Ранний эмбриогенез американской норки (Mustela vison) in vivo и in vitro

• Автор: Кизилова, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 249 с. : ил.

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Очерк биологии размножения куницсобразных iv. i

1.1.1. Брачный период и беременность

1.1.2. Межвидовые гибриды

1.2. Ранний эмбриогенез

1.2.1. Оогенез

1.2.2. Динамика образования фолликулов

1.2.3. Овуляция и регуляция овуляции

1.2.4. Оплодотворение

1.2.5. Дробление, образование морулы и бластоцисты

1.2.6. Регуляция эмбриональной диапаузы
1.2.7. Эмбрион в лиапаузс и активация развития
1.2.8. Имплантация и планенташя
1.3.Применение методов экспериментальной эмбриологии
к куницеобразным
1.3.1. Получение фертильной спермы и ее криоконсервация
1.3.2. Гормональная стимуляции оогенеза i viv и суперовуляция
1.3.3. Гормональная стимуляция оогенеза i vi
щ 1.3.4. Искусственное осеменение и оплодотворение i vi
1.3.5. Культивирование эмбрионов i vi
1.3.6. Культивирование эмбрионов i viv
1 3.7 Трансплантация эмбрионов
1.3.8. Криоконсервация эмбрионов
1.3.9. Выделение эмбриональных стволовых клеток, получение трансгенных
и химерных животных
Заключение
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Животные
2.2. Получение эмбрионов
2.3. Манипуляции с эмбрионами
2.4. Криоконсерваиия эмбрионов
2.5. Прижизненная микроскопия и фотография
2.6. Фиксация и заключение в смолу.
2.7. Получение и окраска полутонких срезов
2.8. Подготовка суховоздушных препаратов и АеКЖокраска
2.9. Подготовка и анализ тотальных препаратов
2 Морфометрия
2 Линии эмбриональных стволовых клеток
21. Культивирование клеток в монослое
22. Получение химерных эмбриоидных телец и химерных клеточных пластов
23. Фиксация клеточного материала и окраска на аспродукт
Глава 3. Результаты исследований и обсуждение результатов
3.1. Оплодотворение и образование зиготы у американской норки
3.1.1. Морфология ооцнтов и зигот норки
3.1.2. Образование и миграция пронуклеусов
3.1.3. Особенности стадии зиготы у норки
3.2. Визуализация пронуклеусов у американской норки
3.2.1. Эффект центрифугирования
3.2.2. Совместное действие центрифугирования и химической обработки
3.2.3. Жизнеспособность зигот i vi и i viv
3.3. Дробление
3.3.1. Прижизненные наблюдения дробления, компактизаиии и кавитации
3.3.2. Ультраструктурные изменения в дробящихся эмбрионах
3.3.3. Морфофункциональные изменения ядрышек в дробящихся эмбрионах
3.3.4. Проядрышки
3.4. Бластоцистогенез и подготовка к имплантации
3 .4.1. Рост бластоцисты
3.4.2. Преобразования внутренней клеточной массы
3.4.3. Преобразования трофобласта
3.5. Эмбриональная смертность на стадиях, предшествующих имплантации
3.6. Влияние криопротекторов на морфологию бластоцнст
хоря степного суептапп
3.6.1. Нативные бластоцисты хорька
3.6.2. Влияние криопротекторов на субклеточную морфологию бластоцист
3.6.3. Анализ ультраструктурних изменений, вызванных криоконсервацией
3.6.4. Динамика липидных включений в эмбриогенезе куницеобразных
3.7. ДнЬЬсренцировка эмбрнондных телец норки в разных вариантах
сокультивирования эмбриональных стволовых клеток
3.7.1. Проблема получения химер у американской норки
3.7.2. Особенности Ьоомиоования эмбоиоидных телец норки
3.7.3. Взаимодействия стволовых клеток норки в гетеротипических
эмбриоидных тельцах пластах
3.7.4. Взаимодействия стволовых клеток норки в гомотипических
эмбриоидных тельцах и пластах
3.7.5. Анализ взаимодействий и адекватность новой экспериментальной модели
Выводы
Благодарности
Литература


