Развитие реконструированных клеток млекопитающих при различных способах их активации

• Автор: Алгулян, Армен Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Боровск
• Количество страниц: 154 с. : ил.

1.1. История развития технологии клонирования животных путм

трансплантации ядер.

1.2. Роль ионов Са в активации яйцеклеток при оплодотворении

1.3. Внутриклеточная сигнализация

1.4. Микроскопические и субмикроскопические изменения в

яйцеклетках в процессе активации

1.5. Молекулярные механизмы выхода яйцеклеток из мейотического

1.6. Влияние возраста ооцитов на их активацию

1.7. Искусственные активаторы

1.8. Влияние ингибиторов протсинкиназьт на активацию яйцеклеток.

СОБСТВЕР1НЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

I. Объекты и методы исследований.
2.1. Получение клеток источников цитопластов.
2.2. Получение клеток источников кариопластов
2.3. Реконструирование клеток
2.4. Слияние кариопластов с цитопластами.
2.5. Активация цитопластов.
2.6. Культивирование реконструированных и партеногенетически
активированных клеток.
III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Изучение действия факторов на процесс искусственной активации яйцеклеток и развитие партеногснетических и реконструированных мышиных эмбрионов i vi
3.1.1. Изучение действия этанола на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетическ1гх и
реконструированных мышиных эмбрионов i vi
3.1.2. Изучение действия прямоугольного импульса постоянного тока на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов i vi.
3.1.3. Изучение действия переменного электрического поля на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее партеногенетическое развитие мышиных эмбрионов i vi.
3.1.4. Изучение действия кальциевого ионофора на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партсногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов i vi
3.1.5 Изучение действия хлористого стронция на процесс искусственной активации яйцеклеток и последующее развитие партеногенегиче ских и реконструированных мышиных эмбрионов i vi.
3.2. Сравнительное изучение эффективности различных способов активации мышиных яйцеклеток и реконструированных эмбрионов
3.2.1. Изучение эффективности различных способов искусственной активации мышиных яйцеклеток к партеногенетическому
развитию.
3.2.2. Изучение эффективности различных способов искусственной активации реконструированных мышиных эмбрионов на их развитие i vi
3.2.3. Изучение влияния осмотического давления среды в период искусственной активации на развитие партеногенетических и реконструированных мышиных эмбрионов i vi.
3.3. Определение оптимальной системы искусственной активации яйцеклеток и реконструированных эмбрионов крупного рогатого
3.3.1. Изучение эффективности различных способов искусственной активации к партеногенетическому развитию яйцеклеток крупного рогатого скота, дозревавших i vi
3.3.2. Изучение эффективности активации кальциевым ионофором реконструированных эмбрионов рогатого скота, дозревавших i vi
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


IV Международной конференции Актуальные проблемы биологии в животноводстве г. Боровск, сентября г. VI Международной научной конференции Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных п. Дубровицы, декабря г. IV съезде Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова г. Пущино, декабря г. IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова г. Пущино, декабря г. VII международной научной конференциишколы Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных роль нанотехнологий в реализации приоритетных задач биотехнологии п. Дубровицы, октября г. Термин клон происходит от греческого слова , что означает веточка, побег, черенок, и имеет отношение, прежде всего К вегетативном размножению. Клонирование подразумевает способность ядер клеток взрослого организма обеспечивать развитие другого взрослого организма. Эта способность впервые была продемонстрирована на клетках моркови и табака. Любая дифференцированная клетка, имеющая неповрежденное ядро, обладает полным набором генов, необходимых для формирования целого организма. Однако в процессе дифференцировки часть генов выключается и функционально активны только некоторые из них, которые определяют свойства и функции данной ткани. У растений гаметы образуются из соматических клеток, поэтому нет ничего удивительного в том, что единичная клетка может давать начало другому типу клеток и сформировывать генетически однородный клон. У животных же половые клетки обособляются довольно рано в ходе эмбриогенеза и только в процессе полового размножения, при котором происходит слияние мужской и женской гамет, образуется зигота, обладающая свойствами плюри и тотипотентности и, то есть, способна дать начало целому организму и дифференцироваться в клетки любой ткани взрослого организма. Этим существенным отличием и объясняется главное препятствие в клонировании позвоночных животных. Клонирование млекопитающих это одна из актуальных проблем современной биологии, однако, эффективность технологии клонирования до сих пор остатся невысока. Большая часть реконструированных эмбрионов не развивается далее ранних эмбриональных стадий, из родившихся животных около половины не достигают взрослого состояния. Изучение фундаментальных основ экспрессии генов и ее контроля поможет объяснить причины и, возможно, избежать данных трудностей. В начале х годов американские исследователи Бриггс и Кинг в опытах на амфибиях разработали микрохирургический метод пересадки ядер эмбриональных клеток с помощью тонкой стеклянной пипетки в лишенные ядра энуклеированные яйцеклетки i . Они установили, что если брать ядра из клеток зародыша на ранней стадии его развития бластуле, то примерно в случаев зародыш развивается дальше и превращается в нормального головастика. Если же развитие зародыша, донора ядра, продвинулось на следующую стадию гаструлу, то лишь менее чем в случаев оперированные яйцеклетки развивались нормально. Большой вклад в эту область внес английский биолог Грдон. Он первым в опытах с южноафриканскими жабами X vi в качестве донора ядер использовал не зародышевые клетки, а уже вполне дифференцированные клетки эпителия кишечника плавающего головастика , . Ядра яйцеклеток реципиентов он не удалял хирургическим путем, а инактивировал генетический материал при помощи ультрафиолетового облучения. В большинстве случаев реконструированные яйцеклетки не развивались, но примерно десятая часть их них образовывала эмбрионы. В последующих работах, как сам автор, так и многие другие исследователи не смогли подтвердить данные этих первых опытов. Позже Грдон модифицировал эксперимент , . Поскольку большинство реконструированных яйцеклеток с ядром клетки кишечного эпителия погибали до завершения стадии гаструлы, он попробовал извлечь из них ядра на стадии бластулы и снова пересадить их в новые энуклеированные яйцеклетки серийная пересадка. Число зародышей с нормальным развитием после этого увеличивалось, и они развивались до более поздних стадий по сравнению с зародышами, полученными в результате первичной пересадки ядер.