Сравнительный анализ митотических хромосом и хромосом-ламповых щеток Gallus gallus domesticus с использованием методов дифференциального окрашивания и FISH

• Автор: Галкина, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 179 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ.
ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Дифференциальная исчерченность митотической хромосомы

и ее природа.

1.1.1. Природа и свойства гетерохроматиновых блоков.

Гетерохроматиновыс сегменты хромосом птиц на примере

. i .

1.1.2. Организация ядрьшкообразуюцих районов хромосом.

Районы ядрышкового организатора на хромосомах птиц.

1.1.3. Природа и свойства и сегментов.

сегменты на хромосомах птиц.
1.1.4. бэндинг и дифференциальное окрашивание хромосом
нуклеотидсиецифичными флуорохромами.
Дифференциальное окрашивание флуорохромиыми красителями хромосом птиц.
1.2. Изохорная организация генома.
1.3. Организация мейотических хромосом.
1.3.1. Хромосомы на стадии леггго гены и пахи гены.
1.3.2. Хромосомы на стадии диплотены.
1.3.3. Хромосомы на стадии диплотены хромосомыламповые
щетки.
1.4. Проблема сравнительного анализа структурной организации
митотических и мейотических хромосом.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Объект и материал исследования.
2.2. Методы исследования.
2.2.1. риготовлеиие препаратов митотических хромосом птиц из
эмбриональных тканей.
2.2.2. Приготовление препаратов хромосомламповых щеток.
2.2.3. Процедуры окрашивания препаратов.
2.2.4. Получение зондов для i i гибридизации.
2.2.5. Мечение ДНКзондов.
2.2.5а. Мечение ДНКзондов методом никтрансляции.
2.2 Мечение ДНКзонда методом случайной о лигонуклеотидной
затравки.
2.2.5в. Мечение ДНК с помощью полимеразной цепной реакции.
2.2.6. Определение эффективности мечения ДНКзонда.
2.2.7. Флуоресцентная гибридизация i i.
2.2.8. Флуоресцентная микроскопия.
2.2.9. Статистические методы.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1. Молекулярная гетерогенность хромосом курицы, выявляемая с помощью дифференциального окрашивания.
3.1.1. Морфология митотических хромосом курицы, окрашенных 3I. Локализация Тблоков.
3.1.2. Дифференциальное окрашивание хромосомламповых щеток домашней курицы.
3.1.2.1. Морфология макрохромосомламповых щеток домашней курицы после Iокрашивания.
3.1.2.2. Морфология макрохромосомламповых щеток домашней курицы после СМ Азокрашивания.
3.1.2.3. Морфология макрохромосомламповых щеток домашней курицы после СМА3ЕАР1окрашивания.
3.1.2.4. Дифференциальное окрашивание микрохромосомламповых щеток курицы.
3.2. Сравнительное картирование ДНКпоследовательностей на
митотических хромосомах и хромосомахламповых щетках домашней курицы с помощью I.
3.2.1. Картирование теломерной последовательности ,, на митотических хромосомах и хромосомахламповых щетках курицы.
3.2.2. Сравнительное картирование и богатых фракций геномной ДНК легких и тяжелых изохоров на митотических хромосомах и хромосомахламповых щетках курицы.
3.2.2.1. Картирование ДНК фракций тяжелых и легких изохоров
на митотических хромосомах курицы.
3.2.2.2. Картирование на хромосомахламповых щетках домашней
курицы ДНК фракций тяжелого 4 и легких изохоров.
3.2.3. Сравнительное картирование клонированных
последовательностей ДНК на митотических хромосомах и хромосомахламповых щетках домашней курицы.
3.2.3.1. Картирование генов 5.8 рРНК и генов главного
комплекса гистосовместимости МНС II на митотических хромосомах и хромосомахламповых щетках курицы.
3.2.3.2. Картирование на митотических хромосомах и хромосомахламповых щетках эндогенной вирусной последовательности
v покус V.
3.3. Анализ распределения событий кроссинговера в разных
районах хромосомламповых щеток курицы.
3.4. Сравнительный анализ сегментации митотических хромосом и
хромомеропетлевой структуры хромосомламповых щеток курицы.
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Линейная неоднородность хромосомламповых щеток домашней курицы .i. Что нового может дать изучение хромомеропетлевой организации хромосомламповых щеток для понимания организации системы
блоков митотических хромосом
4.2. Молекулярная гетерогенность хромосом в бимодальных
кариотипах птиц.
4.3. Функциональная гетерогенность хромосом домашней курицы
. i.
ВЫВОДЫ.
1ИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.
ГГР горячая точка рекомбинации
лщ хромосомы типа ламповых щеток
млн.п.н. миллион пар нуклеотидов
т.п.н. тысяча пар нуклеотидов
ци центромерный индекс
ЯОР район ядрышкового организатора
СМАз хромомицин Аз
Диазабициклоокган
I 4,6диамино2фенилиндол
I внутренний сай г теломерной последовательности
I флуоресцентная i i гибридизация
I флуоресцеин изотиоцианат
МНС главный комплекс гистосовместимости
скэффолдматрикс ассоциированные районы
стандартный натрийцитрагный буфер
ВВЕДЕНИЕ