В этом случае эффект укорочения эмбриональной диапаузы, вызванный действием пролактина, отменяется. Предполагается, что мелатонин тоже может влиять на продолжительность диапаузы, поскольку он превентивно действует на секрецию пролакгина . Дополнительным доказательством важности пролактина у американской норки можно считать присутствие рецепторов к этому гормону в яичниках и в матке . Число рецепторов уменьшается во время активации бластоцисты. Вероятно, это происходит изза связывания рецепторов с эндогенным пролактином . И, наконец, прямое участие пролактина в окончании диапаузы доказано при культивировании i vi бластоцист американской норки. При всех действующих концентрациях от 1 мгмл до 5 мгмл пролактин вызывает активацию бластоцист дневного возраста. Даже при самой высокой концентрации не происходит активации и прикрепления к субстрату бластоцист 78 дневного возраста, т е. v . Как полагают, диапауза у американской норки начинается с перехода эмбрионов из яйцеводов в матку на 68 . vi . Момент вхождения бластоцисты в диапаузу и морфологические изменения, сопутствующие этому процессу, подробно не изучались. Чанг использовал прямую трансплантацию бластоцист хорька фуро в матку американской норки и обратную трансплантацию при экспериментальной задержке имплантации у хорька. В первом случае наблюдалась индукция, а во втором задержка имплантации. По совокупности этих результатов было сделано заключение, что продолжительность и окончание диапаузы у норки находится под контролем скорее матки, чем бластоцисты . Выход бластоцисты из дианаузы изучен на пятнистом скунсе i . На основе этих данных все развитие от кавитации до имплантации у куницеобразных предлагается разделить на три стадии эмбриональная диапауза начало активации ivi собственно активация развития ivi i . Выделенные стадии различаются как морфологически, так и метаболически. Стадия, на которой имеет место диапауза всегда бластоциста v Баевский , . Рост и развитие бластоцисты во время эмбриональной диапаузы, всего вероятнее, активно ингибируется, а не является следствием уменьшения энергетических резервов эмбриона . Гликоген и содержимое липидных капель основной энергетический ресурс для биохимических событий активации . Обмен метаболитами между бластоцистой и организмом матери осуществляется через . Рецепция сигналов осущсствляегся многочисленными микроворсинками на поверхности трофобласта i . ВКМ , . Во время диапаузы подавляется митотическая активность клеток эмбриона. В диапаузирующих бластоцистах американской норки изредка наблюдаются делящиеся клетки. Предположено, что это либо замершие митозы в трофобласте Баевский , либо митозы в клетках ВКМ Исакова и Жоголева . Выделение первичной эндодермы свидетельствует об окончании стадии собственно эмбриональной диапаузы и вступлении бластоцисты в стадию активации i . . Однако, актуальным оставался вопрос о молекулярных механизмах, посредующих вышеназванные изменения. В раннем эмбриогенезе и в процессе имплантации у грызунов важную роль играют факторы роста семейство. Сюда входят собственно эндодермальный фактор роста , гепаринсвязывающий подобный белок, и амфирегулин, а также клеточный рецептор i . Последний представляет собой гликопротеин весом 0 кДа, локализованный на поверхности клеток многих органов и тканей, включая матку и предимплантационные эмбрионы многих видов млекопитающих i . , . Искусственная задержка имплантации у грызунов приводит к резкому снижению экспрессии в бластоцисте. Введение эстрогена, напротив, быстро восстанавливает экспрессию , приводя к активации бластоцисты и к имплантации i . Используя эти данные, был предпринят анализ в тканях матки и в бластоцистах пятнистого скунса, находящихся в диапаузе. .