Разработка и испытание метода иммуноферментного анализа для диагностики лейкоза крупного рогатого скота

• Автор: Иванова, Людмила Александровна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 185 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. . Введение.

Терминология и сокращения.

2. Обзор литературы

2.1. Классификация ретровирусов

2.2. Клиническая картина и стадии развития лейкозного

процесса у крупного рогатого скота

2.3. Спектр хозяев и пути передачи ВЛ КРС.

2.4. Геном и особенности репликации ВЛКРС

2.5. Морфология, строение, био и физикохимические

свойства ВЛКРС

2.6. Методы диагностики
2.7. Методы выявления антител к ВЛКРС
2.8 Иммуноферментный анализ.
2.9. Заключение к обзору литературы
3. Собственные исследования
3.1. Материал и методы исследования .
3.2. Резуль таты исследования
3.2.1. Этапы разработки иммуноферментного анализа для выявления
антител к ВЛКРС.
Изготовление антигена ВЛКРС для непрямого
иммуноферментного анализа.
Характеристика антигена ВЛКРС, полученного с использованием поддерживающих бессьгаороточных сред
Оптимизация условий проведения анализа.
Определение оптимальных концентраций компонентов
тестсистемы
Определение оптимального разведения испытуемого
материала
Контроля ИФА.
Учет результатов реакции
3.2.2. Испытания иммуноферментного метода выявления антител
к ВЛКРС
Выявление антител к ВЛКРС в молоке инфицированных
Исследование сьвороток крови молодняка.
Развитие гуморального иммунного ответа при экспериментальной инфекции, вызванной ВЛКРС
Выявление инфицированных ВЛКРС коров в хозяйствах
с низкой превалентностью инфекции.
Применение иммуноферментной тестсистемы для выявления антител в сыворотке крови кроликов, иммунизированных
рекомбинантными штаммами вируса осповакцины
Развитие гуморального иммунного ответа на вакцинацию рекомбинантной вакциной и контрольное заражение овец вирусом лейкоза крупного рогатого скота.
4. Обсуждение результатов. .
5. Выводы.
6. Список литературы
7. Приложение
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Как правило, в этих жидкостях лимфоциты отсутствуют или их содержание невелико и для передачи вируса требуется длительный период тесного контакта между животными. Поэтому этот путь распространения инфекции считают второстепенным 4, , , 7, 4. Таким образом, значительная часть потомков инфицированных ВЛКРС матерей рождается неинфицированной и может быть использована для создания свободной от ВЛКРС популяции крупного рогатого скота9. Наличие инфекционого вируса в молоке и молозиве инфицированных коров доказано заражением овец при парентеральном введении этих секретов , 6, 7, 4. Вируснейтрализующие антитела, содержащиеся в молозиве в высоком титре, создают у теленка пассивный гуморальный иммунитет к заражению ВЛ КРС в течение 36 мес , 5, 4, 0. В цельном молоке содержание антител значительно меньше, чем в молозиве, поэтому оно в большей степени, чем молозиво, представляет опасность как источник инфицирования 8. Заражение через молоко происходит в 68 случаев0. Возможен перенос ВЛКРС кровососущими насекомыми , 8,4. Одним из важнейших факторов передачи является ятрогенный, прямо связанный с частотой ветеринарной обработки без соблюдения правил асептики и антисептики. Использование автоматических щрицев и одних и тех же инъекционных игл, шипцов для фиксации и инструментов для мечения для нескольких животных способствуют распространению ВЛ КРС 8. Б РНК с молеку лярной массой 2, х б В, нековалентно связанных друг с другом вблизи 5 концов и упакованных вместе с несколькими молекулами обратной транскриптззы внутри нуклеоида 3,9,,0, , 8,9,2. Длина каждой из цепей РНК ВЛ КРС составляет 8,8 кв 9,9 и соответствует длине провирусной ДНК, составляющей около 9 кв , 4. Геном ВЛКРС состоит из пар нуклеотидов и имеет еле ЬТР ХВЬ3ЬТИ, где ЬТИ длинный концевой повтор 4. В длинных концевых повторах содержатся регуляторные последовательности транскрипции и трансляции. Ген а находится в первой открытой рамке считывания. Он кодирует белокпредшественник полипротеинов Ш2р1БррС0ОН или Рг Третью рамку составляет ген епу , кодирующий белокпредшественник гликопротеидов ВЛКРС Между терминирующим кодоном гена ет и началом ЗЬТК расположен участок рХ, кодирующий белок р, важный для активации по трансмеханизму промотора ВЛКРС, локализованного в I. 9, фосфопротеид р, необходимый для эффективного накопления цельногеномных транскриптов ВЛКРС, а также мРНК, несущих информацию для синтеза епубелков4, 9. РНК освобождается и транскрибируется в двухцепочечную ДНКкопию, которая встраивается как провирус в ДНК клеткихозяина. Интеграция необходима для репликации вируса. С интегрированного провируса транскрибируется как вирусная РНКкопия, так и мРНК, которая транслируется в белки. Затем происходит сборка новых вирионов, которые отпочковываются от клеточной мембраны для инфицирования новых клеток 0. Эффективная транскрипция и репликация генома ВЛ КРС требует как вирусных длинных концевых повторов,так и активатора транскрипции x. Однако, главную роль в экспрессии ВЛ КРС играют факторы транскрипции клеткихозяина. Для осуществления цикла репликации ВЛКРС требуются два ядерных регуляторных белка трансактиватор управляемой экспрессии генов и активатор поздних структурных видов мРНК тем самым цикл репликации разделяется на раннюю и позднюю фазы. В отличие от ретровирусов, для репликации которых требуются только гены , и v и названных вследствие этого простыми, ВЛКРС и подобные ему вирусы получили название сложных. Кроме того, в простых ретровирусах нуклеокапсид связан с поверхностным гликэлротевдом через трансмембранный белок рЕ, тогда как у сложных ретровирусов отсутствует эта связь между нуклеокапсидом и двумя наружными гликопротевдами 8. На ранних стадиях инфекции происходит раскодирование регуляторных вирусных белков, не включающихся в состав вириона. Трансактивирующий белок x участвует в процессе опухолеобразования. Трансактиваторы транскрипции, такие как x, действуют на гены, расположенные на расстоянии от их собственной локализации в провирусе.