Когезия сестринских хромагид, влияние на транскрипцию и рекомбинацию вот те известные специфические функции, которые выполняет гстерохроматин i, . Гетерохроматиновые районы содержат мало генов ii . Примерами генов, располагающихся в гетерохроматиновых районах, могут служить 9 известных генов хромосомы дрозофилы. Шесть из них кодируют факторы фертильности 1, 2, 3, 5, 1, 2, причем три из них очень большие 1, 3 1 занимают по хромосомы, то есть примерно по 4 млн. Локус представляет собой кластер рРПКгеиов и занимает около 5 всей ДНК хромосомы обзор Жимулев, . Ответственными за правильную конъюгацию X и Ухромосом и их расхождение в мейозе являются короткие последовательности нуклеотидов длиной 0 п. РНК и получившие название локусов . Ген влияет на правильное поведение хромосом в мейозе и формирование гамет i, iii, . Повидимому, но особенностям функционирования гены из гетерохроматиновых районов сильно отличаются от генов эухроматина. Как правило, гены из районов гетерохроматина многократно повторены и нуждаются в специфическом гетерохроматиновом окружении, обычно подавляющем активность генов из эухроматиновых районов i . В соматических клетках некоторых животных ДНК гетерохроматина может быть элиминирована vi, , , iii, i, , или недореплицирована в процессе политенизации хромосом обзор Жимулев, . При этом если механизм диминуции связывают с событиями сайтспеиифической рекомбинации ii, , , то механизм недорепликации со свойством ДНК гетерохроматиновых районов реплицироваться в поздней фазе , i, . Одно из важнейших свойств гетерохроматина его влияние на число и распределение хиазм в мейотических хромосомах животных и растений , i. Как правило, частота рекомбинации в гетерохроматиновых районах сильно уменьшена обзор , . Сообщается также и об отсутствии влияния гетерохроматина на частоту возникновения хиазм i, , . В проявление свойств гстсрохроматина оказываются вовлеченными специфические белки. Спаривание гетерохроматиновых районов сестринских хроматид, по всей видимости, объясняется присутствием белков iv, I, i, а эффект положения мозаичного типа, выражающийся в инактивации тех генов, которые оказываются вблизи гетерохроматиновых районов, осуществляется благодаря наличию белков I i ii обзор , , . Гетерохроматиновые сегменты хромосом птиц на примере . Курица, как и птицы вообще, является очень неудобным с цитогенетической точки зрения объектом, обладающим сложным кариотипом. Кариотип . Наиболее крупные из них пар имеют в митозе длину мкм и носят название макрохромосом. Остальные хромосомы, в основном имеющие акроцентрическую форму, называются микрохромосомами. Длина наименьшей из них 3,4 млн. Пичугин и др. Сисчерченность хромосом кур своеобразна. Ссегменты, при этом хромосома выглядит полностью гетерохроматиновой. На аугосомах присутствуют лишь небольшие по размеру Сблоки на теломерах и в прицентромсрных районах i . Дукельская, . В работе с хромосомами птиц использовались и нуклеотидспецифичные флуорохромы. В работах Родионова и соавт. Родионов и др. Шмида и Гатгенбах i, , , Ауэра с соавт. Майра с соавт. Однако у японского перепела ix ix i и майны i ii прицентромерный гетерохроматин макрохромосом содержит большое количество АТпар нуклеотидов Родионов и др. Карты богатых блоков гетерохроматина курицы были построены Родионовым и соавт. Родионов, . Распределение Сблоков по хромосомам кур является типичным для кариотипов птиц в целом. Во всех случаях у птиц наблюдаются маленькие прицентромерные и прителомерные Сблоки на макрохромосомах и хромосомы сильно гетерохроматизированы ср. Булатова, , , . При этом следует заметить, что получаемые при Сокрашивании картины дифференциальной исчерченности очень вариабельны , i, Дукельская, . Предполагается, что этот факт связан не столько с реальным полиморфизмом в расположении и размерах Сблоков, сколько с высокой чувствительностью хромосом птиц к жестким обработкам при Сокрашивании, в результате чего даже небольшие изменения метода обработки и локальные вариации в условиях окрашивания на разных участках препарата ведут к разным картинам Сисчерченности.