Влияние трансплантации мезенхимных стволовых клеток на течение экспериментального инсульта у крыс

• Автор: Павличенко, Наталья Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 180 с. : ил.

1.1. Ранние изменения при ишемии головного мозга

1.2. Воспаление и глиальная реакция

1.2.1. Воспаление

1.2.2. Глиальная реакция

1.3. Реорганизация ткани после ишемического инсульта.

Ограниченная репарация в головном мозге.

1.4. Зона ишемической полутени

1.5. Современные методы лечения инсульта

1.5.1 Улучшение перфузии

1.5.2 Нейропротскция

1.5.3. Клеточная терапия инсульта 1.5.4 Мезенхимные стволовые клетки как агент клетошюй терапии
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Эксперименты i vi 2.1.1 Выделение и культивирование мезенхимных
стволовых клеток из стромы костного мозга крыс
2.1.2. Фенотнпирование мезенхимных стволовых клеток крыс
2.1.3. Дифференцировка i vi в ортодоксальных направлениях
2.1.4. Дифференцировка i vi в нейрональном направлении
2.1.5. Окрашивание мезенхимных стволовых клеток крыс флуорохромом РКН
2.2. Эксперименты i viv
2.2.1. Введение МСК в мозг интактным животным
2.2.2. Моделирование экспериментального ишемического инсульта головного мозга
2.2.3. Введение МСК животным с экспериментальным инсультом
2.2.4. Фиксация тканей головного мозга
2.2.5. Выявление флуоресцентно меченых МСК
в тканях головного мозга
2.2.6. Морфологический анализ тканей головного мозга
2.2.7. Иммуногистохимическое окрашивание
срезов головного мозга
2.2.8. Морфометрическая оценка объема дефект головного мозга и количества сосудов в
поврежденном и неповрежденном полушарии
2.2.9. Поведенческое тестирование животных в водном
лабиринте Морриса
Глава 3. Результаты исследований
3.1. Характеристики МСК крысы i vi
3.1.1. Фенотипированис МСК
3.1.2. Дифференцировка МСК в ортодоксальных
направлениях i vi
3.1.3. Дифференцировка в нейрональном направлении i vi
3.1.4. Окрашивание клеток флуорохромом РКН
3.2. Характеристика головного мозга после локального
введения МСК в мозг интактных крыс
3.3. Морфологическая характеристика головного
мозга крысы после экспериментального ишемического инсульта
3.3.1. Распределение меченых флуорохромом РКН клеток в ткани мозга
3.3.2. Характеристика структуры головного мозга ложнооперированных животных
3.3.3. Характеристика структуры головного мозга после окклюзии средней мозговой артерии группа контроля
3.3.4. Характеристика структуры головного мозга после окклюзии средней мозговой артерии группа клеточной терапии
3.3.5. Морфометрическое исследование головного мозга
3.3.6. Поведенческое тестирование животных Глава 4. Обсуждение полученных результатов ВЫВОДЫ
СПИСОК РАБОТ, ОБУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
4
Список использованных


Считается, что он выделяется постсинаптическим окончанием и действует на пресинаптическое, опосредуя выброс глюгамата. Помимо этого участия в развитии глютаматной токсичности, 0 является свободным радикалом, который может напрямую повреждать ДНК, что запускает механизм клеточной гибели. Существует мнение, что только 0, синтезированный индуцибельной Жсинтазой наносит клеткам повреждения, в то время как 0 произведенный эндотелиальной и нейрональной синтазой участвует преимущественно в передаче сигналов 3. Повышение концентрации ионов кальция, которые являются универсальным вторичным посредником многих клеточных процессов, приводит к целому ряду других негативных последствий при ишемии. Повышение внутриклеточной концентрации калия и натрия приводит к отеку поврежденных клеток, поскольку в них в силу разницы осмотического давления проникает вода. Отек распространяется на соседние с повреждением области и может нарушать кровоток и приводить к повышению внутричерепного давления и сдавливанию сосудов. Протеолитические ферменты разрушают белки цитоскелета например, актин и спекгрин и белки внеклеточного матрикса ВКМ 8. Активированные ионами кальция фосфолипаза А2 и циклооксигеназа участвуют в производстве свободных радикалов, повреждающих клеточные мембраны за счет окисления липидов. С одним из свободных радикалов, супероксианионом, реагирует вырабатывающийся в ишемизированных тканях оксид азота, образуя весьма активное соединение пероксинитрит, сильно повреждающий клетки. Свободные радикалы повреждают внутреннюю мембрану митохондрий и окисляют белки, ответственные за транспорт электронов, выход ионов водорода и продукцию АТФ. Повышается проницаемость мембраны, митохондрии увеличиваются в размерах набухают, прекращается синтез АТФ и происходит кислородный взрыв перепродукция свободных радикалов. Из митохондрий высвобождается цитохром Ц, запускающий процессы апоптоза 3. Морфологически у крыс эти изменения проявляются в том, что нейроны поврежденного участка головного мозга сжимаются, приобретают полигональную форму, становятся эозинофильными. У таких клеток отмечаются пикнотические ядра. Нейропиль окрашивается бледнее, в нем наблюдаются области периваскулярного отека. Поврежденный участок четко еще не определен 7, 6. На следующем этапе развития повреждения в пострадавшей нервной ткани развивается коагуляционный некроз. Обозначается граница между поврежденной зоной и окружающей тканью. В некротизированной ткани наблюдаются разрушающиеся клетки на разных стадиях цитолизиса клсткитсни. Наблюдается инфильтрация нейтрофилами и макрофагами в частности, в пограничной зоне 6. Массовая гибель ткани вызывает развитие асептического воспаления. Воспаление можно назвать вторичным механизмом повреждения ишемизированного участка мозга. Это гораздо более длительный процесс, чем вышеописанные ранние изменения на молекулярном уровне. Гипоксия, вызывая повышение концентрации универсального вторичного посредника кальция и стимулируя выработку свободных радикалов, активирует в клетках головного мозга ряд транскрипционных факторов, таких как , xiii 1 I, i 1, белки семейства i iv ii. Активируется экспрессия генов фактора некроза опухолей , интерлейкинов I, I6 и I8, МСР1 i, молекул клеточной адгезии ТСАМ1 i i , 1 i i 1, i и фактора активации тромбоцитов ivi ЮЗ, 2. Известно, что участвует в выработке индуцибельной синтазы и циклооксигеназы2 СОХ2 медиаторов воспаления. Иптерлейкин8 и i 1 стимулируют миграцию клеток воспаления в поврежденный участок. Также на начальных стадиях воспаления экспрессируются гены нейротрофических факторов и медиаторов клеточной гибели. На нескольких моделях ишемического инсульта было показано, что в течение первых часов после повреждения экспрессируются iiv i , v и i i 0. Из всех вышеперечисленных веществ одними из самых важных, ключевых медиаторов воспаления, которые вырабатывают клетки головного мозга в ответ на ишемию, считаются и 3 7, 1, 0, . Одним из ключевых медиаторов воспаления, в больших количествах вырабатываемых поврежденными нервными клетками, является .