Идентификация B вируса хризантем и создание коллекции in vitro оздоровленного посадочного материала

• Автор: Гранда Харамильо Роберто Карлос
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 105 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Промышленное Цветоводство

1.1.1 Хризантема

1.2. Размножение декоративноцветочных культур в условиях i vi

1.3. Культивирование хризантем в условиях i vi

1.4. Оздоровление посадочного материала от вирусов

1.5. Карлавирусы

1.5.1. Морфология и физикохимические свойства вирусных частиц

1.5.2. Симптоматика и круг хозяев
1.5.3. Цитопатология
1.6. В Вирус хризантемы
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объект исследования
2.2. Культура изолированных тканей хризантемы
2.2.1. Техника культивирования i vi
2.2.2. Условия культивирования
2.2.3. Статистическая обработка результатов
2.3. Выделение тотальной РНК из расти тельной ткани
2.3.1.Выделение тотальной растительной РНК тризольным
методом
2.3.2. Выделение тотальной растительной РНК по модифицированному методу Хомчинского
2.3.3. Выделение тотальной растительной РНК на основе i
2.4. Обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция

2.5. Электрофорез нуклеиновых кислот
2.6. Выделение амплифицированных фрагментов из продукта
2.7. Секвснированис продуктов
ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. Методы выделения тотальной РНК
3.2.Идентификация В вируса хризантем методом
3.2.1.Характеристика праймеров, используемых для выявления
ВВХ методом
3.2.2. Влияние концентрации РНК хризантем для обратной транскрипции на протекание
3.3. Анализ ВВХ в растениях некоторых сортов хризантем, выращиваемых в условиях теплицы
3.4. Анализ нуклеотидной последовательности изолята ВВХ, распространенного в растениях хризантем
3.5. Введение нолевых клонов хризантем в культуру i vi
3.5.1. Изолирование и стерилизация первичных эксплантов
3.5.2. Изучение морфогенетического потенциала различных эксплантов хризантем
3.5.3. Культивирование черенков хризантем i vi
3.5.4. Зависимость микроразмножения хризантем i vi от состава питательной среды и условий выращивания
3.6. Оздоровление посадочного материала от ВВХ
3.6.1. Схема получения оздоровленных растений хризантем
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Более чем за летнию историю культуры создано около сортов хризантем, часть из которых используют в кулинарии, в фармацевтической промышленности, а также в качестве инсектицидов. В настоящее время существует много различных сортов хризантем отечественной и зарубежной селекции, которые являются перспективными для использования их в озеленении, особенно в южных районах Российской Федерации. Для выращивания в средней полосе европейской части России предпочтение отдают финским, немецким, английским, голландским и местным сортам французские и китайские используют на юге. Выращивание хризантем часто связано с физиологическими проблемами. Например, культивирование растений в условиях ограниченного пространства питания часто приводит к угнетению роста, нарушению образования бутонов и развитию дегенеративных цветков, поражению листьев. Данные физиологические отклонения могут привести к гибели растения Миронова, . Вегетативное размножение хризантем связано с существенным накоплением в их искусственных популяциях различных заболеваний. Основной урон цветочной продукции наносят в этом случае вирусные заболевания, которые не поддаются химическому контролю. Наибольшее распространение в растениях хризантем получил В вирус хризантем ВВХ, который приводит к снижению качества товарной продукции и привлекательности для покупателя. Цели и задачи исследований идентификация в растениях хризантем ВВХ и создание коллекции i vi оздоровленного посадочного материала. Подбор оптимального метода выделения тотальной РНК из тканей хризантем. Подбор оптимальных условий для проведения . Анализ ВВХ в растениях некоторых сортов хризантем, выращиваемых в тепличных условиях. Введение полевых клонов хризантем в культуру i vi. Изучение морфогенетического потенциала различных эксплантов хризантем i vi. Изучение зависимости микроразмножения хризантем i vi Создание коллекции i vi оздоровленного посадочного материала и тестирование пробирочных растений на наличие вируса. Научная новизна и значимость. Оптимизирована методика диагностики ВВХ, включающая протокол выделения РЫК, набор праймеров и условия метода . Выявлены сорта Помпон сиреневый и Лучистая, способные подавлять влияние В вируса хризантем. Установлена степень гомологии между штаммом ВВХ, распространенным на территории Главного Ботанического сада, и штаммами i и , которая составила соответственно. В результате проведенных экспериментов усовершенствована технология клонального микроразмножения хризантем, позволяющая получать до 0 тыс. Выявлено, что распространение В вируса хризантем в пробирочных растениях неравномерное, причем максимальная его концентрация отмечается в нижних ярусах растений. Проведенные исследования показали, что использование в качестве транспланта при клональном микроразмножении хризантем только верхней части пробирочных растений макс. Практическая ценность исследований. Полученные данные свидетельствуют о том, что подобранная методика по идентификации ВВХ может быть применена для тестирования различных сортов хризантем на наличие вируса у растений разного происхождения. Обнаружены два сорта Помпон сиреневый, Лучистая, способные подавлять влияние В вируса хризантем, которые являются перспективными для дальнейшего их применения в селекционном процессе. Усовершенствованная технология клонального микроразмножения хризантем направлена на повышение эффективности их производства. Разработанная схема получения оздоровленных растений хризантем может быть применена для производства качественного посадочного материала, а также при проведении селекционных работ. Апробация работы. Н.И. Вавилова фундамент развития отечественного и мирового сельского хозяйства Москва, , на Международной конференции молодых ученых Фундаментальные и прикладные аспекты современной биотехнологии Брянск, , на Международной научной конференции Проблемы биоэкологии и пути их решения Саранск, , на Международной конференции молодых ученых Вклад молодых ученых в развитие инноваций в аграрной науке Москва, .