Восстановление блоков клеточного цикла при повышенной экспрессии онкогена bcl-2 в трансформированных фибробластах грызунов

• Автор: Нелюдова, Анна Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 155 с. : ил.

Глава 3. Материал и методы

ГЛАВА 4. Результаты.

4.1. Антиапоптотическое действие гена 2 в трансформантах

4.2. Антипролиферативное действие онкогена 2 в трансформантах Е1Ас связано со способностью блокировать прохождение клеток по циклу после действия повреждающих агентов Нелюдова и др., v .,
4.3. Повышенная экспрессия 2 не восстанавливает регуляцию митоза в трансформантах Нелюдова и др., .
4.4. Содержание циклинзависимых киназ и циклинов и ассоциированная с ними киназная активность в присутствии продуктов гена 2 Нелюдова и др., v ., .
4.5. Функционирование ингибиторов циклинкиназных комплексов в присутствии продуктов гена 2 Нелюдова и др., v .,
4.6. Действие ингибитора 2 росковитина на пролиферацию трансформантов Нелюдова и др.,
4.7. Повышенная экспрессия Вс ведет к образованию комплексов между ингибитором циклинкиназных комплексов р1 и стресскиназой р v .,
4.8. Мутация ТА не влияет на антипролиферативный и антиапоптотический эффекты Вс в трансформантах
4.9. Образование комплексов между онкопродуктами Вс и А и активность транскрипционного фактора в трансформантах 2
4 Образование комплексов между онкопродуктами Вс и Тарарова и др.,
4 Роль I3киназного каскада в антипролиферативном и антиапоптотическом действии Вс.
4 Компоненты МАРкиназных каскадов как возможные кандидаты в мишени онкобелка 2 v ., .
4 В отсутствие стресскиназы р онкобслок Вс не защищает трансформанты ЕАНгаБ от клеточной гибели и не вызывает блоков клеточного цикла после повреждающих воздействий
4 Адриамицин вызывает необратимый блок клеточного цикла и черты преждевременного старения в клетках Е1АсНагазЬс Нелюдова и др.,
ГЛАВА 5. Обсуждение.
5.1. Вс с разной эффективностью защищает клетки ЕАсНагаБ от
апоп гоза, вызванного повреждающими агентами
5.2. Вс избирательно восстанавливает способность трансформантов Е1АсНагая останавливаться в клеточном цикле после действия повреждающих агентов.
5.3. Необратимый блок клеточного цикла как составная часть программы ускоренного старения трансформантов Е1АсНагазЬс после их обработки адриамицином
5.3. Ингибитор циклинкиназных комплексов рУаГ1 как мишень антипролиферативного действия Вс.
5.4. Генетическое картирование антиапоптотической и антипролиферативной функций Вс.
5.5. Компоненты МАРкиназных и Р3киназного каскадов как мишени
антипролиферативного и антиапоптотического действия Вс.
ГЛАВА 6. Заключение.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Устойчивость опухолевых клеток к повреждающим воздействиям связана с приобретением признака множественной лекарственной устойчивости, опосредованной высокой экспрессией особых поверхностных гликопротеинов, главной функцией которых является ЛТФзависимая регуляция процесса проникновения и выброса ядов из клетки , . Кроме того, устойчивость к повреждающим агентам может быть связана с подавлением апоптотической программы благодаря повышенной экспрессии продуктов антиапоптотических онкогенов, например 2, В кДа, киназ , или вследствие снижения экспрессии рецепторов смерти, например, v, V, . Автономность пролиферации клеток связана с нарушением передачи сигнала из внешней среды. Часто наблюдается повышенная экспрессия рецепторов ростовых факторов, что позволяет опухолевым клеткам отвечать пролиферацией на подпороговые для нормальных клеток концентрации ростовых факторов и короткое время стимуляции. Рецепторы ростовых факторов могут содержать мутантные конститутивно активн, е тирозинкиназные домены или не иметь внеклеточного домена, что приводит к активации в отсутствие соответствующего лиганда. Опухолевые клетки экспрессируют молекулы клеточной адгезии и мембранные липиды, характерные для делящихся клеток , i, . Центральную роль п передаче сигнала с рецепторов ростовых факторов играет киназный каскад киназы. Ключевым белком, регулирующим МАРкиназные каскады и другие каскады, активность которых необходима для пролиферации клеток, является белок . Известно, что в опухолей белки присутствуют в структурно измененной конститутивно активной форме, поэтому передают митогенный сигнал в отсутствие ростовых факторов. Блокаторами канцерогенеза являются опухолевые супрессоры, например, белки рстинобластомы , некоторые ингибиторы циклинзависимых киназ, белок р. В отличие от онкогенов, действие которых носит доминантный характер, действие опухолевых супрессоров имеет рецессивный характер. В трансформированных клетках их гены мутированы зачастую это делеции или продукты этих генов инактивированы взаимодействиями с онкогенами или клеточными белками, которые экспрессируются в трансформированных клетках. Большинство антипролиферативных сигналов приводят к накоплению в клетках ингибиторов циклинзависимых киназ. Они подавляют активность циклинкиназных комплексов, что репрессирует активность фазных генов вследствие инактивации транскрипционных факторов семейства 2 белками семейства ретинобластомы , р7, р0. Трансформированные клетки могут экспрессировать мутантные формы циклинзависимых киназ, неспособные взаимодействовать с ингибиторами, или экспрессировать мутантные ингибиторы. Кроме того, гены ингибиторов могут быть деле гированы , i, . Клеточный цикл определяют как последовательность событий, приводящих к делению клетки и обеспечивающих правильную репликацию генетического материала и равное его распределение между дочерними клетками. Клеточный цикл соматических клеток представлен следующими фазами прссинтетической СО, фазой синтеза ДНК Б, постсиитетической и митозом М. В каждой из этих фаз имеются сверочные точки сЬсскртэ, в которых проверяется наличие поврежденной ДНК. Обнаружение повреждений ДНК особыми сенсорными белками приводит к активации каскада событий, остановке клеток в свсрочной точке сЬескрошО и репаративному синтезу ДНК, а в случае, нерепарирусмых повреждений ДНК к гибели клетки. В прссинтетической фазе существует точка рестрикции конгрольная точка, IIро1гП, для прохождения которой клетке необходимы сигналы от ростовых факторов и молекул клеточной адгезии. Для завершения митоза необходима правильная сегрегация хромосом, поэтому перед расхождением хромосом клетка проверяет, все ли хромосомы находятся на метафазной пластине. Для трансформированных клеток характерно нарушение строгой регуляции прохождения клеткой сверочиых точек и точки рестрикции, что ведет к высокой изменчивости генетического материала и селекции высокоустойчивых фенотипов. Регуляцию событий клеточного цикла можно представить на нескольких уровнях. Первый уровень образован, с одной стороны, белкамирецепторами клеточной поверхности и киназными каскадами, активирующимися в ответ на сигналы от ростовых факторов Ркиназа, МАРкиназы, а также, со стороны ядра, сенсорами повреждений ДНК киназами АТИ. АТМ, белком р.