызываемая ЭФР димеризация была продемонстрирована как на выделенных плазматических мембранах, так и на интактных клетках vi, . После димеризации рецепторов происходит их автофосфорилирование, при этом одна субъединица димера фосфорилирует другую. Кроме того показано, что после связывания ЭФР с рецептором образуются не только гомодимеры рецепторЭФР рецепторЭФР, но и гетеродимеры рецептора ЭФР и других интегральных ТК, принадлежащих к тому же семейству егЬВ, что и рецептор ЭФР . При этом также может происходить фосфорилирование субъединиц такого гетеродимера и передача сигнала к ядру . В семейство трансмембранных тирозинкиназ ЕгЬВ, кроме рецептора ЭФР , также называемый 1 входят ЕгЬВ2 , 2, ЕгЬВЗ 3 и 4 4 .