Изучение развития и экспериментальной патологии нейронов в органотипических роллерных культурах структур мозга и сетчатки млекопитающих

• Автор: Александрова, Ольга Петровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 121 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Методики культивирования нервной ткани.

1.2. Характеристика и применение

органотипических культур.

1.2.1. Органотипическое культивирование

гиппокампа.

1.2.2. Органотипическое культивирование

неокортекса.

1.2.3. Органотипическое культивирование сетчатки.

1.3. Сравнительная характеристика методов
трхмерного культивирования.
1.4. Механизмы токсичности возбуждающих
аминокислот.
1.4.1. Глутамат как возбуждающий нейромедиатор
нейронов.
1.4.2. Нейродеструктивные эффекты гомоцистеина.
1.5. Механизмы дейст вия нсйронротскторов при
токсичности возбуждающих аминокислот.
Материал и методы исследования.
2.1. Материал.
2.2. Химические реактивы.
2.3. Описание методики приготовления срезов
мозга и сетчатки для культивирования.
2.4. Культивирование срезов.
2.5. Экспериментальные воздействия на роллерные
культуры срезов мозга и сетчатки .
2.6. Г педологическая обработка препаратов.
2.6.1. Фиксация материала.
2.6.2. Гистологическая проводка.
2.7. Окрашивание срезов.
2.8. Методика обработки препаратов для
проведения эл ектронном и кроскш ш ч ес к их исследований.
ГЛАВА 3. Результаты исследований.
3.1. Органотимическое роллерное культивирование
гиппокампа крысы.
3.1.1. Результаты экспериментальных воздействий на
свободноплавающие роллерные культуры гиппокампа.
3.2. Органотипическое роллерное культивирование
неокортекса крысы.
3.2.1.
3.3.1.
ГЛАВА 4.
Результаты экспериментальных воздействий на свободноплавающие роллерныс культуры неокортекса крысы.
Органотнпическое роллернос культивирование сетчатки крысы.
Результаты экспериментальных воздействий на свободноплавающие роллерные культуры сетчатки крысы.
Обсуждение результатов.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Во время культивирования в результате гибели части нервных клеток в срезах могут проходить изменения архитектоники тканевого эксплантата, что, однако, не препятствует дифференцировке сохранившихся нейронов и процессам сииаитогснсза . Помимо этого, в изолированных эксплантатах вследствие утраты афферентных связей и эфферентных связей с клеткамнмншенямн внутренние межнейронные связи тканевого эксплантата реорганизуются, что сопровождается образованием дополнительных синапсов i i, . Для органотипического культивирования используется, преимущественно, ткань эмбрионов и животных на ранних стадиях постнатального развития, в которой продолжаются процессы днффереицировки и созревания нейронов i . i . . Таким образом, для изучения этих процессов в ткани критичным является возраст животныхдоноров. Например, для клетокзрен мозжечка это время ограничено концом второй недели постнатального развития, а для ткани гиппокампа 67 суток постнатального развития i . Фрумкипа и др. При выделении гиппокампа у более взрослых крыс старше сут. С другой стороны, существует огромный пласт задач, которые необходимо решать при помощи экспериментов на дифференцированной ткани с установившимися, характерными для нее межклеточными взаимодействиями. Поэтому, чрезвычайно актуальным является разработка методов органотипического культивирования нервной ткани взрослых животных, при которых трехмерная цитоархитектоника сохраняется и может поддерживаться достаточно длительное время. В настоящей работе использован оригинальный метод роллерного культивирования свободноплавающих срезов постнаталыюго мозга и сетчатки в быстровращающемся минироллере, ранее разработанный и применявшийся в нашей лаборатории для получения реагрегированных культур диссоциированных клеток эмбрионального мозга Викторов и др. Как показали выполненные нами исследования, при роллерном культивировании первично уплощенные срезы трансформируются в сфероиды, диаметром 13 мм, воспроизводящие трхмерную 3 органотипическую цитоархитектонику, характерную для структур мозга, использованных для культивирования Александрова и др. Александрова и др. Викторов и др. Viv . Viv . Цели исследования модификация и исследование возможностей использования метода роллерного органотипического культивирования для изучения развития и экспериментальной патологии нейронов структур головного мозга и сетчатки постнатальных и взрослых млекопитающих. Задачи исследования. Определить оптимальные условия для успешного роллерного органотнпнческого культивирования свободноплавающих срезов, полученных из тканей постнатально Изучить клеточную организацию ЗОсфсроидов, формирующихся в роллерных культурах неокортекса, гиппокампа мозга и сетчатки глаза гистологическими, иммуногистохимическими методами и методом электронной микроскопии. Установить оптимальные сроки культивирования структур постнатального мозга и сетчатки, в течение которых поддерживается жизнеспособность клеток и сохраняется органотипическая архитектоника, формирующихся сфероидов. Используя ЗОсфсроиды как модельную систему, изучить патоморфологические изменения нейронов в культурах головного мозга и сетчатки при экспериментальной ишемии и воздействии ряда нейротокеннов. Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые получены органотипические ЗОкультуры из постнатальных, дифференцированных тканей ЦНС на основе оригинального метода роллерного культивирования свободноплавающих срезов в быстровращающемся минироллере, разработанного в нашей лаборатории Викторов и др. Впервые показано, что дифференцированные ткани, выделенные из неокортекса, гиппокампа и сетчатки глаза способны формировать структуры в данных условиях культивирования. Трехмерная структура сфероидов позволяет поддерживать необходимые условия микроокружения для длительного переживания дифференцированных нервных клеток. Впервые показано, что клетки, формирующие сфероиды, полученные на основе срезов сетчатки и гиппокампа, проявляют наибольшую жизнеспособность и пластические потенции к формированию органоспецифической структуры по сравнению с таковыми из неокортекса.