Индукция патологических митозов и изменение клеточного цикла в первичных фибробластах человека, инфицированных цитомегаловирусом

• Автор: Барсукова, Анна Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Культура клеток

Инфицирование вирусом

Световая микроскопия

Антитела и сыворотки

Иммунофлуорссцснтный анализ

Препараты распластанных хромосом

Электронная микроскопия
Компьютерная реконструкция
Радиоавтография
РЕЗУЛЬТАТЫ
Клеточная модель для изучения ЦМВ
Экспрессия белков ЦМВ в клетках ФЛЭЧ
Появление патологических митозов в культуре, инфицированной ЦМВ Макроструктура хромосом в патологических митозах
Кинетохоры в ЦМВинфицированных клетках ФЛЭЧ
Иммуноцитохимичсскин анализ центромерных районов хромосом в ЦМВинфицированных клетках ФЛЭЧ
Митотический аппарат в ЦМВинфицированных клетках центросома
и веретено деления
Влияние ЦМВ на продолжительность некоторых стадий клеточного цикла
ОБСУЖДЕНИЕ
Экспрессия белков ЦМВ в клетках ФЛЭЧ
Общая характеристика патологических митозов при ЦМВинфекции
Макроструктура хромосом в патологических митозах
Центромернокинетохорный комплекс в патологических митозах
Митотический аппарат при ЦМВинфекции
Возможные причины остановки митотического деления в условиях
ЦМВинфекции
Влияние МВ на продолжительность отдельных стадий
к легочного цикла
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Однако в этой области до сих пор остается немало белых пятен. Митотический аппарат в клетках млекопитающих. В клетках млекопитающих ультрасгруктурныс и цитофкзиологические особенности митоза достаточно хорошо изучены. Характерным признаком его наступления является конденсация хроматина, начинающаяся в ядре в профазе митоза и продолжающаяся после разрушения ядерной оболочки Хромосомы млекопитающих, как у всех эукариот, имеют особый домен, обеспечивающий возможность движения во время клеточного деления кинетохор. Он представляет собой комплекс ДНК и белков, формирующийся в митозе в районе первичной перетяжки центромеры хромосомы. На ультраструктурном уровне кинетохор выявляется как трсхслойная структура, состоящая из наружной и внутренней пластинок, разделенных промежуточной зоной , . Наружная пластинка имеет толщину нм и средний диаметр 0. i, . Эта область является местом контакта микротрубочек веретена деления с хромосомой . , . Болес подробное изучение этой зоны показало, что наружная пластинка образована двумя слоями, имеющими фибриллярную структуру . , . Внутренняя пластинка кинетохора непосредственно прилегает к центромерному хроматину и не всегда четко различима Она становится более заметна после формирования контакта между кинегохором и микротрубочками i, . В тех случаях, когда хромосома не связана с микротрубочками, например в ранней промстафазс или после воздействия щпостатиков, наблюдается дополнительный четвертый слой над наружной пластинкой кинетохора фибриллярная корона , По современным представлениям, кинетохор у всех позвоночных состоит из множества функциональных субъединиц и способен связывать от до микротрубочек у разных видов i . Некоторые авторы наблюдали появление кинетохорной структуры в клетках человека уже на стадии профазы. В этот период кинетохор выглядит как нечеткое шаровидное образование без выраженной структуры на поверхности конденсирующейся хромосомы . Динамика изменений ультраструктуры кинетохора в митозе была подробно изучена И. С. Кудрявцевым на фибробластах мыши Кудрявцев, . Он показал, это кинетохор как многослойная структура впервые появляется на поверхности митотических хромосом в ранней прометафазе, сразу после нарушения целостности ядерной оболочки. На этой стадии особенностью строения кинетохора является выраженная двуслойностъ его наружной пластинки Внутренняя пластинка не выявляется На поверхности кинетохора хорошо заметно фибриллярное гало, микротрубочки в этой зоне отсутствуют Как правило, на этой стадии кинетохоры имеют подковообразную форму. В поздней прометафазе большинство кинетохоров уже связаны с микротрубочками, и фибриллярное гало у них отсутствует Наружная пластинка становится более плотной, двуслойносгь в ней уже не видна В метафазе кинегохоры имеют характерную трехслойную организацию На некоторых срезах можно различить, что наружная пластинка состоит из субъединиц, к каждой из которых подходит одна микротрубочка Кинегохоры на этой стадии плоские, вытянутые В анафазе морфология кинетохоров значительно не изменяется, однако выявить внутреннюю пластинку уже не удается В телофазе, после прекращения движения хромосом, кинетохорная структура наблюдается крайне редко. Цеигромерноюшетохорный комплекс включает целый ряд белков, многие из которых охарактеризованы за последние годы рис. Так, к наиболее изученному классу i в настоящее время относят 6 белков, весьма различных по структуре и функциям Показано, что белок молекулярная масса кДа является специфическим цстгромерным вариантом гистона НЗ . Наиболее подробно изучен белок В мол. Да. Установлено, что он имеет специфический сайт связывания с альфасателлитной ДНК. , , . , и располагается в области под кинетохором . Функцией этого белка, повидимому, является упаковка гетерохроматина в районе центромеры i , .