Анализ клеток с микроядрами в оценке пролиферации эпителия щитовидной железы

• Автор: Гансбургский, Михаил Андреевич
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 77 с. : 23 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
I. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО МЕТОДА АНАЛИЗА МИКРОЯДЕР

обзор литературы

1.1. Механизмы образования и свойства микроядер

1.2. Микроядерный тест в обновляющихся клеточных популяциях

1.3. Микроядерный тест в растущих клеточных популяциях

1.4. Механизмы повреждения клеток при действии метилнитрозомочевины.

II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

III. АНАЛИЗ КЛЕТОК С МИКРОЯДРАМИ

В ОЦЕНКЕ ПРОЛИФЕРАЦИИ ЭПИТЕЛИЯ

ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
III. 1. Пролиферативная активность тиреоидной паренхимы
III. 1.1. Регенерация после гемитироидэктомии
III. 1.2. Патологические митозы при введении мутагена
1.2. Морфологическая и морфометрическая
характеристика микроядер в фолликулярных тироцитах.
Ш.З. Плоидность тиреоидной паренхимы
1.4. Количественный анализ частоты образования клеток с микроядрами в щитовидной железе при введении
. метилнитрозомочевины.
1.4.1. Однократное введение мутагена.
Ш.4.2. Повторное введение мутагена.
1.5. Продолжительность существования микронуклеированных тироцитов в популяции.
IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
V. ВЫВОДЫ
VI. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
VII. ЛИ1ЕРАТУРА
Сокращения и условные обозначения
ЩЖ щитовидная железа
ККМ красный костный мозг
ПХЭб полихроматофильный эритробласт
ПХЭ полихроматофильный эритроцит
метилнитрозомочевина i
IVI микроядро
МИ митотический индекс р уровень доверительной вероятности X средняя арифметическая
x статистическая ошибка средней арифметической г коэффициент корреляции Пирсона
ВВЕДЕНИЕ


Не мснсс перспективной и практически неизученной клеточной тестсистемой является фолликулярный эпителий щитовидной железы ЩЖ многие техногенные факторы мутагены, радионуклиды и др. Эго особенно актуально для Ярославской области, относящейся к эндемичным районам по дефициту йода, а также как промышленной территории с интенсивными техногенными нагрузками и, как следствие этого, наблюдаемым выраженным ростом патологии ЩЖ 1,. Однако информация о возможности использования тироцитов в качестве клеточной системы для проведения микроядерного теста в опытах i viv в литературе отсутствует. Цель исследования морфологический, морфометрический и цитофотометрический анализ клеток с микроядрами в популяции фолликулярных тироцитов и проведение на этой основе оценки информативности микроядерного теста для биоиндикации генотоксического эффекта химического мутагена метилнитрозомочевины на тиреоидный эпителий в опытах i viv. Отработка методических основ выполнения микроядерного теста на тирсоидном эпителии разработка стандартного метода получения клеточной суспензии, выбор модели стимуляции митотической активности тироцитов и изучение ее пролиферативных свойств. Морфологическое, морфометрическое и цитофотометрическое содержание ДНК изучение микронуклеированных тироцитов, индуцированных введением метилнитрозомочевины. Проведение сравнительного анализа чувствительности микроядерного теста, выполненного на фолликулярных тироцитах и полихроматофильных эритробластах красного костного мозга при однократном введении различных доз мутагена. Изучение динамики накопления тироцитов с микроядрами при различных режимах дозы, число инъекций повторного введения мутагена. Изучение продолжительности существования образовавшихся микронуклеированных клеток в паренхиме щитовидной железы. Научная и о в i а Впервые в рамках целостного исследования на экспериментальной модели предварительно стимулированных к размножению фолликулярных тироцитов в опытах i viv продемонстрирован и проанализирован дозазависимын эффект интенсивности образования клеток с микроядрами в широком диапазоне режимов мутагенного воздействия на железистую паренхиму. Показано, что микроядерный тест при использовании в качестве тестсистемы фолликулярных тироцитов по чувствительности сопоставим с таковым на эритроидных клетках костного мозга, однако, по сравнению с последним, позволяет регистрировать действие мутагена в более широком диапазоне доз. На основании цитофотомстрического анализа аберрантных клеток впервые установлено, что в основе образования мутагепиндуцированных тироцитов лежат механизмы ацитокинстического полиплопдизирующего митоза. Впервые исследована динамика содержания в популяции аберрантных клеток в разные сроки после мутагенного воздействия и на основании этого рассчитана максимальная продолжительность существования микронуклеированных тироцитов в тиреоидной паренхиме. Микроядерный тест на модели предварительно стимулированных к размножению фолликулярных тироцитов в опытах i viv является информативным методом оценки интенсивности влияния генотоксичных агентов на паренхиму щитовидной железы, позволяющим выявлять кумулятивный эффект субпороговых доз мутагена. В основе образования микронуклеированных тироцитов, вызванного введением метилнитрозомочевины, лежат механизмы ацитокинстического полиплопдизирующего митоза. Полученные результаты конкретизируют механизмы и условия формирования тироцитов с микроядрами, как чувствительного морфологического маркера генотоксических повреждений железистого эпителия щитовидной железы и, тем самым, расширяют теоретические представления о диапазоне адаптивных реакций данной клеточной линии. Они могут служить экспериментальным обоснованием использования микроядерного теста для экологического мониторинга влияния антропогенных факторов на тиреоидную паренхиму, изучения возможного мутагенною и антимутагенного действия лекарственных препаратов, избирательно влияющих на функцию щитовидной железы, а также как одного из возможных морфологических критериев оценки риска развития, раннего выявления и дифференциальной диагностики поражений ЩЖ человека.