Разработка и испытание сухой живой вакцины против пастереллеза птиц

• Автор: Леонов, Александр Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Оболенск
• Количество страниц: 133 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Род Разеиге 1а общие сведения

2.2. Культуральноморфологические свойства РаБеигеа шиИосба

2.3. Биохимические свойства

2.4. Антигенные свойства

2.5. Специфическая профилактика пастереллсза птиц

2.5.1. Классификация и характеристика вакцинных препаратов

2.6. Мутации у микроорганизмов

2.6.1. Механизмы репарации мутаций у бактерий

2.7. Получение аттенуированных штаммов
2.7.1. Химический мутагенез
2.7.2. Физический мутагенез
2.7.3. Инсерционный мутагенез
2.7.4. Олигонуклеотиднаправленный мутагенез
2.7.4.1. Олигонуклеотиднаправленный мутагенез с использованием ДНК фага М
2.7.4.2 Олигонуклеотиднаправленный мутагенез с использованием плазмидной ДНК
2.7.4.З. Случайный мутагенез с использованием врожденных олигонуклеотидных
праймеров
2.8. Биотехнология и технология производства вакцин
2.8.1. Питательные среды
2.8.2. Подготовка посевного материала и глубинное культивирование
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.2.
3.2.2.
3.2.4.
3.2.6.
3.2.8.
3.2
3.22.
3.24.
4.
Материалы и методы
Результаты исследований
Изучение морфологических, тинкториальных, культуральных и ферментативных
свойств типовых и эпизоотических штаммов
Определение чувствительности полевых штаммов пастерслл к
антибактериальным препаратам
Изучение иммуногенного родства аттенуированного штамма ЭМ 1 со
штаммами сероваров Л и Д
Получение аттенуированного штамма Раз1еигса тиИос1са
Изучение протективных и иммуногенных свойств штамма ЬА и БМ 1
Питательные среды для культивирования вакцинных штаммов
Изучение морфологии и ультраструктуры аттенуированных штаммов М 1 и
ЬА в сравнении с типовыми штаммами 2 и 6
Изучение процесса капсулообразования в зависимости от продолжительности
культивирования культуры
Влияние питательной среды и времени культивирования штаммов ЬА и БМ
1 на количество капсульного антигена и его иммунологические свойства
Технология изготовления и контроль живой вакцины против пастерсллеза
Подготовка посевного материала
Глубинное культивирование
Сушка, отмывка, концентрирование
Оценка безвредности и иммуногенности вакцины
Производственные испытания вакцины
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Целью исследования является получение эффективного вакцинного препарата против пастереллеза птиц, представляющего сухую живую вакцину на основе аттенуированных штаммов Раеигеа шиИоаба ЭМ 1 и ЬА , методов ес контроля и применения, разработка технологии производства. А и Д БМЦ ЬА. Путем индуцированного мутагенеза получен аттенуированный штамм Раз1еиге1 Иос1с ЬА , обладающий протективными свойствами и низкой остаточной вирулентностью. Изучена морфология и ультраструктура пастерслл аттенуированных штаммов БМ 1 и ЬА , в сравнении с типовыми штаммами у птиц. Изучен процесс капсулообразования и динамики накопления капсульного антигена культуры РлшИос11а в зависимости от продолжительности культивирования на питательной среде из непищевого сырья. Показана возможность использования питательной среды на основе гидролизатов из непищевого сырья рыбной муки, казеина, сгустков крови вместо мясных переваров без потери выхода биомассы и сохранением антигенных свойств при культивировании пастерслл. Разработана технология изготовления и контроля Сухой живой вакцины на основе аттенуированных штаммов БМ 1 и ЬА против пастерсллеза птиц. Путем индуцированого мутагенеза, при применении ультрафиолетового облучения, получен аттенуированный штамм ЬА , имеющий генетический маркер, что позволяет дифференцировать его от эпизоотических штаммов пастерслл. Полученный штамм обладает протсктивными свойствами и низкой остаточной вирулентностью и сохраняет свои свойства. Сухая живая вакцина из аттенуированных штаммов БМ 1 и ЬА против пастереллеза птиц обладает низкой остаточной рсактогенностыо и формирует специфический иммунитет. При культивировании в жидкой питательной среде на основе гидролизатов из непищевого сырья, клетки пастсрслл, на примере штамма ЬА , в фазе замедления скорости роста и в начале стационарной фазы, обладают более выраженным капсулообразованием, в отличие от других фаз роста. Получен аттенуированный вакцинный штамм Р. ЬА , который можно рекомендовать для изготовления биопрепарата Сухой живой вакцины на основе аттенуированных штаммов БМ 1 и ЬА против пастереллеза птиц. Разработана технология изготовления, контроля и применения препарата Сухой живой вакцины на основе аттенуированных штаммов БМ 1 и ЬА против пастереллеза птиц. Получены положительные результаты испытания вакцинного препарата, как на лабораторных, так и на естественно восприимчивых животных. Испытан в производственных условиях препарат Сухая живая вакцина на основе аттенуированных штаммов БМ 1 и ЬА против пастереллеза птиц. Данный препарат отличается низкой остаточной вирулентностью и высокой иммуногенностыо, что дает возможность его широкого применения в ветеринарной практике. Применение питательной среды из смеси гидролизатов позволяет снизить себестоимость вакцинных препаратов, по сравнению с себестоимостью биопрепаратов полученных с применением сред из мясных переваров. Пастсрсллез, вызываемый бактериями вида i i, высококонтагиозное заболевание многих видов сельскохозяйственных животных, с высокой летальностью и тенденцией к стационарности. Пастереллез регистрируется повсеместно . . i . В.К. . . . i . .. . . Vi . .. . Возбудители пастсреллеза поражают крупный рогатый скот, овец, свиней, буйволов, лошадей, домашнюю и дикую птицу, собак, грызунов, пушных зверей и др. А. Н. Борисенкова, , , Н. П. Чистов и др. .. , , , . . . . . .. i . Бактериологическими исследованиями установлено широкое носителъство пастерелл. По данным Е. И. Буткина , Е. М. Кожевникова , культуры Р. Многие авторы отмечают, что данные микроорганизмы нередко являются обитателями респираторного тракта клинически здоровых животных В. И. Павлов, , . . Масимов, , . ., , . . i . .. . . i . . . Процент выделения . Ш.К. Курбанов, . i . . ,выделил . На основании своих данных и анализа литературы, опубликованной до г. Имеются также данные об изоляции пастерелл в 6 случаев из макроскопически неизмененных легких, в из миндалин здоровых свиней и в при наличии воспалительных процессов в легких Р. В. Душук, .