Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека

• Автор: Абрамова, Таисия Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.25, 14.00.16
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 123 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о механизмах развития хронического гломерулонефрита у человека.

1.2 Роль нейтрофилов в развитии гломерулонефритов

1.2.1. Роль медиаторов воспаления в модуляции функций иейтрофильных гранулоцитов при гломерулонефрите

1.2.2. Рецепторы иейтрофильных гранулоцитов при гломерулонефрите.

1.2.3. Элиминация иммунных комплексов из почечной ткани нейтрофильными гранулоцитами.

1.2.4. Деструктивная роль иейтрофильных гранулоцитов в

почечной ткани при гломерулонефрите

1.2.4.1 Окислительные механизмы поражения почечной ткани.
1.2.4.2. Неокислительные механизмы поражения почечной ткани 3
1.2.5. Динамика инфильтрации почки нейтрофильными
гранулоцитами при гломерулонефрите.
1.3. Методы лечения гломерулонефрита, основанные на представлении об активном участии иейтрофильных
гранулоцитов в патогенезе заболевания
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Условия получения образцов крови и почечной ткани у
больных хроническим гломерулонефритом
2.2. Иммунофлюоресцентные методы исследования почечного биоптата.
2.3. Иммунохимические методы исследования сыворотки крови
2.3.1. Определение уровня комплемента в сыворотке крови гемолитическим методом титрования по гемолизу
2.3.2. Определение содержания иммуноглобулинов в
сыворотке крови.
2.3.3. Определение циркулирующих иммунных комплексов в
сыворотке крови методом осаждения полиэтиленгликолем
2.4. Субпопуляционная характеристика мононуклеаров периферической крови
2.4.1. Выделение фракции мононуклеаров периферической
крови в градиенте плотности фиколлверографин.
2.4.2. Определение субпопуляции Тлимфоцитов в периферической крови методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана ЕРОК.
2.4.3. Определение субпопуляций Тлимфоцитов с рецепторами
к Есфрагментам иммуноглобулинов 7,1М Тр, Ту
2.4.4. Определение содержания Влимфоцитов ЕАСРОК в
периферической крови
2.5. Изучение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов
2.5.1. Лизосомальнокатионный тест
2.5.2. Субпопуляционная характеристика нейтрофильных гранулоцитов периферической крови.
2.5.2.1.Выделение суспензии лейкоцитов из периферической крови
2.5.2.2. Определение уровня экспрессии рецепторов к СЗЬкомпоненту комплемента на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови.
2.5.2.3. Определение нейтрофильных гранулоцитов с рецепторами к эритроцитам барана Ерецептор
и к Есфрагменту 7 Есурецептор
2.6 Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1.Показатели лизосомальнокатионного теста нейтрофильных гранулоцитов и уровень экспрессии Е, СЗЬ и Бсурецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных хроническим гломерулонефритом и у
здоровых доноров
3.2. Корреляционная взаимосвязь активности нейтрофильных гранулоцитов и уровня иммунохимических показателей сыворотки крови и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у больных с изученными формами хронического
гломерулонефрита
3.3 Корреляции уровня функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека с показателями функционального
состояния почек и биохимического состава крови
3.3.1 Корреляции количества и степени функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у пациентов с хроническим гломерулонефритом с уровнем протеинурии, лейкоцитурии и эритроцитурии.
3.3.2. Корреляционные зависимости показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, скорости клубочковой фильтрации и уровнем суточной протеинурии.
3.3.3. Корреляции функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови с определенными изменениями биохимических показателей сыворотки крови у больных с МПГН1 типа, Анефропатией и МезПГН
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ГБМ гломерулярная базальная мембрана
ГКСФ гранулоцитарный колониестимулирующий фактор
ГМКСФ гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий
ГН гломерулонефрит
РК иммунный комплекс
РЛ интерлейкин
КБ катионные белки и пептиды
ЛКТ лизосомальнокатионный тест
МАПК митогенактивированный протеинкиназный путь
МезПГН мезангиопролиферативным гломерулонефрит
мРНК матричная рибонуклеиновая кислота
МПГН 1 типа мембранопролиферативный мезангиокапиллярный ГН I
НТН нефротоксический нефрит
ОБС общий белок сыворотки
РЧТМ рекомбинантный человеческий тромбомодулин
СКФ скорость клубочковой фильтрации
СПБ суточная потеря белка
СЦК средний цитохимический коэффициент
ФИ фагоцитарный индекс
ФНОа фактор некроза опухолиа
ФНОр фактор некроза опухолир
ФЧ фагоцитарное число
ХГИ хронический гломерулонефрит
ЦИК циркулирующие иммунные комплексы
