Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО
Богданова, Валентина Саттаровна
03.00.23
Кандидатская
2007
Щёлково
139 с. : ил.
Стоимость:
499 руб.
СОКРАЩЕНИЯ
Цель и задачи исследования
Научная новизна работы
Практическая значимость
Положения, выносимые на защиту
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. РЕПРОДУКТИВНЫЙ и РЕСПИРАТОРНЫЙ СИНДРОМ СВИНЕЙ (РРСС)
1.1. Патогенез
1.1.1. Клинические признаки РРСС
1.1.2. Паталогоанатомические изменения при РРСС
1.2. Эпизоотология РРСС
1.3. Биология вируса РРСС
1.3.1. Морфология
1.3.2. Физико-химические свойства вируса РРСС
1.3.3. Организация генома вируса РРСС
1.3.4. Белки вируса РРСС
1.3.4.1. Неструктурные белки вируса РРСС
1.3.4.2. Структурные белки вируса РРСС
1.3.4.2.1. Минорные структурные белки вируса РРСС
1.3.4.2.2. 0сновные структурные белки вируса РРСС
1.3.5. Репликация вирусов РРСС
1.4. Профилактика и контроль
1.4.1. Неспецифическая профилактика РРСС
1.4.2. Вакцинация против вируса РРСС
1.5. Диагностика РРСС
II. ЦИРКОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СВИНЕЙ
II. 1 .Патогенез
II. 1.1. Клинические признаки цирковирозов и механизм патогенеза
II.1.2. Паталогоанатомические изменения
ІІ.2. Эпизоотология цирковирозов
ІІ.З Биология ЦВС
II.3.1. Морфология
II.3.2. Физико-химические свойства цирковирусов
II.З.З. Организация генома
II.3.4. Главный структурный капсидный белок ЦВС
II.3.5. Репликация цирковирусов
II.4. Профилактика и контроль
II.4.1. Неспецифическая профилактика цирковирозов
II.4.2. Вакцинация
II.5. Диагностика цирковирозов
III. БЕЛКИ СЛИЯНИЯ (ХИМЕРНЫЕ БЕЛКИ) И МЕТАЛЛО-ХЕЛАТНАЯ АФФИННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ КАК МЕТОД ИХ ОЧИСТКИ
Заключение по обзору литературы
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Синтез рекомбинантных белков: нуклеокапсидного белка N (ОКТ7) вируса РРСС и
капсидного белка С (СЖР2) ЦВС-2 - в клетках насекомых
Синтез рекомбинантных белков: нуклеокапсидного белка N (СЖР7) вируса РРСС и
капсидного белка С (СЖР2) ЦВС-2 в прокариотической системе экспрессии
Очистка рекомбинантных белков методом металло-хелатной аффинной
хроматографии (МХАХ)
Непрямой иммуноферментнтный анализ (ИФА)
Реакция непрямой иммунофлуоресценции (РИФ)
Статистические расчеты и графики
РЕЗУЛЬТАТЫ
СИНТЕЗ, ОЧИСТКА И ПРИМЕНЕНИЕ В ИФА РЕКОМБИНАНТНЫХ
АНТИГЕНОВ ВИРУСА РРСС
Рекомбинантный белок N вируса РРСС, синтезированный в прокариотической
системе экспрессии
СИНТЕЗ, ОЧИСТКА И ПРИМЕНЕНИЕ В ИФА РЕКОМБИНАНТНЫХ
АНТИГЕНОВ ЦВС
Рекомбинантный белок С цирковируса свиней второго типа (ЦВС-2), синтезированный в прокариотической системе экспрессии
3.ОБСУЖДЕНИЕ
Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС)
Цирковирозы
4.ВЫВОД Ы
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
Выделение РНК вируса РРСС и ДНК ЦВС-2. Суммарные: РНК вируса РРСС и ДНК ЦВС-2 выделяли с использованием тризола (Trizol, “Life Technologies”, США) по методике производителя: соответственно из монослоя клеток MARC-145, зараженных вирусом РРСС (изолятами 201 Rus 01 или NADC8), и из монослоя клеток РК-15, зараженных ЦВС-2 (штамм вируса ISU-31).
ОТ - ПЦР на матрице РНК вируса РРСС проводили в одной пробирке. Использовали следующие параметры ОТ-ПЦР: 50°С - 1 час, 94°С
- 40 с; 54°С - 40 с; 72°С - 40 с. (для последнего цикла - 7 мин). Всего - 35 циклов.
ПЦР на матрице ДНК ЦВС-2 проводили в конечном объеме 50 мкл. Реакционная смесь содержала 5 мкл ДНК, 10 пмол каждого праймера, 0.25 мМ каждого dNTP, 5 ед. Taq-полимеразы, 10 мМ Tris-HCl (pH 9.0), 50 мМ КС1, 0.1% Triton Х-100, 1.5 мМ MgCl2. Использовали следующие параметры ПЦР: 95°С - 40 секунд, 55°С - 40 секунд, 72°С - 1 мин (для последнего цикла
- 3 мин). Всего - 35 циклов ПЦР.
Сыворотки. Для анализа на наличие антител к вирусу РРСС использовали сыворотки крови иммунных и неиммунных свиней из хозяйств России и Беларуси, референтные отрицательные сыворотки свиней, предоставленные Dr. Sandor Beliak (Национальный институт ветеринарии, Уппсала, Швеция), а также положительные полевые сыворотки, отобранные с применением набора “Porcine Reproductive and Respiratory Virus Antibody Test Kit ” (IDEXX, США).
Для анализа на наличие антител к ЦВС-2 использовали сыворотки крови свиней из неблагополучных хозяйств, предоставленные профессором Б.Г. Орлянкиным (НПО НАРВАК, Москва), и референтные положительные и отрицательные сыворотки, полученные из Центральной Ветеринарной лаборатории (Вейбридж, Англия) и Государственного Университета штата Айова (США).
Название работы | Автор | Дата защиты |
---|---|---|
Совершенствование биотехнологического производства и методов контроля качества пробиотиков на основе бифидобактерий и лактобацилл | Младзиевская, Юлия Артуровна | 2005 |
Разработка новой кормовой добавки для крупного рогатого скота, содержащей связанную форму селена | Нимацыренова, Любовь Георгиевна | 2009 |
Влияние генов rol агробактерий на процессы роста и вторичного метаболизма в культурах трансгенных клеток Rubia cordifolia | Шкрыль, Юрий Николаевич | 2005 |