Особенности трансмиссии ядер у ядерно-цитоплазматических гибридов Saccharomyces cerevisiae

• Автор: Артемов, Алексей Вячеславович
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 106 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 Обзор литературы.

1.1 Мутация и е использование для получения и исследования гетерокарионов у дрожжейсахаромицетов.

1.2 Дпоптоз у дрожжей.

1.3 Основные свойства прионов у низших эукариот.

ГЛАВА 2 Материалы и методы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3 олучение и анализ гетерокарионов со скрытым ядром.

ГЛАВА 4 Влияние сочетания аллелей локусов МАТ и 1 на

выживаемость зигогических клонов.

ГЛАВА 5 Влияние аллелей iена 1 на се1регацию ядра в первую
почку гетсрокариона, а также на деградацию ядер в зиготе.
ГЛАВА 6 Влияние задержки роста зигот на ядерную трансмиссию и
накопление при различных комбинациях аллелей МАТ и 1
ГЛАВА 7 Влияние цитоплазматически наследуемых факторов на
ядерную трансмиссию и деградацию ядер в гетерокарионах.
7.1 Влияние разных цитоплазматических воздействий на селекцию ядра, сегрегирующего в первую почку.
7.2 Влияние разных цитоплазматических воздействий на
ядерную деградацию.
ГЛАВА 8 Проверка гипотезы об участии прионов в ядерной
трансмиссии у гетерокарионов.
ГЛАВА 9 Цитологические признаки апоптоза в гетерокарионах.
ГЛАВА Обсуждение результатов.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Этой органеллой является полярное тельце веретена i или в дальнейшем изложении будет использоваться русская транскрипция ПТВ. Благодаря ПТВ в клетке образуется биполярное веретено, нити которого обеспечивают митотическое деление и баланс хромосом. Г1ТВ представляет собой диск, встроенный в ядерную мембрану, который состоит из трех отдельных пластов см. Наружный слой используется для построения цитоплазматических микротрубочек, в то время, как внутренний для построения внутриядерных. Такая организация ПТВ позволяет клетке осуществлять независимую регуляцию цитоплазматических и внутриядерных микротрубочек, отличающихся своими функциями. Цитоплазматические определяют ориентацию веретена и ядра перед расхождением хромосом. Они участвуют в миграции ядер в почку в анафазе и в слиянии ядер при коньюгации. Внутриядерные микротрубочки нужны для хромосомной сегрегации. Гаплоидный геном дрожжейсахаромицетов содержит хромосом, и их сегрегация в анафазе осуществляется ю микротрубочками. Дополнительные 8 микротрубочек обеспечивают связи между двумя полярными тельцами 2. Недавно с помощью электронной микроскопии была обнаружена структура, которая как якорь притягивает НТВ к оболочке ядра 3. При этом ПТВ меняется в зависимости от геномной плоидности клетки. Рисунок 1. Полярное тельце веретена . НТВ 5. Если в гаплоидной клетке ПТВ имеет 0 нм в диаметре, то в диплоидной 0 нм. Очевидно, величина ПТВ и количество микротрубочек зависят от контакта с определенными сайтами ядерной мембраны. В дополнении к своей роли в организации микротрубочек, ПТВ служит местом прикрепления проспоровых мембран во время мейоза 6. В течение клеточного цикла ПТВ воспроизводится только один раз, при этом внутри ядра формируется биполярное веретено. Удвоение можно наблюдать в конце предыдущего клеточного цикла в виде появления структуры полумоста i 7 см. Белки этой структуры участвуют в контроле за дубликацией ПТВ. Были открыты два белка компонента структуры полумоста, вовлеченные в процесс публикации белок и 8,9. Белок кДа, как было показано значительно раньше , 1, играет важную роль в кариогамии при скрещивании. Роль гена 1 в митозе была выявлена в х годах, когда удалось показать его участие в транспорте центрина в полярное тельце веретена . Двойная функция белка обеспечивается двумя соседними доменами в его центральной части , . Считается, что участок белка, состоящий из аминокислот, расположенный ближе к Сконцу, ответственен за прикрепление НТВ к ядерной мембране на границе с полумостом. Это следует из того, что соответствующий участок необходим и достаточен для локализации белка слияния ПТВ. Делении в соответствующем участке гена вызывают блок дубликации ПТВ, но не мешают ядерному слиянию. Функция так называемого ПТВ домена , ответственного за удвоение НТВ, может выполняться другими белками. Это было показано в эксперименте, в котором доминантные супрессорные мутации в гене 3I исправляли дефект репликации ПТВ, вызванный делецией НТВ домена в ,,. терминальный домен белка , ответственный за кариогамию, связывается с белком ПТВ, названным , причем это связывание зависит от фазы жизненного цикла и от обработки феромонами. Стерминальный район белка участвует в выполнении обеих функций ПТВ, т. В течение фазы 1 такие события, как возникновение почки и дубликация ПТВ, функционально связаны между собой . При этом ПТВ, как было показано в опытах с применением гибридного белка Иммунохимическое окрашивание было обнаружено только для одного из ПТВ в клетках экспоненциально делящейся культуры. Из почкующихся клеток, в которых материнская клетка и почка были четко различимы, окрашивание с помощью антител на ПТВ структур, принадлежащих почкам. Таким образом в норме, то есть в клетках дикого типа, сегрегация ПТВ в ходе митоза между материнской и дочерней клетками преимущественно поляризована в почку отходят в основном вновь синтезированные белки, ассоциированные с ПТВ , .