СЗЬ рецептор к СЗЬкомпоненту комплемента
СЗ, С4, компоненты комплемента
кластер диффернцировки от англ. ii
СН гемолитическая единица комплемента
Сг креатинин
3 Мас1 2, 1 , рецептор для комплемента 3 типа рецептор
I1 межклеточная молекула адгезии 1 от англ. i i
I, I, I иммуноглобулины классов , и
1 от англ. i i i i
I2 макрофагальный воспалительный протеин
кВ ядерный фактор кВ
р МАПК р митогенактивированный протеинкиназный путь г коэффициент линейной корреляции Пирсона
коэффициент нспараметрической корреляции Спирмена
Тр, Ту мононуклеары, несущие на своей мембране рецепторы к
фрагментам иммуноглобулинов М или
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Известно, что нейтрофильные гранулоциты участвуют в развитии патофизиологических процессов при многих заболеваниях, высвобождая комплекс различных агентов, нарушающих нормальную деятельность клеток и разрушающих соединительную ткань Маянский , Маянский Д. Н., . Не является исключением и ХГН . Так как нейтрофилы являются первыми эффекторными клетками, поступающими в очаг воспаления, изучение их функциональной активности при развитии и прогрессировании пролиферативных форм ГН является актуальной задачей. Перемещение нейтрофильных гранулоцитов из кровеносных сосудов в ткань почки важный фактор развития многих почечных заболеваний . Однако большинство исследований, подтверждающих активное участие нейтрофильных гранулоцитов в поражении почечной ткани, выполнено на экспериментальных моделях нефрита, патогенез которых значительно отличается от патогенеза первичных ХГН у человека. В этих исследованиях обнаружено, что динамика развития клиникоморфологического синдрома связана с количеством и активностью нейтрофильных гранулоцитов, инфильтрирующих почечную ткань i . X . Полученные на экспериментальных моделях данные свидетельствуют о том, что нейтрофилы привлекаются в почечную ткань иммунными комплексами и различными медиаторами воспаления i М. Активную роль при поступлении нейтрофилов в ткань играют различные адгезионные молекулы, экспрессирующиеся как на нейтрофильных гранулоцитах так и на эндотелии капилляров почечного клубочка ii . В настоящей работе проведено исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови пациентов, страдающих ХГН, а именно Iнефропатией, мезангиальнопролиферативным гломерулонефритом МезПГН и с мембранознопролиферативным гломерулонсфритом 1 типа МПГН 1 типа. Исследованы изменения уровня экспрессии рецепторов к СЗЬкомпоненту комплемента на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с ХГН, что позволило установить связь изменений данного показателя с изменением функций почек у пациентов с исследованными морфологическими формами пролиферативных ГН. Известно, что рецепторы нейтрофильных гранулоцитов к СЗЬкомпоненту комплемента Мас1 функционально связаны с экспрессируемыми на мембране этих же клеток рецепторами Т. При использовании экспериментальной модели ГН установлено, что продукция активных форм кислорода нейтрофильными гранулоцитами инициируется через активацию рецепторов i . Исследования изменения уровня экспрессии рецепторов на мембране нейтрофилов периферической крови при ХГН у человека не проводились. Попадая в почечную ткань и принимая участие в реализации защитных функций i . V., , или участия неокислительных механизмов . I. . Кокряков В. Н., . В то же время, КБ увеличивают проницаемость стенки кровеносных сосудов . I. . Использованный в работе лизосомальнокагионный тест ЛКТ, позволил определить уровень содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови пациентов, который характеризует функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов. Поскольку повреждающая роль нейтрофильных гранулоцитов при ХГН не подвергается сомнению, актуальной задачей является поиск способов снижения их негативного влияния на инфильтрируемую почечную ткань . Поэтому информационно значимым представляется проведение корреляционного анализа показателей функциональной активности клеток нейтрофильногранулоцитарного звена периферической крови при пролиферативных формах хронического гломерулонсфрита у людей с другими широко используемыми иммунологическими показателями и клиниколабораторными данными, характеризующими функциональное состояние почек, полученными при обследовании госпитализированных пациентов. До настоящего времени подобные сведения в литературе отсутствуют. Таким образом, изучение функциональной активности нейтрофилов при различных морфологических формах ХГИ у человека с одной стороны позволяет расширить существующие представления о патофизиологических механизмах развития этих заболеваний, а с другой может иметь научнопрактическое значение, позволяя определять тактику лечения больного и прогнозировать динамику развития процесса.