Создание и изучение свойств рекомбинантных белков человека с потенциальным противоопухолевым эффектом

• Автор: Савватеева, Людмила Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Белки теплового шока

1.1. Общая характеристика

1.1.1. Молекулярная структура

1.1.2. Генная регуляция и стимуляция индукции

1.1.3. Шаперопныс функции 1 б

1.2. Иммуномодулирующие функции

1.2.1. Рецепторы белков теплового шока

1.2.2. Активация адаптивного иммунитета
1.2.3. Активация природного иммунитета
1.3. Стратегии создания противоопухолевых вакцин на основе
2. Альфафетопротсин
2.1. Молекулярная структура и основные функции
2.2. Мембранные рецепторы
2.3. Клинический потенциал и его фрагментов
2.3.1. Системы направленного транспорта лекарственных препаратов
на основе
2.3.2. Биологическая активность пептидных фрагментов
2.3.3. как регулятор роста
И. РЕЗУЛЬТАТЫ II ОБСУЖДЕНИЕ
1.1. Клонирование гена в плазмидиых векторах
1.2. Экспрессия рекомбинантного гена и очистка белка
1.3. Исследование функциональной активности 1В
2. Третий домен 3
2.1. Клонирование, экспрессия и выделение рекомбинантного 3
2.2. Исследование функциональной активности 3
2.2.1. Связывание и захват Iмеченного 3 опухолевыми
клетками и лимфоцитами
2.2.2. Ингибирование эстрадиолзависимой пролиферации клеток аденокарциномы молочной железы человека 7 i vi
2.3. Изучение противоопухолевого потенциала 3, конъюгированного с таксолом
2.3.1. Получение конъюгата 3 с таксолом
2.3.2. Исследование цитотоксическон активности конъюгата
3 с Таксолом
3. Заключение
1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Материалы
Методы исследования
ВЫВОДЫ
Список литературы


Эти уникальные иммуностимулирующие свойства НБРб способность интегрировать природный и адаптивный иммунитет позволяют использовать их в качестве адъювантов для разработки иммуиотерапевтических средств. Альтернативным подходом в решении указанной проблемы является поиск и изучение новых универсальных опухолевых маркеров, которые могли бы стать основой для создания чувствительных диагностических исследований и мишенью для разработки новых способов направленной противоопухолевой терапии. Предпочтением для выбора можно считать опухолсспеиифические антигены, которые должны быть белкамирецепторами, избирательно или преимущественно представленными на опухолевых клетках. Известно, что эукариотические клетки путем эндоцнтоза могут захватывать вместе с белковым вектором действующие агенты высокой эффективности и специфичности, в других условиях лишенные возможности проникать в клетку. Мишенью для направленного транспорта могут быть рецепторы онкофетальных белков, а в качестве вектора могут выступать сами онкофстальиые белки. Этот путь направленной доставки предполагает включение механизма рецепторопосрсдованного эндоцнтоза i i, . Создание конъюгатов цитотоксических агентов и различных векторных молекул имеет большие перспективы. С помощью различных кросссшивающих агентов образуются ковалентные связи между молекулами белкового вектора и терапевтически активными агентами, например, цитотоксически ми препаратами, применяемыми в химиотерапии. Использование механизма для доставки в опухолевую клетку конъюгированного цитотокснческого препарата позволяет помимо задачи повышения эффективности цитотокснческого действия решить проблему селективности и преодоления множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Важным элементом поиска векторного агента является подбор таких рецепторных компонентов, которые не экспрессированы на поверхности нормальных соматических клеток, но встречаются значительно чаще на мембранах опухолевых клеток. Наиболее подходящим в этой группе является альфафстопротеин . Физиологическая роль этого белка, главным образом, связана с транспортом жирных кислот и эстрогенов в низкодифференцированные клетки на стадии эмбрионального развития. Уровень экспрессии рецептора в не пролиферирующих клетках очень низок, в то время как на поверхности опухолевых клеток различного происхождения определяется от нескольких сотен до миллиона рецепгоров на клетку. Однако выделение и очистка весьма трудоемкий и дорогостоящий процесс. Более предпочтительным для адресной доставки цитотоксических агентов представляется использование рецепторсвязывающсго фрагмента рекомбинантного третьего домена в качестве белкового вектора. Исходя из этого, целью данной работы явилось создание и изучение потенциала в противоопухолевой терапии рекомбинантного белка теплового шока 1 человека и рекомбинантного третьего домена альфафетопротеина человека 3. 3 с химиопрепаратом, обеспечивающею направленное воздействие на опухолевые клетки, и исследование его эффективности i vi. Научная новизна и практическая значимость работы. Сконструированы плазмидные векторы . 1 и рекомбинантного третьего домена альфафетопротеина человека 3 в клетках соответствующих штаммовпродуцентов. Разработаны высокоэффективные методы выделения исследуемых рекомбинантных белков в препаративном количестве. Исследована биологическая активность рекомбинантного 1, а также показана его способность к связыванию со специфическими рецепторами и активному эндоцитозу дендритными клетками. Продемонстрирована возможность использования рекомбинантного третьего домена альфафетопротеина человека в качестве векторной молекулы для создания противоопухолевых препаратов направленного действия за счет сохранения в 3 функциональной активности полноразмерной молекулы природного альфафетопротеина человека. Синтезирован ковалентный конъюгат рекомбинантного третьего домена альфафетопротеина человека с таксолом, и показана высокоспецифическая цитотоксическая активность конъюгата i vi по отношению к клеткам злокачественной опухоли.