Изменение липидного состава перитонеальных макрофагов и их ядер при апоптозе и некрозе

• Автор: Аксенова, Оксана Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саранск
• Количество страниц: 135 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Макрофаги

1.1.1. Морфологические особенности и молекулярно генетическая организация макрофагов.

1.1.2. Реактивность макрофагов как механизм, регулирующий

воспаление

1.2 Алоптоз и некроз две формы гибели клетки

1.3. Роль липидов в апоптозе и некрозе

1.3.1. Липиды ядра

1.3.2. Роль липидов в рецепции и внутриклеточной сигнализации.

1.3.3. Перекисное окисление липидов и его роль в реализации
программы апоптоза и некроза
1.4. Роль липополисахаридов, активных форм кислорода и ме
диаторов воспаления в апоптозе и некрозе макрофагов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Материалы
2.2. Методы.
2.2.1 Объект исследования
2.2.2. Получение перитонеальных макрофагов
2.2.2.1. Постановка эксперимента
2.2.3. Выделение ядер ПМФ.
2.2.4. Определение жизнеспособности клеток
2.2.5. Экстракция липидов из ПМФ и их ядер
2.2.6. Определение диеновых, триеновых коньюгатов и малонового диальдегида в ПМФ и их ядрах
с
2.2.7. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и их количественное определение.
2.2.8. Определение активности СОД и каталазы в ПМФ и их ядрах.
2.2.9. Определение концентрации общего белка в ПМФ и их ядрах.
2.3. Выделение и электрофорез ДНК макрофагов в агарозном
2.3.1. Приготовление агарозного геля
2.3.2. Определение концентрации ДНК.
2.3.3. Световая и флуоресцентная микроскопия ПМФ
2.3.4. Окрашивание по ПаппенгеймуКрюкову.
2.3.5. Окрашивание акридиновым оранжевым
2.3.6. Окрашивание 8
2.3.7. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Влияние перекиси водорода и ЛПС . i на гибель перитонеальных макрофагов.
3.2. Влияние перекиси водорода и ЛПС . i на спектр липи
дов перитонеальных макрофагов и их ядер.
3.3. Изменение окисленности липидов при Н2О2 и ЛПС . i индуцируемой гибели ПМФ.
3.4. Влияние Н2О2 и ЛПС . i на активность некоторых антиоксидантых ферментов
3.5. Влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла на гибель перитонеальных макрофагов
3.6. Влияние модификаторов Са2проницаемости на Н2О2индуцированный апоптоз перитонеальных макрофагов
з
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


С помощью модификаторов ФИцикла показано, что нарушение в обмене ФИцикла является одной из причин толкающих клетку на путь апоптоза выявлено влияние модификаторов Са2проницаемости на Н2индуцированный апоптоз и некроз перитонеальных макрофагов. Перекись водорода и ЛПС . ЛПС . Перекись водорода и ЛПС . В реализации программы апоптоза перитонеальных макрофагов важную роль играют ФИцикл и ионы Са2. Теоретическая и практическая значимость работы. Данные проведенного комплексного исследования вносят существенный вклад в решение фундаментальной проблемы биологии клетки проблемы молекулярных механизмов гибели клетки, расширяя представления об участии липидов в апоптозе и некрозе. Эта область исследований имеет не только теоретическую, но и практическую значимость. На основании динамики изменения содержания индивидуальных липидов можно выявлять склонность клетки к апоптозу или некрозу. Практическую ценность имеют данные о влиянии перекиси водорода, ЛПС . ФИцикла и Са2проницаемости на гибель перитонеальных макрофагов. Полученные данные позволяют рекомендовать использование перекиси водорода как эффективного индуктора апоптоза, выявляющего и элиминирующего популяцию клеток с генетическими повреждениями. Апробация работы. Материалы, представленные в диссертации, были доложены на международной научной конференции Биотехнология на рубеже двух тысячелетий Саранск, г, на международной конференции Рецепция и внутриклеточная сигнализация ПущинонаОке, г. III Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием Дизрегуляционная патология органов и систем Москва, г. Огаревских чтениях научных конференциях Мордовского госунивсрситета Саранск, , , г. Современные медицинские технологии Хорватия, У маг, г. ГЛАВА 1. Макрофаги наиболее филогенетически древние элементы соединительной ткани и иммунной системы, являются важным компонентом воспалительных процессов, реагируют на бактериальные и вирусные инфекции, лучевое и химиотерапевтическое воздействие, вторичные инфекции опухолей, продукты клеточного распада Зубова С. Г., Окулов В. Б., . Макрофаги относят к мононуклеарным фагоцитам, которые включают происходящие из единой стволовой клетки костномозговые предшественники монобласт и промоноцит циркулирующий в крови моноцит и зрелые тканевые макрофаги. При осуществлении своей защитной роли моноциты, под действием хемотаксических молекул, в течение 23 суток из кровяного русла мигрируют в очаг воспаления, делятся и пополняют популяцию зрелых резидентных макрофагов, которые в свою очередь фагоцитируют вторгшиеся микроорганизмы и погибающие нейтрофилы Маянский А. Н., Маянский Д. В зависимости от места локализации различают плевральные и перитонеальные макрофаги звездчатые ретикулоэндотелиоциты купферовские клетки печени альвеолярные макрофаги интердигитарные клетки лимфатических узлов макрофаги вилочковой железы тимические костномозговые макрофаги остеокласты синовиальные клетки тип А глиальные макрофаги микроглиоциты мозга мезангиальные клетки почек поддерживающие клетки клетки i яичка дендритные клетки лимфатических узлов и селезенки клетки Лангенгарса кожи и слизистых оболочек Маянский А. Рис. Перитонеальные макрофаги мыши Карр Ян, . На внешней стороне клеточной мембраны находится клеточная мантия или кайма, состоящая из мукоидных веществ, имеющая важное значение в распознавании инородного материала, фагоцитозе и прилипании к стеклянным поверхностям. Мембранные системы макрофагов хорошо развиты, и представлены ранулярной эндоилазматической сетью. Маянский Д. Н., Смирнов В. С., Фрейдлин И. С., Дранник Г. Особенно высоко их содержание в печени ,4 легких ,9 брюшной полости 7,6 в других тканях ,1 . Живут тканевые макрофаги от до суток Дранник Г. Н., . Если говорить об усредненном макрофаге, то он обычно имеет овальное или почковидное ядро, содержит лизосомы и эндоцитозные вакуоли. Поверхность макрофагов имеет бахромчатый вид, при стимуляции число ворсинок и отростков мембраны увеличивается Маянский А. II. Маянский Д. Н., . Помимо этого на поверхности клетки наблюдаются многочисленные глубокие, почти сферические выемки диаметром от 0,1 мкм и больше, имеющие вид вакуолей рис.