Разработка основ технологии получения панкреатического гидролизата дрожжевой РНК

• Автор: Баурина, Марина Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 168 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

Список принятых в работе сокращений.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Нуклеиновые кислоты и их производные. Метаболизм рибонуклеотидов. Характеристика, способы получения и применение панкреатического гидролизата дрожжевой РНК.

1.2. Панкреатическая рибонуклеази, характеристика, применение и способы выделения.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Реагенты.

2.3. Методы анализа.

2.4. Методы исследования

2.4.1. Методика проведения гидролиза дрожжевой РНК панкреатической рибонуклеазой
2.4.2. Отделение моно и олигорибонуклсотидов от высокомолекулярной фракции дрожжевой РНК ультрафильтрацией
2.4.3. Методика проведения стерилизации раствора панкреатического гидролизата РНК.
2.4.4. Методика проведения опытов по экстракции рибонуклеазы из поджелудочной железы КРС
Глава 3. Основные экспериментальные данные и обсуждение результагов.
3.1. Разработка основ технологии получения панкреатического гидролизата дрожжевой РНК.
3.1.1. Ферментативный гидролиз дрожжевой РНК. Количественные закономерности процесса
3.1.2. Разделение ВМ и НМ фракций продуктов гидролиза ультрафильтрацией. Количественные закономерности процесса.
3.1.3. Осаждение смеси моно и олигорибонуклеотидов из водноспиртовых растворов. Количественные закономерности процесса
3.2. Разработка основ технологии получения панкреатической рибонуклеазы
3.2.1. Исследование количественных закономерностей экстракции рибонуклеазы из поджелудочной железы КРС.
3.2.2. Количественные закономерности стадии ультрафильтрации
3.2.3. Количественные закономерности стадии осаждения рибонуклеазы
3.2.4. Очистка препарата технической рибонуклеазы
Выводы.
Список литературы


На образование одной молекулы пуринового нуклеозидмонофосфата по v пути в организме тратится шесть молекул АТФ, тогда как по селвиджпути только одна молекула АТФ. Наличие механизма реутилизации пуриновых оснований позволяет клетке ограничить синтез v и является необходимым условием для нормального функционирования любой клетки, это четко показано на человеческом организме. Это достигается двумя путями вопервых, реутилизация снижает уровень 5фосфорибозил1пирофосфата ФРПФ и, следовательно, вклад его в образование пуринов вовторых, образовавшиеся в процессе реутилизации пуриновых оснований АМФ и ГМФ осуществляют ингибирование по типу обратной связи. Рассмотрим подробнее регуляцию синтеза пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Путь синтеза пуриновых нуклеотидов v является примером аллостерического ингибирования по принципу обратной связи. ФРПФсинтетаза и ФРПФаминотраисфераза ингибируются АМФ, АДФ, ГМФ и ГДФ. В процессе синтеза v образуется ИМФ, который затем расходуется на образование АМФ и ГМФ. Эта реакция регулируется продуктами по принципу обратной связи. Как положительные, так и отрицательные регуляторные механизмы служат для сбалансированного образования АТФ и ГМФ, поскольку оба нуклеотида требуются для биосинтеза нуклеиновых кислот 3. Упрощенное изображение регуляции биосинтеза пуриновых нуклеотидов представлено на рис. Рис. Упрощенное изображение регуляции пути биосинтеза пуриновых нуклеотидов. Путь биосинтеза пиримидиновых нуклеотидов регулируется двумя различными механизмами. Нужно подчеркнуть, что нуклеотиды как пуриновые так и пиримидиновые участвуют в процессе. Скорость биосинтеза пиримидинов коррелирует со скоростью биосинтеза пуринов, что указывает на координированный контроль синтеза нуклеотидов обоих типов. ФРПФсинтетаза фермент, катализирующий образование предшественника обоих путей биосинтеза, ингибируется по принципу обратной связи как пуриновыми, так и пиримидиновыми нуклеотидами. Карбомоилфосфатсинтаза также подвержена ингибированию но принципу обратной связи нуклеотидами обоих типов, а ФРПФ активирует этот фермент. Таким образом, на нескольких этапах биосинтеза пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов осуществляется перекрестная регуляция 1. Дрожжевая РНК является важным источником получения исходных веществ для синтеза ряда медицинских препаратов нуклеозидов и их аналогов, и сама находит широкое применение в медицине 5. Панкреатический гидролизат РНК, известный под названием Энкад 6, является смесью продуктов ферментативного гидролиза дрожжевой РНК, содержит олигорибонуклеотиды и пиримидиновые нуклеозидЗфосфаты, отечественный препарат, производимый из природного сырья дрожжевой РНК. Панкреатический гидролизаг РНК Энкад был создан группой авторов в конце х годов 7 и начал с успехом применяться для лечения наследственных тапеторетинальных абиотрофий заболеваний, приводящих к слабовидению и слепоте 8,9. Распространенность этих заболеваний достаточно велика и составляет до 5 на человек. Однако до настоящего времени в мире не существует эффективных методов и средств лечения этой группы болезней. В ранних экспериментах отмечали зависимость между синтезом РНК, содержанием РНК и нуклеотидов и функциональной нагрузкой на фоторецепторные клетки сетчатки. Регенерация родопсинсодержащих дисков зависит от уровня синтеза белка в клетке. У животных с наследственным ретинитом падает активность многих ферментов особенно страдает пентозный путь и снижается синтез белка в фоторецепторных клетках. Наследственная дистрофия сетчатки глаза описана у животных разных видов собак, овец, крыс и мышей. Поскольку распад и рссинтез родопсина являются наиболее важными процессами в сетчатке и, вместе с тем, они отражают состояние целого ряда обслуживающих их метаболических систем, особое внимание в работе Института морфологии человека АМН РФ в Москве было уделено исследованию способности сетчатки к восстановлению зрительного пигмента в ранние сроки после ее поражения.