Особенности оплодотворения ооцитов и доимплантационного развития эмбрионов человека в зависимости от показателей гаметогенеза

• Автор: Воробьева, Ольга Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 293 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. История создания и основные принципы технологии ЭКО

1.2. Современные представления о регуляции процессов фолликулогенеза и оогенеза у человека

1.3. Процесс оплодотворения ооцитов человека i vi.

1.4. Особенности оплодотворения ооцитов и эмбрионального развития при гормональной недостаточности яичников

1.5. Процесс сперматогенеза в норме и при патологии.

1.6. Основные лабораторные методы анализа морфологических

признаков сперматозоидов человека

1.7. Значение оценки степени компактизации хроматина ядер

сперматозоидов в диагностке мужского бесплодия.

1.8. Особенности доим плантационного развития эмбрионов человека
в программе ЭКО
1.9. Аномальное оплодотворение ооцитов в программе ЭКО
1 Особенности сегрегации хромосом при созревании ооцитов человека
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Частота оплодотворения ооцитов при различных показателях спермограммы и морфологических характеристиках сперматозоидов.
3.2. Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов
при различной концентрации сперматозоидов в среде
3.3 Особенности эмбрионального развития при тератоспермии
3.4. Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов
при аномальной организации хроматина сперматозоидов.
3.5. Оценка методом проточной цитофлюориметрии эффективности очистки сперматозоидов в программе ЭКО
3.6. Сравнительный анализ морфологии сперматозоидов человека нативный эякулят прогрессивно подвижная фракция.
3.7. Цитологический анализ связывания сперматозоидов с блестящей оболочкой ооцитов в программе ЭКО.
3.8. Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов при применении золадскса гозерелина в схеме стимуляции суперовуляции.
3.9. Влияние возраста женщины на процесс оплодотворения ооцитов
и развитие эмбрионов в культуре.
3 Особенности оплодотворения и развития эмбрионов i vi
у женщин с гормональной недостаточностью яичников.
3 Особенности оплодотворения и развития эмбрионов
при вторичном поликистозе, генитальном эндометриозе и гиперпролактинемии.
3 Оплодотворение ооцитов и развитие эмбрионов i vi в зависимости от реакции яичников на стимуляцию супервуляции
3 Влияние внутрифолликулярного перезревания ооцитов человека на процессы оплодот ворения и раннего развит ия зигот и эмбрионов.
3 Влияние процесса фрагментации эмбрионов на частоту наступления беременности в программе ЭКО
3 Зависимость процесса ранней компактизации эмбрионов человека в культуре от показателей фолликулогенеза и сперматогенеза
3 Анализ частоты хромосомных аберраций в ооцитах человека
4. ОБСУЖДЕНИЕ.
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
6. ВЫВОДЫ.
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
9. БЛАГОДАРНОСТИ
ГнРГ аГнРГ ГИФТ
иксилг
МНФФСГЭКО, IV IV РСС
I
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
гонадотропинрилизинг гормон агонисты гонадотрипинрилизинг гормона перенос гамет в фаллопиевы трубы I внутрицитоплазмагическая инъекция сперматозоида II ii ii лютеинизирующий гормон морфологически нормальные формы фолликулостимулирующий гормон
экстракорпоральное оплодотворение, оплодотворение i vi антиген лейкоцитов i vi iii
i преждевременная
конденсация хромосом ПКХ.
ii v
ii введение сперматозоида под
блестящую оболочку ооцита
недостаточность лютеиновой фазы
ВВЕДЕНИЕ
АКТУАЛЬНОСТЬ


К часам гамета достигает стадии I, а плотность клеток кумулюса составляет 0 клеток мм2 при исходной плотности на стадии зародышевого пузырька около клеток мм2. Стадия М II наблюдается к часам i . Определение степени зрелости комплексов ооцитклетки кумулюса является необходимым условием для определения времени инсеминации. При введении сперматозоидов в среду к незрелым ооцитам, находящимся на стадии I или на стадии зародышевого пузырька, наблюдается процесс пенетрации, однако не происходит образования пронуклеусов. Преждевременная инсеминация ооцитов приводит к потере в последующем, при дозревании, способности к реинсеминации. Для более точного определения зрелости ооцитов существует два метода метод, позволяющий растянуть комплекс ооцитклетки кумулюса на поверхности пластиковой чашки, а также метод, при котором клетки кумулюса удаляются с помощью гиалуронидазы. После выделения первого полярного тельца для завершения цитоплазматического созревания ооцитам необходимо еще от 2 до 5 часов. Незрелые клетки рекомендовано просматривать каждые часа и после выделения полярного тельца инсеминировать через часа V . Частота оплодотворения ооцитов, созревших в культуре, остается существенно более низкой, чем у клеток, созревших в фолликулах. Гиалуроиидаза используется для отделения клеток кумулюса от ооцита как при методе ИКСИ, так и при обычной технике ЭКО. Было показано, что обработка комплексов ооцитклетки кумулюса этим ферментом не нарушает процесса оплодотворения, последующего эмбрионального развития и частоты наступления беременности, в то же время эта методика позволяет четко определить время инсеминации для каждого ооцита , . Мнения авторов относительно необходимости проводить инсеминацию через нескольких часов после аспирации фолликулов разделились. В ряде работ было показано, что частота оплодотворения ооцитов не зависит от интервала до инсеминации i . По данным других работ интервал времени в часов снижает частоту образования полиплоидных зигот и повышает эффективность оплодотворения . Увеличение времени от момента введения X до начала аспирации с часов до часов существенно не увеличивает риск преждевременной овуляции, но при этом уже нет необходимости в периоде инкубации ооцитов до их инсеминации i . В результате исследований, посвященных изучению закономерностей фолликулярного роста в яичниках млекопитающих животных и человека, были разработаны схемы гормональной стимуляции функции яичников, позволяющие получить большое число синхронно
развивающихся преовуляторных фолликулов. Однако эффективность при таком методе получения ооцитов была достаточно низка. Группой специалистов из Центра по лечению бесплодия Университета в Монак МопаБЙ был разработан первый протокол стимуляции фолликулогенеза с введением кломифенцитрата и человеческого менопаузального гонадотропина, что позволило значительно увеличить число полученных ооцитов и повысить частоту наступления беременности Тгоипэоп а1. В последующем этот протокол стимуляции был модифицирован другими исследователями. Основным его недостатком является тот факт, что эндогенные гонадотропины вызывают преждевременную лютеинизацию в случаев и преждевременную овуляцию. В дальнейшем существенный прогресс в области стимуляции фолликулогенеза был достигнут с введением аналогов гонадотропинрилизинг гормона аГнРГ. Агонисты гонадотропинрилизинг гормона аГнРГ широко используются во всем мире в схемах стимуляции суперовуляции в программе ЭКО. Форма выпуска этих препаратов различна, от эндоназального спрея и ежедневных подкожных инъекций до депопрепаратов. В этой связи существует возможность применения их в разных протоколах стимуляции функции яичников. Наиболее распространенным является длинный протокол, при котором аГнРГ начинают вводить во вторую фазу предшествующего стимуляции цикла. Короткий протокол, когда введение аГнРГ начинается с го дня менструального цикла, в настоящее время применяется в основном у пациенток с недостаточным ответом яичников на стимуляцию суперовуляции. Общепризнанным преимуществом длинного протокола является возможность подавления собственного предовуляторного пика Ж и предупреждения спонтанной овуляции.